碳點(diǎn)標(biāo)記IgG的熒光免疫分析法檢測(cè)蛋白A和蛋白G.pdf

1、碳點(diǎn)(CDs)是最近發(fā)現(xiàn)的一類強(qiáng)熒光且發(fā)射顏色可調(diào)的納米粒子，具有毒性低，生物相容性好，光穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)在分析和生物分析領(lǐng)域表現(xiàn)出巨大潛力，有希望成為理想的熒光標(biāo)記物。金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)和鏈球菌蛋白G(SPG)分別作為致病菌金黃色葡萄球菌和G群鏈球菌的表面蛋白，均能夠與免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段結(jié)合。本論文以SPA和SPG作為檢測(cè)對(duì)象，并對(duì)CDs的合成、表征、羧基化及進(jìn)一步標(biāo)記IgG展開了一系列研究，主要包括以下幾個(gè)方

2、面:
　　1、CDs的合成與表征
　　本文以檸檬酸和乙二胺為原料，水熱法合成了量子產(chǎn)率高達(dá)75.3％的CDs，通過掃描傅里葉轉(zhuǎn)換紅外光譜和紫外-可見吸收光譜對(duì)CDs進(jìn)行表征。結(jié)果表明所合成的CDs表面含氧基團(tuán)豐富，表現(xiàn)出良好的水溶性，易于功能化及卓越的發(fā)光性能。此外，CDs的發(fā)射波長(zhǎng)不隨激發(fā)波長(zhǎng)的改變而改變。因此，CDs作標(biāo)記物為熒光免疫分析、生物成像及生物傳感等方面的研究提供了新機(jī)遇。
　　2、CDs標(biāo)記人IgG檢測(cè)

3、金黃色葡萄球菌蛋白A
　　CDs表面的羥基轉(zhuǎn)化成羧基有助于抗體共軛，本文利用NaOH和ClCH2COONa超聲法對(duì)CDs進(jìn)行羧基化處理。加入EDC和NHS使羧基化的CDs與人IgG(hIgG)共價(jià)結(jié)合，得到CDs-hIgG共軛物。傅里葉轉(zhuǎn)換紅外光譜、紫外-可見吸收光譜和熒光偏振度均表明CDs成功標(biāo)記在hIgG上，且體系的熒光強(qiáng)度隨著SPA濃度的增大而增強(qiáng)。最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定SPA，在0.1-5.0μg/mL線性范圍內(nèi)得到了線性回歸

4、方程，檢出限為0.04μg/mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.41％?？蛇\(yùn)用該方法對(duì)實(shí)際樣品中的SPA進(jìn)行檢測(cè)。
　　3、CDs標(biāo)記羊抗人IgG檢測(cè)鏈球菌蛋白G
　　本文對(duì)CDs進(jìn)行羧基化處理，并與羊抗人IgG(gIgG)共價(jià)結(jié)合，形成CDs-gIgG共軛物。多種表征結(jié)果證明CDs-gIgG共軛物的存在。向CDs-gIgG中加入不同濃度的SPG，體系的熒光增強(qiáng)，且程度較SPA更為顯著。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，體系的熒光強(qiáng)度變化率(F-F0)