三-(2,3-二溴丙基)異氰脲酸酯對斑馬魚雄性生殖和胚胎的毒性研究.pdf

1、三-（2，3-二溴丙基）異氰脲酸酯(TBC)作為一種新型的含溴阻燃劑近些年來已經(jīng)被人類廣泛的使用。TBC在環(huán)境中可保持較強的穩(wěn)定性及生物聚集性，因而對環(huán)境具有潛在的危害性，但目前關(guān)于TBC對生態(tài)系統(tǒng)的危害性的研究還較少。斑馬魚作為一種新型的模式生物在環(huán)境毒理領(lǐng)域已得到越來越廣泛的應用與研究。本文以成年雄性斑馬魚和斑馬魚胚胎作為研究對象，探討了TBC、E2(17β-雌二醇)單一暴露以及TBC與E2聯(lián)合暴露對斑馬魚雄性生殖系統(tǒng)和胚胎的毒性作

2、用及潛在的致毒機制。
　　將成年雄性斑馬魚暴露于0.1％DMSO（對照組）、5mg/LTBC、25mg/LTBC、2.5mg/LE2及5mg/LTBC+2.5mg/LE2中7天，記錄斑馬魚的死亡率;而后將雄魚解剖取精巢，利用透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TBC對成年雄性斑馬魚無明顯的致死作用，但會破壞精子超微結(jié)構(gòu)，導致精子發(fā)育畸形。將成年雌性斑馬魚暴露于0.1％DMSO、5mg/LTBC、25mg/LTBC、2.5mg/LE

3、2及5mg/LTBC+2.5mg/LE2中7天，記錄斑馬魚的死亡率;并將各組雌性成魚與正常雄魚進行交配，記錄各組雌魚的產(chǎn)卵量及產(chǎn)卵率并統(tǒng)計各組雌魚所產(chǎn)胚胎的孵化率、致畸率以及致死率等。結(jié)果發(fā)現(xiàn)單一TBC暴露7天對成年雌性斑馬魚無明顯致死作用，但會影響引起雌魚產(chǎn)卵率及產(chǎn)卵量的下降，并且會降低子代胚胎72hpf的孵化率，引起120hpf幼魚的畸形，且隨著TBC濃度的升高，毒性作用亦增強。E2單一暴露7天會顯著引起成年雌魚的死亡，并且會顯著降

4、低雌魚的產(chǎn)卵率及產(chǎn)卵量。
　　為了分析TBC對斑馬魚胚胎的毒性效應，將2hpf的斑馬魚胚胎暴露于0.2、1、5和25μg/mL的TBC中，并且在24、72、120hpf三個時間節(jié)點對胚胎進行形態(tài)學的觀察和統(tǒng)計。實驗結(jié)果顯示，TBC對斑馬魚胚胎72hpf孵化率的抑制作用和120hpf致畸作用呈現(xiàn)出劑量效應(P＜0.01)，但是在120hpf后，經(jīng)TBC暴露的胚胎未出現(xiàn)明顯的死亡(P＜0.05);計算得出TBC的EC50為1.248μ

5、g/mL。
　　為了進一步觀測TBC及E2對胚胎的聯(lián)合致毒效應。將2hpf的斑馬魚胚胎暴露于0.1、0.5、2.5和12.5μg/mL的E2以及0.2、1、5、25μg/mL的TBC+2.5μg/mLE2中。在24、48、72、120hpf四個時間節(jié)點對胚胎進行形態(tài)學的觀察和統(tǒng)計，收集胚胎進行RT-PCR，觀測幼魚體內(nèi)VTG和ER-α基因表達量的變化。實驗結(jié)果顯示，單一E2暴露會顯著地引起斑馬魚胚胎的死亡（P＜0.01），且顯著降

6、低了斑馬魚胚胎的孵化率(P＜0.01);而在120hpf,TBC會導致幼魚的體位異常（側(cè)體位）、脊椎彎曲和尾部彎曲等畸形形態(tài)的出現(xiàn)，E2不僅會引起幼魚體位異常（側(cè)體位）、脊椎彎曲和尾部彎曲，還會引起心包囊腫、尾部延伸畸形等不同的畸形形態(tài);E2的EC50為0.968μg/mL和LC50為2.834μg/mL;當TBC與E2聯(lián)合暴露時，在120hpfTBC可以減少因E2暴露而引起的胚胎死亡（P＜0.05），且會抑制因E2暴露而引起的體內(nèi)VT