雙色比率熒光寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)及其在生物分析中的應(yīng)用.pdf

1、端粒酶作為一種核糖蛋白酶，可以催化合成真核細(xì)胞生物染色體末端的端粒重復(fù)序列，延長(zhǎng)端粒的長(zhǎng)度，以至達(dá)到細(xì)胞的“永生”。端粒酶是重要的腫瘤標(biāo)志物之一，近些年來(lái)端粒酶無(wú)疑成為研究的熱點(diǎn)，根據(jù)組織細(xì)胞內(nèi)是否有可檢測(cè)的端粒酶活性，可以判定組織細(xì)胞癌變與否。無(wú)論體外還是體內(nèi)檢測(cè)，對(duì)于端粒酶檢測(cè)的方法都相當(dāng)成熟，并且仍有大量的報(bào)道在探索新的方法。人體端粒酶RNA是端粒酶重要組成之一，充當(dāng)端粒酶催化反應(yīng)過(guò)程中的逆轉(zhuǎn)錄模板。人體端粒酶RNA在正常細(xì)胞和腫

2、瘤細(xì)胞中都普遍存在，可根據(jù)其在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞進(jìn)行腫瘤分級(jí)。然而，對(duì)于人體端粒酶RNA檢測(cè)的熱度遠(yuǎn)不及端粒酶。熒光手段是一種簡(jiǎn)便快捷的檢測(cè)核酸的方法，但往往很多方法都沒(méi)有有效的避免假陽(yáng)性信號(hào)的策略。因此找到一種能高效便捷且具有穩(wěn)定可靠信號(hào)的方法檢測(cè)人體端粒酶RNA成為本論文的研究重點(diǎn)。本論文中，我們基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理設(shè)計(jì)了一種雙色比率熒光寡核苷酸探針，實(shí)現(xiàn)了對(duì)于人體端粒酶RNA的定量檢測(cè)。本文主要架構(gòu)如下:
　　第一章，

3、主要綜述了端粒酶和人體端粒酶RNA并列舉當(dāng)前對(duì)于二者比較經(jīng)典的檢測(cè)方法。同時(shí)也簡(jiǎn)單介紹了熒光共振能量轉(zhuǎn)移的原理及其在化學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。
　　第二章，論述了雙色比率熒光寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)及檢測(cè)原理。合成出探針，并對(duì)探針本身的信號(hào)穩(wěn)定性、選擇性、可逆性等性質(zhì)進(jìn)行了研究與探討，用凝膠電泳技術(shù)對(duì)探針檢測(cè)原理進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明，該探針具有很好的信號(hào)穩(wěn)定性好并且對(duì)目標(biāo)物具有較高的特異選擇性，檢測(cè)過(guò)程中還呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的顏色變化。最后，對(duì)