Ilk1在小鼠睪丸和卵巢中的表達(dá)規(guī)律.pdf

1、雄性哺乳動(dòng)物精子的發(fā)生、成熟是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，精細(xì)胞需要經(jīng)過(guò)變態(tài)發(fā)育而成熟，研究發(fā)現(xiàn)許多基因參與這一生理過(guò)程;雌性哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育和閉鎖是決定配子發(fā)育成熟的關(guān)鍵因素。Elk1是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的作用底物，MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)可以磷酸化Elk1，進(jìn)而激活c-fos的啟動(dòng)子，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖與分化過(guò)程;同時(shí)有研究報(bào)道，Elk1對(duì)細(xì)胞的凋亡有一定的調(diào)節(jié)作用。本課題研究Elk1在雄性小鼠和雌性小鼠性成熟過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律，以探究其對(duì)精子發(fā)生和卵

2、泡發(fā)育的作用。同時(shí)，在小鼠顆粒細(xì)胞中研究過(guò)表達(dá)Elk1對(duì)顆粒細(xì)胞增殖凋亡的影響，推測(cè)Elk1對(duì)卵泡發(fā)育、卵泡閉鎖的調(diào)控機(jī)制。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果如下:
　　 本課題以不同發(fā)育時(shí)期（周齡）小鼠睪丸和附睪石蠟切片為實(shí)驗(yàn)材料，檢測(cè)Elk1的定位和表達(dá)，揭示Elk1在雄性小鼠性成熟過(guò)程中的空間和時(shí)間表達(dá)模式。通過(guò)激素(PMSG，HCG)處理不同時(shí)間的卵巢，利用免疫組織化學(xué)法研究不同發(fā)育階段卵泡中Elk1的表達(dá)定位規(guī)律，揭示Elk1在卵泡發(fā)育中

3、的作用。應(yīng)用顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)模式，檢測(cè)Elk1在顆粒細(xì)胞中的定位模式，以及過(guò)表達(dá)后對(duì)顆粒細(xì)胞增殖水平的影響。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明:(1) Elk1在不同周齡的小鼠睪丸以及附睪中的表達(dá)存在差異。western blot結(jié)果說(shuō)明，小鼠性成熟前Elk1在睪丸中的表達(dá)較高，并且主要在曲細(xì)精管的精原細(xì)胞中表達(dá)，性成熟后表達(dá)量較低，在精子細(xì)胞中也有表達(dá);在附睪中的表達(dá)隨著小鼠周齡的增加呈遞增趨勢(shì)。Elk1的表達(dá)與精子的發(fā)生、成熟過(guò)程有一定的

4、關(guān)聯(lián)，在精原細(xì)胞中一直有較高水平定位，暗示其可能在精原細(xì)胞的進(jìn)一步分化和自我維持中發(fā)揮作用，而在精子細(xì)胞及精子形成過(guò)程中表達(dá)暗示其可能也在此期間發(fā)揮作用。(2)激素處理小鼠卵巢，發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)排卵的過(guò)程中，PMSG能降低卵巢中Elk1的表達(dá)量，差異不顯著;HCG能抑制卵巢中Elk1的表達(dá)，并且這一抑制作用時(shí)間較短。(3)次級(jí)卵泡的初級(jí)發(fā)育階段Elk1蛋白表達(dá)量較低，有腔卵泡與次級(jí)卵泡的表達(dá)量較高且差異不顯著，但是排卵前卵泡的表達(dá)量明顯較有腔