抑食海金藻(Aureococcus anophagefferens)的氮、磷營(yíng)養(yǎng)生理與分子檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、近年,我國(guó)秦皇島沿岸海域接連發(fā)生褐潮,引發(fā)褐潮的關(guān)鍵物種為抑食海金藻。本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象為抑食海金藻,由于抑食海金藻體積微小,在光學(xué)顯微鏡下,難以從環(huán)境中識(shí)別出來(lái)。本實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)氮磷營(yíng)養(yǎng)鹽對(duì)抑食海金藻生理生長(zhǎng)的研究及海水中抑食海金藻的檢測(cè)。目前,人為因素和自然因素導(dǎo)致大量的氮磷營(yíng)養(yǎng)鹽流入海洋環(huán)境中,致使海洋沿岸水體富營(yíng)養(yǎng)化。水體營(yíng)養(yǎng)鹽過(guò)剩使抑食海金藻大量繁殖,由此引發(fā)褐潮形成。
　　在18℃、22℃條件下對(duì)抑食海金藻進(jìn)行純培養(yǎng),我們

2、通過(guò)固定不同P的起始濃度,改變N的加入量來(lái)控制不同的N/P。經(jīng)過(guò)22天的培養(yǎng),在光學(xué)顯微鏡下記錄抑食海金藻的生長(zhǎng)數(shù)量,從而得出抑食海金藻的最適生長(zhǎng)條件。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn):
　　(1)在營(yíng)養(yǎng)鹽濃度相同的條件下,在一定溫度范圍內(nèi),抑食海金藻的生長(zhǎng)速度和最大比生長(zhǎng)率隨著溫度的升高而加快。
　　(2)在同一溫度、同一P的起始濃度培養(yǎng)條件下,抑食海金藻的生長(zhǎng)速度和最大比生長(zhǎng)率隨著N/P濃度的增加而先升高后降低。
　　(3)在同一溫度、

3、同一N/P的培養(yǎng)條件下,抑食海金藻的生長(zhǎng)速度和最大比生長(zhǎng)率隨著P起始濃度的增加而先升高后降低。
　　(4)N,P,溫度過(guò)高或過(guò)低都對(duì)抑食海金藻的生長(zhǎng)繁殖有限制作用,并且在不同的條件下,抑食海金藻的生長(zhǎng)繁殖都有一個(gè)最適生長(zhǎng)范圍。
　　通過(guò)對(duì)秦皇島沿岸東山浴場(chǎng)、老虎石浴場(chǎng)和養(yǎng)殖區(qū)采集22個(gè)站位水樣進(jìn)行分析,建立了檢測(cè)海水中抑食海金藻濃度的方法。本實(shí)驗(yàn)利用熒光定量PCR和葉綠素a的測(cè)定方法檢測(cè)環(huán)境樣品中抑食海金藻的濃度。并將計(jì)數(shù)、

4、熒光定量PCR和葉綠素a三種方法所反映抑食海金藻的濃度建立起相關(guān)性。其結(jié)果發(fā)現(xiàn):計(jì)數(shù)只適合實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng),用于檢測(cè)熒光定量PCR和葉綠素a兩種方法的準(zhǔn)確性;葉綠素a的方法只能用于褐潮發(fā)生時(shí)期檢測(cè)海水中抑食海金藻的濃度,不能應(yīng)用于前期的預(yù)防;熒光定量PCR可用于褐潮發(fā)生的任何時(shí)期及其前期的預(yù)防。
　　通過(guò)對(duì)秦皇島22個(gè)站位的水樣分析發(fā)現(xiàn),在2013年8月,東山浴場(chǎng)和老虎石浴場(chǎng)發(fā)生三級(jí)褐潮(>200,000 cells ml-1),在秦

5、皇島沿岸的養(yǎng)殖區(qū),4個(gè)站位發(fā)生三級(jí)褐潮,6個(gè)站位發(fā)生二級(jí)褐潮(35,000–200,000 cells ml-1);所有的10月份采集的養(yǎng)殖區(qū)站位都發(fā)生一級(jí)褐潮(>0 to≤35,000 cells ml-1)。用測(cè)葉綠素a的方法來(lái)檢測(cè)環(huán)境樣品中抑食海金藻的含量,其結(jié)果與熒光定量PCR的檢測(cè)方法所檢測(cè)出的結(jié)果有所不同,其原因是葉綠素a的方法所測(cè)出的結(jié)果反映的是海水中所有微藻的生物量,并非單單是一種藻的濃度,只有當(dāng)褐潮發(fā)生時(shí),海水中抑食海