單細胞酶傳感器的制備及應用.pdf

1、本論文用研制的單細胞酶傳感器對單個嗜酸性粒細胞的釋放物-H<,2>O<,2>進行了研究。論文分為兩章：第一章．單細胞酶傳感器的制備、表征及簡單應用。第二章 單細胞酶傳感器用于單個嗜酸性粒細胞受PMA刺激所釋放的H<,2>O<,2>的定量檢測。 第一章利用光刻和化學腐蝕的技術首先在玻璃平板上加工一個納升的微池陣列，用推片法將單個中性粒細胞置入微池中，并用變性膠原固定，然后用毛地黃皂苷(Dig)進行細胞蝕孔，最后微池中加入支持電解質(zhì)

2、并插入一支復合微電極，制成單細胞酶傳感器。復合微電極由金(Au)圓盤工作電極和Ag/AgCl微參比電極組成，其中Au圓盤電極的直徑為20 μm左右，Ag/AgCl參比電極的直徑為100μm左右。該復合電極是將兩支電極放入一支θ管內(nèi)制成的，其尖端不到200μm，以適合微池內(nèi)檢測微量物質(zhì)的需要。單細胞傳感器對H<,2>O<,2>的測定原理是：利用傳感器上中性粒細胞中所含的過氧化物酶(PO)能夠催化過氧化氫(H<,2>O<,2>)和氫醌(H<

3、,2>Q)的化學反應，生成酶促反應的產(chǎn)物一苯醌(BQ)和水，利用微電極對電活性產(chǎn)物BQ的伏安檢測，最終實現(xiàn)對H<,2>O<,2>的測定。制作好的單細胞酶傳感器用于H<,2>O<,2>的測定，重現(xiàn)性良好，結果滿意。本章有兩個難點，一是在復合電極制作過程中要將工作電極和微參比電極完好地插入θ管內(nèi)，兩者互不接觸，θ管尖端封膠要均勻，不能碰壞電極，能有效防止溶液進入θ管內(nèi)部；二是利用光刻和化學腐蝕法制備微池陣列，并把單個中性粒細胞固定在微池底部

4、。 第二章建立了單細胞酶傳感器定量檢測單個嗜酸性粒細胞的釋放物的新方法。通過推片法將人的單個嗜酸性粒細胞轉移到已裝配有單細胞酶傳感器的微池中，用自制的納升加樣器加入含有化學物質(zhì)佛波酯(PMA)的反應液對嗜酸性粒細胞進行刺激，刺激時間120分鐘，使其釋放出H<,2>O<,2>，用單細胞酶傳感器對釋放物-H<,2>O<,2>進行測定。測定的原理是：受PMA的刺激后，嗜酸性粒細胞能夠釋放出活性氧物質(zhì)，其穩(wěn)定存在形式是H<,2>O