木質(zhì)素降解過程中纖維二糖脫氫酶和漆酶協(xié)同作用的初步研究.pdf

1、本文中對白腐真菌粗毛栓菌YDHSD（Trametes trogii）分泌的漆酶進(jìn)行了純化，并對顯色圈現(xiàn)象中纖維二糖脫氫酶（CDH）和漆酶的協(xié)同作用機制進(jìn)行了初步探討。 對白腐真菌粗毛栓菌YDHSD（Trametes trogii）產(chǎn)漆酶的發(fā)酵條件進(jìn)行了初步研究，結(jié)果表明菌體生長6天漆酶酶活最高，麩皮培養(yǎng)基成本低產(chǎn)酶高。對白腐真菌粗毛栓菌YDHSD（Trametes trogii）產(chǎn)生的漆酶進(jìn)行了純化。純化過程中經(jīng)過冷凍/解凍、超

2、濾、硫酸銨沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析、凝膠過濾層析等方法，得到了初步純化的漆酶，其分子量約為90kDa。 考察了不同的白腐真菌產(chǎn)CDH的情況。白腐真菌粗毛栓菌YDHSD（Trametes trogii）、雜色云芝Sdu-4（Trametes versicolor）、裂褶菌（Schizophyllum commune）、白囊耙齒菌dft-1（Irpex lacteus）和毛栓菌Lg-9（T

3、rametes hirsuta）產(chǎn)纖維二糖脫氫酶（CDH）的酶活都很低，幾乎為零。培養(yǎng)基成分、不同碳源和氮源、CDH酶活測定方法、以及疊氮化鈉對白腐真菌產(chǎn)纖維二糖脫氫酶（CDH）沒有影響。 對顯色圈現(xiàn)象進(jìn)行了初步研究。對不同的有機溶劑對愈創(chuàng)木酚及其降解產(chǎn)物的提取能力進(jìn)行了比較，結(jié)果表明的乙腈和乙酸乙酯的抽提能力較高。對愈創(chuàng)木酚及其降解產(chǎn)物的提取方法的改進(jìn)進(jìn)行了嘗試。此外，還檢測了顯色圈各區(qū)域的漆酶和纖維二糖脫氫酶的酶活，通過紫外

4、可見光譜對變色圈不同區(qū)域的物質(zhì)進(jìn)行了分析。并用從白腐真菌粗毛栓菌YDHSD（Trametes trogii）中分離純化的漆酶和二硫蘇糖醇（DTT）對變色圈現(xiàn)象就行了驗證。認(rèn)為平板顯色圈中的紅色區(qū)域是由于愈創(chuàng)木酚被白腐真菌分泌的漆酶氧化所致，褪色區(qū)域是由于纖維二糖脫氫酶（CDH）把漆酶氧化得到的有色物質(zhì)還原所致，褪色還是顯色反映了是漆酶還是纖維二糖脫氫酶（CDH）起作用。顯色圈的形成是一個氧化還原機制。漆酶和纖維二糖脫氫酶（CDH）在平板