雌激素和拮抗劑對(duì)三疣梭子蟹卵巢發(fā)育及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、池塘養(yǎng)殖三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)卵巢發(fā)育不良是制約其養(yǎng)殖效益的重要因素之一，其卵巢發(fā)育不良可能與體內(nèi)的生殖內(nèi)分泌調(diào)控有關(guān)。雌二醇(Estradiol,E2)是甲殼動(dòng)物體內(nèi)最主要的活性雌激素，但有關(guān)于其對(duì)甲殼動(dòng)物卵巢發(fā)育的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本研究采用E2和雌激素拮抗劑(Tamoxifen,TAM)活體注射技術(shù)，分別研究了不同濃度E2和TAM對(duì)不同卵黃發(fā)生期三疣梭子蟹卵巢發(fā)育及相關(guān)基因表達(dá)水平的影響，旨

2、在為進(jìn)一步研究甲殼動(dòng)物的雌激素調(diào)控機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。具體研究結(jié)果如下:
　　1.外源雌激素對(duì)不同卵黃發(fā)生期三疣梭子蟹卵巢發(fā)育和基因表達(dá)的影響
　　三疣梭子蟹的卵黃發(fā)生過(guò)程分為內(nèi)源性卵黃發(fā)生期和外源性卵黃發(fā)生期兩個(gè)階段。本研究采用活體注射和熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)，分別研究了外源 E2對(duì)內(nèi)、外源性卵黃發(fā)生期雌體成活率、血淋巴中雌激素含量、卵巢發(fā)育及相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果表明:
　　(1)注射外源

3、E2可顯著提高內(nèi)、外源性卵黃發(fā)生期雌體血淋巴中E2的含量;
　　(2)對(duì)處于內(nèi)、外源性卵黃發(fā)生期雌體而言，注射外源E2對(duì)其存活率和肝胰腺指數(shù)(HSI)均無(wú)顯著影響，但外源E2能夠顯著增加內(nèi)源性卵黃發(fā)生期雌體的卵巢指數(shù)(GSI);
　　(3)注射外源E2可顯著促進(jìn)內(nèi)、外源性卵黃發(fā)生期雌體卵巢與肝胰腺中卵黃蛋白原(Vitellogenin,Vg)基因的表達(dá)，就雌激素相關(guān)受體(Estrogen-related receptor,E

4、RR)基因而言，注射外源E2可顯著促進(jìn)內(nèi)源性卵黃發(fā)生期雌體的眼柄和大顎器中，ERR基因的表達(dá)，但對(duì)卵巢、肝胰腺和胸神經(jīng)節(jié)中ERR基因的表達(dá)有一定的抑制作用。對(duì)于外源性卵黃發(fā)生期雌體，外源 E2僅顯著促進(jìn)眼柄中ERR基因的表達(dá)。綜上，外源E2能夠顯著促進(jìn)內(nèi)源性卵黃發(fā)生期雌體的卵巢發(fā)育，但對(duì)外源性卵黃發(fā)生期雌體的卵巢發(fā)育無(wú)顯著促進(jìn)作用,雌激素可能會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)ERR基因的表達(dá)以影響眼柄和大顎器等內(nèi)分泌器官中相應(yīng)激素的分泌來(lái)調(diào)節(jié)卵巢發(fā)育。

5、　　2.不同濃度外源雌激素拮抗劑對(duì)三疣梭子蟹卵巢發(fā)育和基因表達(dá)的影響
　　雌激素是調(diào)控甲殼動(dòng)物卵巢發(fā)育的重要性類固醇激素，TAM是研究雌激素作用機(jī)制的一種常用雌激素拮抗劑。本研究研究了不同濃度TAM對(duì)三疣梭子蟹雌體成活率、GSI、HSI及卵巢發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果顯示:
　　(1)不同濃度TAM對(duì)雌體存活率和HSI均無(wú)顯著影響，但在一定程度上抑制了GSI;
　　(2)外源注射TAM對(duì)三疣梭子蟹不同組織

6、中的Vg、ERR、維甲酸受體(retinoid X receptor,RXR)和蛻皮激素受體(Ecdysone receptor,EcR)基因表達(dá)均產(chǎn)生一定影響：Vg基因在卵巢和肝胰腺中的表達(dá)水平明顯受到TAM的抑制；低濃度TAM組(6.7和13.4μg/g)促進(jìn)了卵巢和胸神經(jīng)節(jié)中的ERR，但高濃度TAM(20μg/g)抑制了大部分組織中的ERR表達(dá)水平；外源注射TAM對(duì)三疣梭子蟹卵巢和肝胰腺中的EcR基因表達(dá)的變化模式與ERR基因基本