納米銀粒抑菌作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、銀在古代被制成各種容器可以起到抑菌作用，在納米技術(shù)發(fā)展的今天，納米銀粒同樣具有抑菌效果，且凸顯出更多的優(yōu)越性，能避免因抗生素亂用導(dǎo)致的微生物抗藥性。但其抑菌機(jī)制的分子機(jī)制和潛在生物安全性仍不明確，因此研究納米銀粒抑菌作用及其機(jī)制，可為納米材料的安全性評(píng)價(jià)提供更為準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)參考標(biāo)準(zhǔn)。
　　本實(shí)驗(yàn)利用市售的納米銀粒（Nanosilverparticles,Np-Ag）檢測了Np-Ag對(duì)大腸桿菌（Escherichacoli）和金黃色葡

2、萄球菌（Staphylococcusaureus）抑菌作用，并研究了對(duì)大腸桿菌的抑菌作用的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)采用抑菌圈和生長曲線法檢測Np-Ag對(duì)菌體的抑菌作用；利用菌體全細(xì)胞蛋白和低分子量蛋白與Np-Ag相互作用，用SDS-PAGE分析了Np-Ag與特定蛋白的選擇性靶向作用；對(duì)其中的兩條靶向蛋白進(jìn)行MALDI-TOF法氨基酸序列測定；并對(duì)18.7kD蛋白基因進(jìn)行克隆表達(dá)；利用體外實(shí)驗(yàn)，初步研究了Np-Ag對(duì)質(zhì)粒DNA（pBV220）和目的

3、蛋白(DPS)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Np-Ag對(duì)革蘭氏陰性（E.coli）和革蘭氏陽性（S.aureus）細(xì)菌都有明顯地抑制作用，其中對(duì)革蘭氏陽性菌抑制作用更強(qiáng)。SDS-PAGE分析說明，無論是低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白還是具體全細(xì)胞蛋白，Np-Ag與蛋白存在相互作用，并存在明顯的靶向性，這種相互作用與蛋白質(zhì)氨基酸序列的極性相關(guān)，而與蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中的氨基酸特異性序列沒有相關(guān)性。其中的兩個(gè)靶向蛋白通過MALDI-TOF測序和序列比對(duì)初

4、步顯示為E.coliDNA結(jié)合蛋白（DPS）和E.coli外膜蛋白（OMP-W）。通過設(shè)計(jì)的特異性引物PCR擴(kuò)增了E.coliDPS全長基因，并構(gòu)建了pBV-DPS表達(dá)載體在原核系統(tǒng)獲得表達(dá)，該蛋白為分子量18.7kD的E.coliDNA結(jié)合蛋白（DNA-bindingproteinfromstarvedcells,DPS）,屬于細(xì)菌鐵結(jié)合蛋白。體外初步實(shí)驗(yàn)證實(shí)，Np-Ag對(duì)質(zhì)粒DNA（pBV220）沒有明顯的吸附和降解作用，但對(duì)質(zhì)粒構(gòu)