一、家庭裝潢有害氣體致F-,1-代小鼠ESTR遺傳突變研究二、JWA調(diào)節(jié)MIP-1α誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞遷移的研究.pdf

1、室內(nèi)空氣質(zhì)量對人體健康的影響是不容忽視的問題。目前我國市場上出售的裝飾材料中，合成材料和化學(xué)產(chǎn)品占了很大一部分，因而在許多現(xiàn)代的建筑物中，揮發(fā)性有機(jī)物(VOCS)等的濃度不斷升高。而包括甲醛在內(nèi)的VOCS等不僅僅污染了室內(nèi)的空氣，它們還在毫無察覺下危害住戶和裝修工人的健康。嚙齒類擴(kuò)展串聯(lián)重復(fù)序列(ESTR)DNA是一種包括了4-6個(gè)堿基的重復(fù)單位的長的串聯(lián)序列。它們在種系中是不穩(wěn)定的，會由于插入或缺失了若干個(gè)重復(fù)單位而產(chǎn)生突變。ESTR

2、為在更小樣本量的實(shí)驗(yàn)小鼠，暴露于更低劑量的誘變劑而進(jìn)行的誘導(dǎo)突變的檢測提供了有效的遺傳學(xué)檢測手段。本研究的目的在于利用ICR實(shí)驗(yàn)小鼠亞慢性暴露于新裝修居室的空氣中以及甲醛的急性吸入染毒模型，研究這些因素對小鼠ESTR位點(diǎn)遺傳穩(wěn)定性的影響。 暴露首日的檢測中發(fā)現(xiàn)，新裝修居室中TVOC、甲醛、苯、氨的濃度分別是對照地的12、3、3.6、3.18倍和IAQ的3.6、22、6.75、1.75倍。對照地的甲醛濃度在10周暴露期間始終低于0

3、.08 mg/m<'3>的空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。而新裝修居室中的甲醛濃度一直隨時(shí)間而下降，從起始的0.22 mg/m<'3>到10周后的0.084 mg/m<'3>。各組小鼠從首日至16周后交配這段時(shí)間體重和身體條件無明顯差異。亞慢性暴露組、急性吸入染毒組小鼠的產(chǎn)仔率和產(chǎn)仔數(shù)分別與對照組相比無顯著差別。 通過對親本和子代DNA的SOUthem雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，亞慢性暴露與急性甲醛吸入染毒都會提高F<,1>代小鼠Ms6-hm位點(diǎn)

4、的遺傳突變率。通過比對southern雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果中子代相比較親代偏移的條帶的來源發(fā)現(xiàn)，亞慢性暴露組和急性吸入染毒組的子代遺傳于父本的條帶的突變率相比較于對照組則分別都有顯著的變化。相反對母本卻沒有影響。 綜上所述，本研究初步探討了新裝修居室中甲醛等揮發(fā)性有機(jī)物對ICR小鼠ESTR位點(diǎn)的遺傳突變率的影響。結(jié)果表明新裝修的居室中許多空氣質(zhì)量指標(biāo)都超過對照和空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，而亞慢性空氣暴露和急性的甲醛吸入對小鼠的體重、身體狀況、產(chǎn)仔數(shù)

5、和產(chǎn)仔率的都沒有明顯的影響，但顯著增加F<,1>代小鼠ESTR位點(diǎn)的遺傳突變率，并且父本的減數(shù)分裂前的生殖細(xì)胞是最為敏感的。進(jìn)一步對污染空氣誘導(dǎo)的ESTR突變的機(jī)制的研究，一方面將會進(jìn)一步完善ESTR這一遺傳學(xué)工具的原理，另一方面可以為我們制定更有效和合理的空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保護(hù)人體健康提供科學(xué)依據(jù)。 一些腫瘤細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體，其重要的特性可能與腫瘤細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。趨化因子及其受體在廣泛的急、慢性炎癥反應(yīng)、血管生成、免

6、疫調(diào)節(jié)、造血祖細(xì)胞的增殖調(diào)節(jié)、抗腫瘤以及抗HIV-1感染中發(fā)揮重要作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)，JM4可以與CCR5共沉淀，同時(shí)還對CCR5受體的運(yùn)輸和膜定位起作用。JM4作為一種廣泛表達(dá)的蛋白，與JWA(GenBank：AF070523，1998)有62％序列的同源性。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族與細(xì)胞增殖、分化、凋亡和遷移的進(jìn)程有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)JWA可能是一種新的MAPK

7、家族成員，我們先前的研究證實(shí)了JWA蛋白是一種新的微管相關(guān)蛋白(MAPs)，它與α-和β-微管蛋白結(jié)合并共定位。由于MIP-α可以誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的遷移，所以本實(shí)驗(yàn)的主要目的在于研究JWA在MIP-1α可以誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的遷移中的作用以及其中相關(guān)的機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)JWA和CCR5在內(nèi)源性表達(dá)這兩種蛋白的MCF-7細(xì)胞內(nèi)有交互作用，而且JWA和CCR5在細(xì)胞內(nèi)的分布比較類似，并在細(xì)胞膜附近共定位。同時(shí)實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)MIP-1α的

8、刺激會使JWA蛋白和CCR5受體的表達(dá)上調(diào)。24孔的趨化小室用于對不同時(shí)間和不同劑量的MIP-1α誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞遷移的研究發(fā)現(xiàn)，100 ng/ml的MIP-1α經(jīng)過24 h能夠最大程度上誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞遷移。通過熱變性的MIP-1α和CCR5抗體中和實(shí)驗(yàn)，證實(shí)MIP-1α誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的特異性以及MIP-1α誘導(dǎo)遷移主要是通過CCR5受體的。 MIP-1α誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的遷移主要是通過激活MEK-ERK1/2磷酸化級聯(lián)的信

9、號通路的。當(dāng)關(guān)閉了JWA的表達(dá)后，MIP-1α無法激活MEK-ERK1/2，同時(shí)也不能在正常幅度下誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的遷移。而用回復(fù)模型發(fā)現(xiàn)，恢復(fù)JWA缺陷的MCF-7細(xì)胞株的JWA表達(dá)以后，MIP-1α又能正常發(fā)揮激活信號通路以及誘導(dǎo)遷移的功能，但如果用JWA磷酸化位點(diǎn)突變的載體做回復(fù)模型，依舊不能恢復(fù)MIP-1α的相應(yīng)功能。提示JWA蛋白在該過程中所起的重要作用主要是依賴于其自身的磷酸化位點(diǎn)能正常發(fā)揮作用。 對JWA和CCR