基于T7核酸外切酶信號循環(huán)放大的microRNA比色傳感檢測新策略.pdf

1、MicroRNA（miRNA）是一類長度為18-23個堿基的內(nèi)源性、非編碼RNA，它與真核細(xì)胞的基因調(diào)控有著重要的關(guān)系。研究表明，miRNA參與了疾病發(fā)生發(fā)展過程中的信號調(diào)節(jié)，并且miRNA的異常表達(dá)與癌癥，神經(jīng)系統(tǒng)疾病及糖尿病等多種疾病有著緊密的聯(lián)系。作為一種新型的生物標(biāo)志物，miRNA具有長度短、豐度低及家族同源性高等特性,使得臨床上實現(xiàn)高靈敏檢測miRNA面臨著巨大的挑戰(zhàn)。因此，建立高靈敏的miRNA定量分析方法是目前亟需解決的難

2、題。
　　本課題建立了一種基于T7核酸外切酶“信號關(guān)閉”的策略，在均相體系中成功實現(xiàn)了對miRNA的可視化檢測。在無靶物質(zhì) miRNA存在時，單鏈捕獲探針無法被T7核酸外切酶剪切，打開含有G4序列的發(fā)夾結(jié)構(gòu)探針，吸光度達(dá)到最大值；在靶物質(zhì)miRNA存在時，miRNA與捕獲探針雜交形成DNA/RNA雙鏈，利用T7核酸外切酶，剪切雙鏈中的捕獲探針，使得捕獲探針濃度大大減小，被打開的發(fā)夾探針數(shù)量減少，從而導(dǎo)致信號降低。在最優(yōu)的實驗條件下