阿斯巴甜和苯甲酸鈉聯(lián)合作用的生物學(xué)效應(yīng)及機(jī)理的初步研究.pdf

1、食品添加劑是現(xiàn)代食品工業(yè)的靈魂。我國食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2014批準(zhǔn)使用的食品添加劑，在單一使用情況下的危害已經(jīng)降到了最低水平，不會影響到食品的安全性。但是，在多元混合物體系中，各組分會發(fā)生交互作用，產(chǎn)生協(xié)同或拮抗或加和的效應(yīng)，導(dǎo)致毒性與單獨(dú)存在時不同，這就對傳統(tǒng)食品毒理學(xué)理論及食品添加劑的風(fēng)險評價提出了新的挑戰(zhàn)。
　　本文首先選取阿斯巴甜、苯甲酸鈉、檸檬黃、對羥基苯甲酸甲酯鈉和日落黃這5種分子結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的食品

2、添加劑作為實(shí)驗(yàn)對象，用MTT法測試它們單獨(dú)使用對大鼠肝臟BRL細(xì)胞的增殖抑制情況。之后，選取了增殖抑制毒性較大的阿斯巴甜、對羥基苯甲酸甲酯鈉和苯甲酸鈉做為聯(lián)合作用試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)阿斯巴甜和對羥基苯甲酸甲酯鈉的聯(lián)合作用類型為相加作用，阿斯巴甜和苯甲酸鈉的聯(lián)合作用類型為協(xié)同作用。
　　接著，以阿斯巴甜和苯甲酸鈉這組聯(lián)合作用的添加劑為主要研究對象，通過測定它們單獨(dú)或聯(lián)合作用處理對BRL細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞周期、微核率、細(xì)胞壞死和凋亡率等影

3、響，探討它們的作用機(jī)制并進(jìn)一步認(rèn)定兩者之間聯(lián)合作用的類型。
　　然后，采用Illumina高通量測序技術(shù)對阿斯巴甜和苯甲酸鈉單獨(dú)或聯(lián)合處理的BRL細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，篩選試驗(yàn)組和對照組內(nèi)差異表達(dá)的基因、開展這些基因的GO富集分析和KEGGPATHWAY代謝通路分析。
　　最后，通過自由飲水的方式，讓小鼠在3個月內(nèi)連續(xù)攝入單獨(dú)或聯(lián)合添加阿斯巴甜和苯甲酸鈉的飲用水，記錄小鼠的體重和生理體征變化，測定其血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶

4、、總膽汁酸含量、丙二醛、超氧化物歧化酶、總抗氧化能力和谷胱甘肽過氧化物酶等生化指標(biāo)的含量，對其心臟、肝臟和腎臟進(jìn)行石蠟組織切片，觀察這些臟器的病理變化。
　　主要結(jié)果和結(jié)論如下:
　　1.5種食品添加劑單獨(dú)作用對BRL細(xì)胞的增殖抑制均與時間和濃度呈現(xiàn)正相關(guān)，毒性大小排序?yàn)?對羥基苯甲酸甲酯鈉＞苯甲酸鈉＞阿斯巴甜＞檸檬黃≈日落黃。
　　2.阿斯巴甜和苯甲酸鈉單獨(dú)和聯(lián)合使用均會抑制BRL的細(xì)胞增殖，并使細(xì)胞周期阻滯在S期或

5、者G0/G1期，增加細(xì)胞微核發(fā)生率、細(xì)胞壞死率和細(xì)胞凋亡率，且阿斯巴甜和苯甲酸鈉的聯(lián)合作用類型為協(xié)同作用。
　　3.轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明，阿斯巴甜處理組、苯甲酸鈉處理組、以及兩者間聯(lián)合處理組，對BRL細(xì)胞脅迫24 h后的差異表達(dá)（在2倍以上）的基因分別有306個、412個和532個。這些差異表達(dá)基因的GO富集和PATHWAY代謝通路富集，初步揭示了這三種不同的環(huán)境暴露條件下對BRL細(xì)胞的分子機(jī)制。
　　4.阿斯巴甜和苯甲酸鈉單