ⅰ，稻瘟病抗性蛋白pi36卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域免疫自激活的分子機(jī)理ⅱ，擬南芥廣譜抗病蛋白rpw8.1與乙烯信號的相互調(diào)控

1、I ，T h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo f t h ea u t o i m m u n i t ym e d i a t e db y c o i l e d - —c o i l d o m a i n o f r i c eb l a s t p r o t e i n P D 6I I ，T h er e g u l a t i o n b e t w e e nA r a b i

2、 d o p s i sr e s i s t a n c e p r o t e i nR P W 8 ．1 a n d e t h y l e n es i g n a l i n gP e n g —q i a n gL i u( P l a n tp a t h o l o g y )D i r e c t e db yP r o f ．W e n —m i n g W a n gA D i s s e r t a t i o

3、nS u b m i t t e d i nP a r t i a l F u l f i l l m e n t o f t h e R e q u i r e m e n t f o rt h eD o c t o r ’SD e g r e eS i c h u a n A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yC h e n g d u S i c h u a n P ．R ．C h i

4、 n aM a y 2 0 1 6I ，稻瘟抗性蛋白P i 3 6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域免疫自激活的分子機(jī)理I I ，擬南芥廣譜抗病蛋白R P W 8 ．1 與乙烯信號的相互調(diào)控摘要第一部分稻瘟抗性蛋白P i 3 6 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域免疫自激活的分子機(jī)理植物在長期與病原菌的共存中進(jìn)化出了許多結(jié)構(gòu)保守的抗病蛋白，這些蛋白往往包含一個(gè)N 端的卷曲螺旋( C C ) 結(jié)構(gòu)域，一個(gè)中部的核苷酸綁定( N B ) 結(jié)構(gòu)域和一個(gè)亮氨酸重復(fù)序列( L R R

5、 ) 。在模式植物擬南芥中有很多C C - N B —L R R蛋白的C C 結(jié)構(gòu)域往往能觸發(fā)自身免疫。但是，是否所有的或者哪些C C 結(jié)構(gòu)域都能夠激發(fā)自身免疫這一問題尚不清楚。此處，我們成功的擴(kuò)增到P i 3 6 , R G A 4 ，R G A 5 ，P i k m ．J ，P i k m 一2 ，P i s h ，P i t a 和P b l 這八個(gè)稻瘟病抗病基因編碼C C 結(jié)構(gòu)域的序列。通過瞬時(shí)表達(dá)試驗(yàn)證明只有P i 3 6 的

6、C C 結(jié)構(gòu)域能夠在本氏煙和水稻原生質(zhì)體中觸發(fā)細(xì)胞死亡。通過酵母雙雜交和雙分子熒光互補(bǔ)試驗(yàn)證明P i 3 6C C 結(jié)構(gòu)域的自身相互作用是其激活細(xì)胞死亡所必需的。而后，證明使用擬南芥抗白粉病蛋白8 ．2 ( Ⅺ，W 8 ．2 ) 的啟動(dòng)子在擬南芥中異位表達(dá)P i 3 6C C 結(jié)構(gòu)域能夠提高擬南芥對白粉菌的抗病性；使用噻菌靈誘導(dǎo)蛋白1 ( P B Z l ) 的啟動(dòng)子在水稻中異位表達(dá)P i 3 6C C 結(jié)構(gòu)域能夠提高水稻對稻瘟菌的抗病

7、性。隨后，使用P i 3 6C C 結(jié)構(gòu)域作為誘餌篩選稻瘟菌侵染后的水稻葉片e D N A 酵母文庫找到P i 3 6C C 結(jié)構(gòu)域的互作蛋白，一個(gè)乙烯信號通路轉(zhuǎn)錄因子O s E I L 2 ，并結(jié)合雙子分熒光互補(bǔ)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)O s E I L 2 為P i 3 6C C 結(jié)構(gòu)域的互作蛋白。構(gòu)建O s E I L 2 過表達(dá)與干涉水稻轉(zhuǎn)基因材料，證明O s E I L 2 正調(diào)控水稻稻瘟病抗病性。綜上，本論文證明稻瘟病抗病蛋白P