環(huán)境因素、cyp2e1基因多態(tài)性及p2739;kip1蛋白表達(dá)與胃癌發(fā)生和發(fā)展關(guān)系的研究

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文環(huán)境因素、CYP2E1基因多態(tài)性及p27蛋白表達(dá)與胃癌發(fā)生和發(fā)展關(guān)系的研究姓名：王雨申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：流行病學(xué)與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師：姜又紅20030401一醫(yī)院腫瘤科確診的原發(fā)性胃癌新病例4 8 名( 其中男性3 l 例、女性1 7 例，年齡范圍：5 0 —7 0 歲) ，對(duì)照為沈陽市第二、第八人民醫(yī)院普通外科同時(shí)期無消化道病史的非腫瘤患者4 8 名( 其中男性2 8 例、女性2 0 例，年齡范圍：5 5

2、～7 2 歲) 。所有研究對(duì)象于入院次日清晨抽取外周血5 m l ，枸櫞酸鈉抗凝，保存于一7 4 ℃的深凍冰箱中，直至提取D N A 。2 ．流行病學(xué)調(diào)查按事先設(shè)計(jì)的調(diào)查表，逐一對(duì)病例和對(duì)照進(jìn)行調(diào)查，內(nèi)容包括：年齡、性別、民族等人口學(xué)指標(biāo)及個(gè)人生活習(xí)慣、飲食情況、既往患病情況和家族史等其它指標(biāo)。3 ．實(shí)驗(yàn)方法( 1 ) 外周血D N A 提取：采用水煮法。取抗凝血0 ．5 r r d ，按1 ：l比例加入裂解液0 ．5 m l ，1 2

3、 0 0 0 r ／r a i n 離心沉淀自細(xì)胞，其上清中含有D N A ，可用作P c R 擴(kuò)增的模板。用7 5 2 分光光度計(jì)測(cè)D N A 純度在1 ．2 —2 ．0 之間，含量1 0 0 —6 0 0 n g ／止。4 ℃保存?zhèn)溆谩? 2 ) C Y P 2 E 1R s aI 位點(diǎn)基因型檢測(cè)：根據(jù)文獻(xiàn)合成引物，采用大連寶生物科技公司的合成引物。P C R 反應(yīng)總體積為5 0 出，其中含模板2 出，引物各2 止，4 1 ．dd

4、N T P ，0 ．5 UT a qD N A 聚合酶( 2 斗1 )以及相應(yīng)的緩沖液。取P C R 產(chǎn)物1 5 止，加入1 0 UR s aI ( 2 出) 和2 出緩沖液，并加雙蒸水至2 0 1 L L l ，充分混勻后于3 7 ℃保溫1 2 小時(shí)。2 ．2 ％瓊脂糖凝膠( 含0 ．5 “g ／m l 溴化乙錠) 電泳，自動(dòng)凝膠電泳成像分析儀上觀察結(jié)果。純合子野生型c l c l 可見3 6 0 b p 條帶，純合子變異型c 2 c