atcngc2在茉莉酸誘導(dǎo)ca39;2動(dòng)員中作用的初步研究

1、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文ATCNGC2在茉莉酸誘導(dǎo)Ca動(dòng)員中作用的初步研究姓名：楊瑞楠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師：趙福寬;秦勇20090601P r i m a r y s t u d y o nt h e r o l eo f A T C N G C 2 i nt h e i n c r e a s eo fc y t o p l a s m i c f r e eC a 2 + t r i g g e r e db y

2、j a s m o n i c a c i dA b s t r a c tC y t o s o l i cf r e eC 釅+ ( [ C 一+ 】c 力i Sa u b i q u i t o u ss e c o n dm e s s e n g e ri n p l a n tc e l l s ．A n u m b e ro fe x t e m a l a n di n t e r n a l s t i m u l i

3、 t r i g g e rs u s t a i n e d o r t r a n s i e n te l e v a t i o n s o ff C a 2 + 1 c v t a n dc o n s e q u n t l y e v o k ed o w n s t r e a m s t i m u l u s - s p e c i f i c r e s p o n s e ．G e n e r a t i o n

4、 o f [ C 一十】c ”s i g n a l sd e p e n d e do nC 礦1 。i n f l u x i n t ot h ec y t o s 0 1f r o mt h ee x t r a c e l l u l a ra n d i n t r a c e l l u l a rC a 2 + s t o r e st h r o u g hC 一+ c h a n n e l s ．T h u s ．

5、C r + c h a n n e l si n t h e p l a s m am e m b r a n ep l a ya ne s s e n t i a lr o l e i nC a 2 * - m e d i a t e d s i g n a l i n g p r o c e s s ．H o w e v e r , t h e d i r e c t r e c o r d i n g s a n d a n a

6、l y s i s o fc h a r m e l —f a c i l i t a t e d C a z + i n f l u xa r e v e r yl i m i t e da n du p s t r e a mr e g u l a t i o nm e c h a n i s m so f t h eC a z * - c h a n n e l si np l a n tc e i l s r e m a i n

7、 u n c l e a rS O f a r ．A s a p l a n t h o r m o n e , j a s m o n i c a c i dp l a y a v e r y i m p o r t a n t r o l ei nr e g u l a t i n gp l a n t d e f e n s er e p o n s e s ．I th a sb e e n r e p o r t e d t h

8、 a tj a s m o n i c a c i d ( J A ) c a nt r i g g e r t h ep h y s i o l o g i c a la n db i o c h e m i c a l r e a c t i o n s i n t h ec e l l b yt h ei n c r e a s e o f 【C a 2 十】c v t ．P l a n tc y c l i cn u c l e

9、 o t i d e g a t e dc h a n n e l s ( c n g c s ) a r ek n o w n t o b ei n v o l v e di nn u m e r o u ss i g n a lt r a n s d u c t i o nc a s c a d e sa se e l lm e m b r a n e ，l i g a n d g a t e d n o n s e l e c t

10、 i v e c a t i o n ( c o n d u c t i n g N a 十，C - 2 + ，a n d ／o r K + ) c h a n n e l s ．T oe v a l u a t et h er o l eo f p l a n tc n g c i nJ A s i g n a l i n g 。r e s e a r c hW O r k a sf o l l o w e d ：( 1 ) E x

11、p r e s s i o no f A T C N G C 2 i nm u t a n t so f y e a s t ( t r k l ，2 ) w a st e s t e df o re s t a b l i s h m e n to f a ne x p e r i m e n t a lm o d e lo fc A M P —A T C N G C 2 i n t e r a c t i o n ．T h er e

12、 s u l ts h o w e dt h a tt h ea d d i t i o no f e x o g e n o u sc A M P i nt h e c u l t u r em e d i u m s i g n i f i c a n t l yi n f l u e n c e dg r o w t ho f e x p r e s s i o no f A T C N G C 2 i nm u t a n t

13、s o f y e a s t ( t r k l ．∞．( 2 ) B a s eo n p e r v i o u sr e s e a r c hr e s u l t ，g u a r dc e l l p r o t o p l a s t s w e r e i s o l a t e ds u c c e s s f u l l yb yd i g e s t i n g w i t h t w o —s t e pe n

14、 z y m ed i g e s t i o n ．0 ．8 ％( w ／v ) C e l l u l y s i n ，1 2 0r ／m i n ，a f t e r3 0m i n o fi n c u b a t i o n a t 2 5 ℃w i t h g e n t l e s h a k i n g ；E p i d e r m a l s t r i p s w e r e f l o a t e d o n m

15、 e d i u mc o n t a i n i n g 1 ．5 ％( w ／v ) C e l l u l a s e R S ，0 ．0 2 ％( w ／v ) P e c t o l y a s e Y ．2 3 ，a f t e r 4 0 - 6 0 m i n o f6 0 - 7 0 r ／m i n ，s h a k i n ga t2 2 ℃，g u a r dc e l l p r o t o p l a s t

16、 sw e r ei s o l a t e d ．T h ea c t i v i t y o f i s o l a t e dp r o t o p l a s t sw e r em e a s u r e dw i t hF D A ．t h er e s u l t s h o w e dt h a t a c t i v a t e dp r o t o p l a s t sw e r ei s o l a t e da

17、 n d t h e y c o u l db e u s e di np a t c h c l a m p e x p e r i m e n t ．( 3 ) A r a b i d o p s i s t h a l i a H a l e a f 、A r a b i d o p s i s t h a l i a n a g u a r d c e l l p r o t o p l a s t s a n d y e a

18、s tp r o t o p l a s t sw e r eu s e d f o rt h i s r e s e a c hw o r k ．L o a d t h eC a 2 + s e n s i t i v ef l u o r e s c e n tp r o b eF l u o - 3 ／A M i n t o l e a fa n d g u a r d c e l l p r o t o p l a s t sb

19、 yi n c u b a t i n gi n F l u 0 3 ／A Ms o l u t i o na t4 ℃f o r 2h f o l l o w e d b y2h i n c u b a t i o na t2 0 ℃．L o a d t h e F l u 0 3 ／A M i n t oy e a s tp r o t o p l a s t sb yi n c u b a t i n gi n F l u 0 3

20、 ／A Ms o l u t i o na t2 8 ℃．f o l l o w e db y2h i n c u b a t i o ni nt h ed y e ．f r e es o l u t i o na t2 0 ℃．( 4 ) T h eD N A f r a g m e n t o f 陽(yáng)孓P 2g e n e W a sa m p l i f i e db y r e v e r s et r a n s c r i

21、p t i o n p o l y m e r a s ec h a i n r a c t i o n ( R T —P C R 、w i t h m R N Af r o m A r a b i d o p s i s t h a l i a n a m u t a n t d n d l a s t h et e m p a l t e ，a n dl i g a t e di n t oP M D 19 一T c l o n i

22、 n gv e c t o r ．A f t e rs e q u e n c i n g ，t h ec o r r e c tD N Af r a g m e n t w a s i d e n t i f i e d ．B i o i n f o r m a t i c st e c h n i q u eW a s u s e d t O a n a l y z e t h eg e n es e q u e n c eh o

23、m o l o g y 0 t y s P 2 ．T h e V s P 2 g e n e f r a g m e n t W a s h i g h l y h o m o l o g o u s t o V S P 2 ．A r a b i d o p s i s t h a l i a n av s P 2g e n e W a s c l o n e ds u c c e s s f u l l y ．K e y w o r