1.小鼠巨細胞病毒潛伏感染與肝臟急性損傷的關(guān)系2.小鼠肝臟缺血再灌注時tnfαtnfr1～bid凋亡通路的作用及反義對抗策略

1、浙江大學博士后學位論文1.小鼠巨細胞病毒潛伏/感染與肝臟急性損傷的關(guān)系2.小鼠肝臟缺血再灌注時TNF-α/TNFR1～Bid凋亡通路的作用及反義對抗策略姓名：楊家印申請學位級別：博士后專業(yè)：外科學指導教師：鄭樹森20030701r e p l i c a t i o ni n w i l dt y p em i c e i nv i v o ，b u tc o u l dn o t i n I L - 4 一／- m i c e ．A

2、f t e r t h e i n j e c t i o nw i t h¨c M v ，S e r u mI F N —Y l e v e ls h o w e dar e v e r s a l i n c r e a s ea n dr e d u c e d 1 0d a y sa f t e rt h e i n j e c t i o ni nr e s p o n s et ot h ei n c r e a

3、s eo fI L 一4 ．C o n c l u s i o n sE n d o g e n o u s I L 一4p l a y sak e yr o l e i n i n f e c t i o nb yH C M v i n m i c e ．病毒侵入后宿主的T h l 和T h 2 會向不同的方向分化和激活，來調(diào)節(jié)體液免疫和細胞免疫。I L 一4 等T h 2 因子能夠下調(diào)免疫效應(yīng)過程，減弱宿主對病毒等外源感染的清除反應(yīng)

4、。K e o g h發(fā)現(xiàn)，在I L 一4 基因敲除小鼠，塞姆利基森林病毒感染復制能力下降．致病力明顯減弱[ 7 ] 。K o b a y a s h iH 等發(fā)現(xiàn)小鼠對巨細胞病毒的易感性與T h 2 型細胞因子的表達有關(guān)[ 8 ] ，K i t a j i m aH 等體外實驗證明。人單核細胞在I L 一4 缺乏時，對H C M V 表現(xiàn)出不感染，在I L 一4 存在時呈高度易感性．并能幫助刪y 由肺成纖維細胞向外周血淋巴細胞的遷徙[

5、9 、l o ] 。尚無體內(nèi)實驗驗證I L - 4 在H c 州感染中的作用。我們通過I L 一4 基因敲除小鼠I L - 4 - - ／一和野生型小鼠對比研究，探討I L 一4 在H C M V 感染小鼠體內(nèi)實驗的作用。材料和方法1 ． 動物：基因敲除c 5 7 B L ／I O 小鼠( I L 一4 一／一，3 - 4 周齡，雄性，1 2 - 1 8 9 ) 及相同遺傳背景、性別、年齡和體重的野生型c 5 7 B L ／l O 小鼠

6、( I L 一4 + ／+ ) 購自英國B ＆l ( 環(huán)球公司一上海西普爾·必凱實驗動物有限公司。動物實驗嚴格依照《中華人民共和國實驗動物管理條例》( 1 9 8 8 年1 0 月) 進行，在浙江大學醫(yī)學院實驗動物中心完成。2 ． 病毒和細胞：病毒培養(yǎng)所用人胚肺二倍體細胞系w I 一3 8 ，由中國科學院上海細胞生物研究所提供。人巨細胞病毒A D l 6 9 病毒株，由本校基礎(chǔ)醫(yī)學院病毒研究室提供。將人胚肺成纖維細胞按1 &#

7、215;1 0 5 ／m i 分種于內(nèi)含飛片的2 4 孔板，待細胞成片后，接種臣細胞病毒。待細胞出現(xiàn)病變時取出小飛片，用0 ．2 5 o A 胰蛋白酶將培養(yǎng)孔內(nèi)細胞消化下來，測定空斑形成單位。待病毒的感染滴度達到1 0 7 空斑形成單位時進行動物實驗。3 ．動物處理：小鼠腹腔內(nèi)注射H C M VA D l 6 9 株懸液0 ．5 m i ／只( 1 0 7P F U ) 。對照組腹腔內(nèi)注入0 ．5 m l ／只的正常細胞懸液。標準飼料喂

8、養(yǎng)，每日觀察小鼠情況。4 ．血清中I L - 4 、I F N - Y 水平檢測：按照E L I S A 試劑盒說明書( B e n d e r M e d s y s t e m s ，A u s t r i a )進行，在酶標儀上檢測波長4 5 0 h m 、校正波長6 5 0 h m 吸光度A 值。5 ． H c 州D N A 檢測：實時定量P C R 檢測：用離心柱式D N A 抽提試劑盒( 上海博彩生物有限公司) ，按說明書提