福建柏響應鹽脅迫差異蛋白分析.pdf

1、福建柏(Fokienia hodginsii)是柏科(Cupressaceae)福建柏屬(Fokienia)常綠喬木，國家Ⅱ級保護植物，為福建省珍稀鄉(xiāng)土樹種，福建柏樹形優(yōu)美似寶塔狀，木材材質(zhì)優(yōu)良，且具有耐瘠薄的生長特性。鹽害是植物最主要的非生物脅迫因子之一，影響著福建柏的生長與分布。利用蛋白質(zhì)組學的研究方法，對福建柏響應鹽脅迫相關蛋白進行分析，對于福建柏的耐鹽機理有重要的意義。本研究以福建柏為材料，利用雙向電泳技術及質(zhì)譜技術對福建柏鹽脅

2、迫差異蛋白質(zhì)組學研究。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴建立福建柏雙向電泳技術體系。采取了TCA/丙酮法、酚提取法、以及TCA/丙酮法-酚提取法三種蛋白提取方法，7 cm長pH3-10， pH5-8，pH4-7三種IPG膠條、等電聚焦參數(shù)設定為20000 VH，25000 VH，30000 VH、丙烯酰胺凝膠分離膠濃度設定為10％與12.5%進行單因素分析，對福建柏雙向電泳技術進行優(yōu)化。采用三氯乙酸/丙酮-酚法提取福建柏葉片的蛋白點多且

3、圖像清晰，pH4-7 IPG膠條最適合福建柏葉片蛋白的分離，等電聚焦參數(shù)設定為25000 Vh，濃度為10%的分離膠進行福建柏雙向電泳最好。⑵分析鹽脅迫引起的差異蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)，福建柏在不同濃度鹽脅迫條件下蛋白質(zhì)豐度變化是不同的，通過軟件分析蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，得到表達變化明顯的蛋白質(zhì)，在脅迫條件下，有的是上調(diào)表達，有的是下調(diào)表達，不同蛋白的豐度變化是有顯著差異的。用軟件選取有效性T檢驗99%的蛋白，形狀以及分離度較好并有兩倍以上差異的蛋白

4、點。結果有16個蛋白質(zhì)在鹽脅迫處理條件下呈現(xiàn)上調(diào)表達，5個蛋白質(zhì)在鹽脅迫處理下調(diào)表達。表明福建柏在鹽脅迫條件下蛋白質(zhì)差異是顯著的。在進行2-DE實驗中，每個蛋白樣品都進行3次以上重復實驗，以去除電泳過程中發(fā)生的誤差。⑶在表達量上調(diào)差異中，蛋白質(zhì)大多集中在酸性端，密集集中在酸性pH4-5之間，位于丙烯酰胺凝膠中部。而在蛋白質(zhì)表達量下降的5個點中，分布比較分散。對雙向電泳找出的21個差異蛋白進行質(zhì)譜分析，檢測成功20個蛋白，經(jīng)過Mascot