響應(yīng)鹽脅迫的黃瓜韌皮部蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本試驗(yàn)以鹽敏感黃瓜品種‘津優(yōu)1號(hào)’和較耐鹽的品種‘新泰密刺’為材料,采用水培的方法,通過在營(yíng)養(yǎng)液中添加終濃度為75 mM的NaCl對(duì)植株進(jìn)行鹽脅迫處理,研究了鹽脅迫下黃瓜韌皮部滲出液的蛋白質(zhì)組。在脅迫第3d時(shí)收集植株的韌皮部液,首先通過 SDS-PAGE電泳檢測(cè)韌皮部液中提取的蛋白純度,確認(rèn)得到較高純度蛋白用于下一步試驗(yàn),然后采用iTRAQ定量技術(shù)分析鹽脅迫下的黃瓜韌皮部液中蛋白質(zhì)并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,得到差異表達(dá)的蛋白,并從 mRNA

2、水平對(duì)部分差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí),利用熒光定量 PCR技術(shù)對(duì)選取的差異蛋白基因在葉片和根系不同鹽脅迫時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)進(jìn)行分析。主要結(jié)果如下:
　　1.利用切割滲出的方法成功收集到黃瓜植株韌皮部液,SDS-PAGE電泳檢測(cè)表明收集的韌皮部液中提取的蛋白純度較高,完全滿足iTRAQ定量分析試驗(yàn)要求。通過iTRAQ定量鑒定到共745個(gè)蛋白質(zhì)。其中分別在‘津優(yōu)1號(hào)’和‘新泰密刺’中鑒定到69和65個(gè)特異蛋白在鹽脅迫處理下差異表達(dá)。這些差異表達(dá)

3、的蛋白中只有4個(gè)上調(diào)蛋白與16個(gè)下調(diào)蛋白是‘津優(yōu)1號(hào)’和‘新泰密刺’所共有的,更多的差異表達(dá)蛋白是不同的黃瓜品種所特有的。對(duì)這些差異蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行分類:其中28個(gè)差異蛋白為主要與代謝相關(guān)蛋白;17個(gè)與蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān);7個(gè)與能源和運(yùn)輸相關(guān);24個(gè)與脅迫和防御相關(guān);8個(gè)與植物生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān);13個(gè)與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān);14個(gè)雜蛋白。
　　2.利用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)對(duì)鹽逆境應(yīng)答蛋白的基因在黃瓜韌皮部滲出液中的表達(dá)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),在黃瓜品種

4、‘津優(yōu)1號(hào)’和‘新泰密刺’韌皮部滲出液中9個(gè)蛋白中分別有67％、45%的蛋白基因在mRNA水平的表達(dá)趨勢(shì)與蛋白水平表達(dá)趨勢(shì)相同。Cs5、Cs6、Cs7在鹽脅迫的‘津優(yōu)1號(hào)’韌皮部滲出液中蛋白水平的表達(dá)是上調(diào)的,與mRNA水平表達(dá)趨勢(shì)相反;‘新泰密刺’中Cs7在mRNA水平與蛋白水平相反,而Cs2、Cs4、Cs5、Cs6在mRNA水平表達(dá)趨勢(shì)不顯著,但在蛋白水平顯著。對(duì)鹽逆境應(yīng)答蛋白基因在黃瓜葉片和根系的表達(dá)分析表明:鹽脅迫也誘導(dǎo)了鹽逆境