分光光度計(jì)的性能檢查

1、分光光度計(jì)的性能檢查（1）波長校正：使用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)在更換光源燈、重新安裝、搬運(yùn)或檢修后以及儀器工作不正常時都要進(jìn)行波長校正。就是正常工作的儀器每隔一個月也要檢查一次波長必要時進(jìn)行校正這樣才能保證波長讀數(shù)與通過樣品的波長符合保證儀器的最大靈敏度。方法常用譜釹濾光片校正法適用于721型儀可見光區(qū)的波長校正常以585nm或529nm處的吸收峰或T%為標(biāo)準(zhǔn)。鑒于721型儀器的出射光波長較寬不易將573nm和585nm的兩峰或兩谷分開

2、校正時易產(chǎn)生誤差故推薦用529nm處的峰或谷為標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行波長校正。校正時將儀器按要求預(yù)熱。要求電源電壓穩(wěn)定。波長度盤置580nm處T%調(diào)至最大在比色杯處放一白紙條觀察是否有光強(qiáng)均勻、邊緣無光暈或雜光的光斑如不符合要求可調(diào)節(jié)燈泡位置使其符合要求是為波長校正的粗調(diào)。再把靈敏度扭置于“1”（最低檔）波長度盤對準(zhǔn)529nm電表機(jī)械零點(diǎn)為零在光路空白時調(diào)T%為100%T并反復(fù)查零點(diǎn)和100%T穩(wěn)定情況。將譜釹濾光片插入光路慢慢旋轉(zhuǎn)波長度盤找到透光

3、率最低的一點(diǎn)（向左右微旋波長度盤時該點(diǎn)透光率值均增加）這一點(diǎn)即為波長529nm。檢查波長度盤的指示值是不是529nm如指示值為534nm此時波長工誤差為5nm超出規(guī)定（1nm）必須進(jìn)行調(diào)整。調(diào)整方法：將波長度盤對準(zhǔn)529nm從光路取出譜釹濾光片光路空白時調(diào)電表指針到100%T再將譜釹濾光片插入光路。打開儀器左側(cè)小蓋板找到波長校正螺絲（3個中左側(cè)柄長的一個）；反時針方向微微調(diào)節(jié)（負(fù)誤差時順時針方向）使電表指針的指示T%為最低。反復(fù)檢查波長

4、誤差情況直到符合儀器技術(shù)指標(biāo)為止。蓋好左側(cè)小蓋板校正結(jié)束。有些高檔儀器如島津UV260型雙光束分光光度計(jì)可使用氫燈或置譜釹濾光片于測定比色槽內(nèi)編入濾工掃描程序后儀器即可自動地在一定波長范圍內(nèi)進(jìn)行波長校正。高檔分光光度儀的光學(xué)系統(tǒng)密封在一個單元組件內(nèi)若發(fā)生故障波長不準(zhǔn)常須請制造商派專人修理。其它尚有譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等可參考有關(guān)資料。（2）線性檢查：線性檢查包括儀器線性及測定方法線性兩個方面的檢查。線性誤差表現(xiàn)為

5、溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系出現(xiàn)正偏離或負(fù)偏離的現(xiàn)象。這種偏離按比耳定律的現(xiàn)象來自兩個方面：一是溶液本身不符合比耳定律這種現(xiàn)象叫做化學(xué)偏離；二是儀器本身各種因素的影響使吸光度測定值與濃度之間不成線性關(guān)系這種現(xiàn)象叫儀器偏離。此處研究的是后者。儀器偏離的因素很多如雜光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件變化、波長的變動、比色杯的誤差、輻射光的非平行性、檢測器本身的非線性等。儀器線性檢查常用一種在一定波長及一定濃度范圍內(nèi)確知其服從比耳定律的有色

6、物質(zhì)配成不同濃度的溶液來檢查儀器本身是否能如實(shí)地反映有色物質(zhì)的濃度變化。這種檢查方法與任何被測物質(zhì)呈色反應(yīng)等方法學(xué)上的問題無關(guān)。用測得的吸光度對濃度作圖在理想情況下應(yīng)是一條直線。常用的方法是用0.8、1.6、2.4、4.0mgL伊文藍(lán)濃度系列來檢查波長用610nm。（3）雜光（散光）檢查：在吸光度測定中凡檢測器感受到的不需要的輻射都稱為雜光。雜光對吸光度測定法的準(zhǔn)確性有嚴(yán)重的影響但卻往往被忽視。雜光的來源有：①儀器本身的原因如單色器的設(shè)

7、計(jì)、光源的光譜分布、光學(xué)原件的老化程度、波帶寬度以及儀器內(nèi)部的反射及散射等；②室內(nèi)光線過強(qiáng)而漏入儀器儀器暗室蓋不嚴(yán)；③樣品本身的原因如樣品有無熒光、樣品的散射能力強(qiáng)弱等。雜光檢測方法：①紫外光區(qū)的雜光監(jiān)測可用100.1gL的碘化鈉溶液在240nm處測定的吸光度應(yīng)大于2.00。此外也可用12gL的氯化鉀溶液在220nm處測其透光度即為雜光量一般應(yīng)小于1%T。以上測定均用石英杯以蒸餾水校零。②在可見光區(qū)可使用譜釹濾光片或硫酸鎳法檢查。先用譜

8、釹濾片校正波長然后用黑紙片擋住比色杯光路（進(jìn)口儀器帶有比色杯樣黑色標(biāo)柱）之后調(diào)整0%T再用空氣做空白調(diào)100%T。插入譜釹濾光片在585nm處測定其測定值即為雜光水平。（4）比色杯的質(zhì)量檢查：比色杯一般由玻璃、石英或熒石制成光徑1.0或0.5cm光線通過時有一部分光為空氣與玻璃接觸面的反射而損失（4%）另一部分（很少）為玻璃吸收。比色杯的質(zhì)量除其原料外再就是玻璃的厚度均勻上下一致各杯彼此相配。廠家多以四個一套供應(yīng)且杯口上部外面標(biāo)有箭頭箭

9、頭對光源側(cè)使用。盡管如此在使用前還是應(yīng)作質(zhì)量檢查。常用伊文藍(lán)法：將一定量的2.0mgL的伊文藍(lán)溶液注入比色杯中比色杯內(nèi)液面應(yīng)相等。用一個比色杯作標(biāo)準(zhǔn)用紅色濾光片（波長600～610nm）用水校零后將此杯的讀數(shù)準(zhǔn)確調(diào)至50%T接著讀取其余杯的透光度。透光度相差在0.5%T范圍內(nèi)者為合格。（5）穩(wěn)定性檢查：檢查方法：將分光光度計(jì)及附件接于0.5kVA以上的可調(diào)變壓器先調(diào)電壓為220V波長固定在650nm在光路比色杯裝以空白液調(diào)讀數(shù)為90%T

10、處再將電壓升至230V及降至190V觀察透光度的漂移值。若介于88.5%～91.5%T之間為合格。在電源電壓不變的條件下在3分鐘內(nèi)其讀數(shù)漂移不應(yīng)超過標(biāo)尺上限值的0.5%。（6）重復(fù)性檢查：在波長、工作狀態(tài)、電源電壓、比色杯配套等合格的前提下進(jìn)行重復(fù)檢查。在用交流電源供電時儀器對一種溶液重復(fù)測定的讀數(shù)值差應(yīng)小于或等于標(biāo)尺上限值的1%。試驗(yàn)方法：將分析純重絡(luò)酸鉀于120～150攝氏度烘干2小時干燥器中冷卻。精稱509.1mg于1000ml容