分光光度計(jì)的使用方法

1、分光光度計(jì)的使用方法主體內(nèi)容：1使用儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理。以及各個(gè)操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固。通地要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源開(kāi)關(guān)。儀器在使用前先檢查一下，放大器暗盒的硅膠干燥筒（在儀器的左側(cè)），如受潮變色，應(yīng)更換干燥的藍(lán)色硅膠或者倒出原硅膠，烘干后再用。2將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔（放大倍率最?。?開(kāi)啟電源，指示燈亮，選擇開(kāi)關(guān)置于“

2、T”，波長(zhǎng)調(diào)至測(cè)試用波長(zhǎng)。儀器預(yù)熱20分鐘。4打開(kāi)試樣室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上試樣室蓋，將比色皿架置與蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透過(guò)率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。5如果顯示不到“100.0”，則可適當(dāng)增加微電流放大器的倍率檔數(shù)，但盡可能置低倍率檔使用，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。但改變倍率后必須按(4)重新校正“0”和“100%”。6預(yù)熱后，按(4)連續(xù)幾次調(diào)整“0”和

3、“100%”，儀器即可進(jìn)行測(cè)定工作。7吸光度A的測(cè)量按(4)調(diào)整儀器的“00.0”和“100%”，將選擇開(kāi)關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為“.000”，然后將被測(cè)樣品移入光路，顯示值即為被測(cè)樣品的吸光度值。8濃度C的測(cè)量：選擇開(kāi)關(guān)由“A”旋置“C”，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測(cè)樣品放入光路，即可讀出被測(cè)樣品的濃度值。9如果大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，在調(diào)整“0”和“100%”后稍等片刻

4、，（因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間），當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“0”和“100%”即可工作。10每臺(tái)儀器所配套的比色皿，不能與其它儀器上的比色皿單個(gè)調(diào)換。11本儀器數(shù)字表后蓋，有信號(hào)輸出0～1000MV，插座1腳為正，2腳為負(fù)接地線。吸收池（即比色杯）使用注意事項(xiàng)：①要徹底清洗，尤其是盛過(guò)蛋白質(zhì)等溶液，干后形成一層膜，不易洗去，通常杯子不用時(shí)可放在1％洗潔凈液中浸泡，去污效果好，使用時(shí)用水沖洗干凈，要求杯壁不掛水

5、珠，還可以用綢布絲線或軟塑料制作一個(gè)小刷子清洗杯子。2.2.2物質(zhì)的吸收光譜(1)如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜它出現(xiàn)了幾條暗線即光源發(fā)射光譜中某些波長(zhǎng)的光因溶液吸收而消失這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).2.2.2物質(zhì)的吸收光譜(2)當(dāng)光線通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過(guò)的光的強(qiáng)度減弱.因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷?/p>

6、或分散一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過(guò)溶液.入射光=反射光分散光吸收光透過(guò)光如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白“去校正反射分散等因素造成的入射光的損失則:入射光=吸收光十透過(guò)光2.2.3物質(zhì)吸光度(A)與透射比(T)的關(guān)系設(shè)I0為經(jīng)過(guò)空白校正后入射光的強(qiáng)度I為透過(guò)光的強(qiáng)度.根據(jù)實(shí)驗(yàn)得知I=I010εcl式中c表示吸收物質(zhì)的摩爾濃度l表示吸收物質(zhì)的光徑用cm表示ε表示吸收物質(zhì)的摩爾消光系數(shù)它表示物質(zhì)對(duì)光的吸

7、收特性不同物質(zhì)的ε數(shù)值不同.所以II0=10εcl令T(透射比)=II0T=10εcl若以T對(duì)吸收物質(zhì)的濃度作圖則得圖152中的曲線.由上式可得1g(1T)=εcllg(lT)為物質(zhì)的吸光度(A)A=1g(1T)2.2.4LambertBeer定律(E=εcl)上式說(shuō)明了物質(zhì)的吸光度與吸收物質(zhì)的濃度和液層的厚度成正比這就是光吸收的基本定律LambertBeer(朗伯比耳)定律.2.3分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)無(wú)論哪一類分光光度計(jì)都包括:光源單