分子遺傳復(fù)習(xí)題-21道

1、非標(biāo)準(zhǔn)答案，僅供大家參考：非標(biāo)準(zhǔn)答案，僅供大家參考：1.試談?wù)婧松锱c原核生物在基因組、基因結(jié)構(gòu)方面的特點(diǎn)及相互間的主要不同點(diǎn)？試談?wù)婧松锱c原核生物在基因組、基因結(jié)構(gòu)方面的特點(diǎn)及相互間的主要不同點(diǎn)？真核生物原核生物基因組復(fù)雜，3109bp，3－4萬(wàn)個(gè)基因，有重復(fù)和插入序列，無(wú)重疊基因簡(jiǎn)單，5106bp，4000多個(gè)基因，無(wú)重復(fù)序列和插入序列，有重疊基因轉(zhuǎn)錄核內(nèi)轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄與翻譯分開(kāi)，轉(zhuǎn)錄后加工，三種RNA聚合酶，I（rRNA），II(m

2、RNA)，III(tRNA，5s，5.8sRNA)，mRNA壽命長(zhǎng)，單順?lè)醋愚D(zhuǎn)錄與翻譯偶聯(lián)，無(wú)轉(zhuǎn)錄后加工，一種RNA聚合酶，壽命短，多順?lè)醋臃g無(wú)SD序列，掃描學(xué)說(shuō)，翻譯后加工修飾SD序列，無(wú)翻譯后加工修飾2.真核基因在大腸桿菌表達(dá)的基本條件是什么？可能產(chǎn)生的主要問(wèn)題是什么？請(qǐng)?zhí)岢鼋鉀Q真核基因在大腸桿菌表達(dá)的基本條件是什么？可能產(chǎn)生的主要問(wèn)題是什么？請(qǐng)?zhí)岢鼋鉀Q問(wèn)題的原則和方法。問(wèn)題的原則和方法。【條件】[1]原核表達(dá)載體提供轉(zhuǎn)錄、翻譯所

3、必須的調(diào)控元件，如啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)等。(1)、具有能自主復(fù)制的復(fù)制子，松弛型，質(zhì)粒高拷貝數(shù)，便于質(zhì)粒大量制備及表達(dá)。(2)、強(qiáng)啟動(dòng)子、強(qiáng)轉(zhuǎn)錄終止子，便于高水平轉(zhuǎn)錄，防止轉(zhuǎn)錄通讀。(3)、可誘導(dǎo)性，尤其在高表達(dá)對(duì)細(xì)胞有毒性的蛋白。(4)、合適的核糖體結(jié)合位點(diǎn)，提高翻譯起始效率和翻譯水平。(5)、具有多個(gè)單一酶切位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)，且酶切位點(diǎn)最好位于被檢測(cè)的表型基因上，便于外源基因插入及篩選。(6)、分子量小，便于較大外源基

4、因的插入。(7)、具有抗藥性標(biāo)志，有利于插入外源基因克隆的篩選。(8)、安全，不污染環(huán)境，對(duì)人無(wú)害[2]外源基因必要條件：不含內(nèi)含子（2）易于擴(kuò)增，易通過(guò)感染大腸桿菌得到擴(kuò)增，便于構(gòu)庫(kù)及高通量篩選。（3）在多種洗脫(如低pH值)下，仍然穩(wěn)定，可以感染形成很高滴度（一般達(dá)1012)）【特點(diǎn)】（1）具有快速、有效、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，大大簡(jiǎn)化了多肽篩選和鑒定。（2）表型分析和基因型分析同時(shí)進(jìn)行。【存在問(wèn)題】多樣性并不是完全意義上的隨機(jī)。原因：（

5、1）建庫(kù)時(shí)，密碼子的選擇和寡核苷酸的合成，即編碼肽的基因帶有一定的偏向性。（2）庫(kù)的構(gòu)建要經(jīng)原核生物細(xì)胞內(nèi)的層層篩選，多肽不能對(duì)宿主細(xì)胞有毒性。（3）DNA轉(zhuǎn)化效率受限。（4）篩選靈敏度。多樣性高于1012的庫(kù)，很難富集所需噬菌體肽。4.抗體工程能夠?qū)嵤┑睦碚撘罁?jù)是什么？抗體多樣性是怎樣產(chǎn)生的？抗體工程能夠?qū)嵤┑睦碚撘罁?jù)是什么？抗體多樣性是怎樣產(chǎn)生的？5.簡(jiǎn)述大腸桿菌的復(fù)制過(guò)程。簡(jiǎn)述大腸桿菌的復(fù)制過(guò)程。復(fù)制過(guò)程包括：復(fù)制起始，復(fù)制延伸，

6、復(fù)制終止。【復(fù)制起始】E.coli復(fù)制起始位點(diǎn)稱(chēng)為iC；復(fù)制方向：雙向；主要參與蛋白：DNaA：解開(kāi)iC；DnaBC復(fù)合物：DnaB：解旋酶，DnaC：協(xié)助DnaB。E.coli染色體以一個(gè)復(fù)制單位從iC開(kāi)始雙向復(fù)制。在iC上形成兩個(gè)復(fù)制叉，并以大致相同的速度延伸到整個(gè)基因組?！緩?fù)制延伸】復(fù)制酶為DNA聚合酶，DNA合成一定需要引物，DNA復(fù)制引物為RNA。引發(fā)酶是一種與轉(zhuǎn)錄不相關(guān)的RNA聚合酶，可以合成RNA引物，起始DNA的復(fù)制。大

7、腸桿菌的引發(fā)酶為一條單肽鏈，分子量為60KD。DNA合成必需為5’?3’，在蛋白復(fù)制體參與下DNA進(jìn)行半不連續(xù)復(fù)制：復(fù)制鏈方向5’?3’，前導(dǎo)鏈連續(xù)復(fù)制；復(fù)制鏈方向3’?5’，滯后鏈非連續(xù)復(fù)制。DNA聚合酶I去除RNA引物。DNA連接酶封閉缺口?！緩?fù)制終止】環(huán)狀DNA復(fù)制的終止：即兩個(gè)相反方向復(fù)制叉匯合，停止復(fù)制，復(fù)制體解體其后兩條親代鏈解開(kāi)，通過(guò)修復(fù)方式填補(bǔ)空缺。終止子序列和Tus蛋白(終止子序列結(jié)合蛋白)：Tus蛋白與終止子位點(diǎn)te