pcr產(chǎn)物膠回收實(shí)驗(yàn)_第1頁(yè)
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1、實(shí)驗(yàn)六PCR產(chǎn)物膠回收實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握膠回收的常規(guī)操作2.了解膠回收PCR產(chǎn)物的目的二、實(shí)驗(yàn)原理利用膠回收試劑盒純化PCR產(chǎn)物。本試劑盒提供一個(gè)從TBE或TAE電泳緩沖液配制的瓊脂糖凝膠中提取高質(zhì)量DNA的簡(jiǎn)單、快速、有效的技術(shù)，適合從濃度≤3%，高，低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中，回收長(zhǎng)度為60bp~23Kb的DNA片段，小于100bpDNA片段回收率為10%~55%，0.1~10kbDNA片段回收率最大為99%，大于10kbDNA片段回

2、收率為20~70%。回收的基因組DNA可以應(yīng)用到克隆，測(cè)序，限制性酶切等各類下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。三、試劑及配套設(shè)備和材料3.1試劑ExtractionbufferWashbufferElutionbuffer3.2配套設(shè)備和材料無(wú)菌1.5ml離心管各種規(guī)格移液器和無(wú)菌移液器吸頭無(wú)水乙醇異丙醇可能需要3MKAc(pH5.0)離心機(jī)四、基本技術(shù)參數(shù)提取方法操作時(shí)間離心柱溶劑提取DNA片段范圍洗脫液回收率樣本用量離心柱16分鐘內(nèi)完成2個(gè)樣本7

3、50ul60bp~23kb≥99%最大400mg凝膠條適用瓊脂糖種類適用電泳緩沖液溫育溫度高低熔點(diǎn)瓊脂糖TAETBE緩沖液50℃（低熔點(diǎn)瓊脂糖）55℃（普通瓊脂糖）五、操作步驟1.用干凈、鋒利的手術(shù)刀，將含有目的DNA片段的瓊脂糖凝膠切下，并放入1.5或2.0ml離心管中?；厥盏腄NA可直接用于各類下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，如果不立即使用，請(qǐng)保存于20℃。六、注意事項(xiàng)1.為了保證沒(méi)有外源DNA的污染，電泳的buffer和gel都是新制的，切膠

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