qiagen操作說明

1、Qiagen基因組提取試劑盒中文操作說明QIAampDNABloodMiniKit簡(jiǎn)介：簡(jiǎn)介：QIAGEN公司出品的QIAampDNABloodMiniKit適用于使用微型離心機(jī)或真空處理從全血、血漿、血清、血沉、淋巴細(xì)胞以及體液樣品中提取總(基因、線粒體和病毒)DNA。該試劑盒可處理帶有EDTA、檸檬酸鹽和肝素等常規(guī)抗凝劑的新鮮或冷凍的全血樣本，樣品量可達(dá)200μl。整套基因組的操作時(shí)間約為20–40分鐘，一般可從200μl健康全血中

2、獲得4–12μgDNA，洗脫體積可在50–200μl范圍。抽提原理：抽提原理：樣品中的DNA可以特異性結(jié)合到QIAamp的硅膠膜上，通過兩次洗滌可以將PCR抑制劑，如：二價(jià)陽(yáng)離子和蛋白完全去除，最后結(jié)合在離心柱上的純核酸可用水或試劑盒中的緩沖液進(jìn)行洗脫收集。開始前的注意事項(xiàng)：開始前的注意事項(xiàng)：1.所以的離心步驟需要在室溫（1525℃）進(jìn)行2.如果樣品中含有的基因組當(dāng)量少于10000，請(qǐng)?zhí)砑虞d體DNA（carrierDNA）3.200μl

3、全血樣品可以得到約312μgDNA如果樣品體積大于200μl，請(qǐng)等量增加蛋白酶和BufferAL的量。大體積樣品推薦使用i或Maxi試劑盒。操作時(shí)注意，請(qǐng)不要將QIAGEN蛋白酶（或蛋白酶K）直接加入BufferAL中。4.56℃孵育10min。DNA得率在該條件下已經(jīng)達(dá)到最大值，延長(zhǎng)孵育時(shí)間不會(huì)進(jìn)一步提高得率。5.快速離心，去除殘留在1.5ml離心管蓋子中的液滴。6.加入200μl（樣品等體積）的乙醇（96100%），渦旋振蕩15s混

4、勻。振蕩完畢后，快速離心，去除殘留在1.5ml離心管蓋子中的液滴。7.將步驟6得到的混合物轉(zhuǎn)移至QIAampMini離心管柱(在一個(gè)2ml的收集管中)注意不要弄濕邊緣的環(huán)?？凵仙w子（在離心過程中關(guān)閉每個(gè)離心管的蓋子以防止離心過程中產(chǎn)生氣溶膠），6000g（8000rpm，選擇低速離心的目的是減少噪音，使用更高的轉(zhuǎn)速不會(huì)影響DNA最終的得率和純度，在樣品為血沉或者淋巴細(xì)胞時(shí)，推薦使用最高轉(zhuǎn)速以防止堵塞）離心1min。將QIAampMin離