酶聯(lián)免疫(elisa)技術

1、ELISA技術技術ELISA是一種免疫測定。免疫測定（immunoassay，IA）是應用免疫學技術測定標本的方法。在臨床檢驗中主要通過抗原抗體反應檢測體液中的抗體或抗原性物質。一、抗原一、抗原抗原是能在機體中引起特異性免疫應答的物質。抗原進入機體后，可刺激機體產生抗體和引起細胞免疫。在免疫測定中，抗原是指能與抗體結合的物質。能在機體中引起抗體產生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質，例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（A

2、FP）等。小分子化合物在與大分子蛋白質結合后能引起機體產生特異性抗體的，稱為半抗原（hapten）。例如某些激素、藥物等?？乖姆磻匀Q于抗原決定簇（antigenicdeterminant），或稱為表位（epitope）。一個抗原分子可帶有不同的決定簇，例如中可帶有等決定簇。二、抗體二、抗體1抗體的結構抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulinIg)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免

3、疫測定有關的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結構不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。圖1IgG的結構見圖①木瓜酶裂解部位；②胃蛋白酶裂解部位圖33.3特異性抗原抗體的結合實質上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上

4、呈互補關系，所以抗原抗體反應具有高度的特異性。例如乙肝病毒中的表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）和核心抗體（HBcAg），隨來源于同一病毒，但僅與其相應的抗體結合，而不與另外兩種抗體反應?？乖贵w反應的這種特異性使免疫測定能在一非常復雜的蛋白質化合物（例如血清）中測定某一特定的物質，而不需先分離待檢物。但是這種特異性也不是絕對的。假使兩種化合物有著部分相同的結構，在抗原抗體反應中可出現(xiàn)交叉反應。例如：絨毛膜促性腺激素（hCG）

5、和黃體生成激素（LH）均由α和β兩個亞單位組成，其結構的不同處在β亞單位，而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗αhCG和抗βhCG兩種抗體，抗αhCG抗體將與LH中的α酶位發(fā)生交叉反應。在臨床檢驗中，如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG，只能用于hCG濃度較高的試驗，否則婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)生交叉反應。因此在作為早孕診斷（敏感度應達到50mIumlhCG）的實際中必須應用只對h

6、CG特異的抗βhCG，以避免與其它激素的交叉反應的發(fā)生。3.4敏感性在測定血清中某一物質的含量時，化學比色法的敏感度為mgml水平，酶反應測定法的敏感度約為5~10μgml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍，達ngml水平。例如，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg，其敏感度可達0.1ngml。三、免疫測定在臨床檢驗中的應用三、免疫測定在臨床檢驗中的應用由于各種抗原成份，包括

7、小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應的抗原，因此免疫測定的體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等。應用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：1.激素，包括小分子量的甾體激素等。2.抗生素和藥物。3.病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。4.另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗HBs等。三、標記的免疫測定三、標記的免疫測定如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法