大鼠巢蛋白nestin酶聯(lián)免疫分析elisa

1、1大鼠巢蛋白大鼠巢蛋白(Nestin)(Nestin)酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析(ELISA)(ELISA)試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中巢蛋白(Nestin)的含量。實驗原理：實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠巢蛋白(Nestin)水平。用純化的大鼠巢蛋白(Nestin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入巢蛋白(Nestin)

2、，再與HRP標(biāo)記的巢蛋白(Nestin)抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的巢蛋白(Nestin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠巢蛋白(Nestin)濃度。試劑盒組成試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1

3、個1個酶標(biāo)包被板14819628℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：900pgml0.5ml1瓶0.5ml1瓶28℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1瓶28℃保存酶標(biāo)試劑3ml1瓶6ml1瓶28℃保存樣品稀釋液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑A液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑B液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存終止液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存濃縮洗滌液（20ml20倍）1瓶（20ml30倍）1瓶28℃保存樣本處理及要求樣本處理及要求：1.

4、血清：室溫血液自然凝固1020分鐘，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合1020分鐘后，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

5、4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（20003000轉(zhuǎn)分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.27.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞3好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，

6、以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃