db21∕t 2534-2015 鹿流行性出血病病毒熒光pcr檢測(cè)方法

1、ICS65.020.30B41DB21遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)DB21T2534—2015鹿流行性出血病病毒熒光PCR檢測(cè)方法MethodoftherealtimeRTPCRfthedetectionofepizootichaemrhagicdiseaseofdeer20151015發(fā)布20151215實(shí)施遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB21T2534—2015鹿流行性出血病病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鹿流行性出血病病毒（Epizoo

2、ticHaemrhagicDiseaseVirusofdeer）實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于鹿流行性出血病病毒的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GBT6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法SNT1193基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求3縮略語下列縮略語適用于本文件。Ct值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)

3、達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。DEPC：焦碳酸乙二酯（Diethylpyrocarbonate）Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）實(shí)時(shí)熒光PCR：熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RealTimeFluescentQuantitativeReverseTranionPolymeraseChainReaction）4原理采用TaqMan方法，比對(duì)鹿流行性出血病病毒基因

4、組S基因的核苷酸序列，設(shè)計(jì)特異性引物和特異性的熒光雙標(biāo)記探針進(jìn)行配對(duì)。探針5端標(biāo)記FAM熒光素為報(bào)告熒光基團(tuán)（用R表示），3端標(biāo)記TAMRA熒光素為淬滅熒光基團(tuán)（用Q表示），它在近距離內(nèi)能吸收5端熒光基因發(fā)出的熒光信號(hào)。PCR反應(yīng)進(jìn)入退火階段時(shí)，引物和探針同時(shí)與目的基因片段結(jié)合，此時(shí)探針上R基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被Q基因所吸收，儀器檢測(cè)不到熒光信號(hào)；而反應(yīng)進(jìn)行到延伸階段時(shí)，Taq酶的5到3的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團(tuán)游離出