人卵母細(xì)胞輔助激活研究進(jìn)展 - 生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)

1、人卵母細(xì)胞輔助激活研究進(jìn)展人卵母細(xì)胞輔助激活研究進(jìn)展賈洪響，蘇丹，畢星宇，武學(xué)清賈洪響，蘇丹，畢星宇，武學(xué)清（山西省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，太原，（山西省婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)中心，太原，030000）摘要：卵胞漿內(nèi)精子注射（Intracytoplasmicsperminjection，ICSI）是目前治療男性不育最有效的方法，但在ICSI周期中仍然有13%的受精失敗發(fā)生。卵母細(xì)胞輔助激活（Assistedoocyteactivation，

2、AOA）通過施加外界刺激激活卵母細(xì)胞，可以有效克服ICSI后的受精失敗，因此近年來獲得了越來越廣泛的研究和應(yīng)用，本文綜述了近年來人們在卵母細(xì)胞輔助激活機(jī)理和應(yīng)用方面的研究成果，并對該技術(shù)今后的發(fā)展前景作了探討。關(guān)鍵詞：輔助激活；鈣離子震蕩；受精失?。蝗寺涯讣?xì)胞；通訊作者：武學(xué)清：Email：xueqingwu416@Tel：18035118787隨著上世紀(jì)90年代初卵胞漿內(nèi)精子注射（Intracytoplasmicsperminject

3、ion，ICSI）技術(shù)的出現(xiàn)，人類輔助生殖技術(shù)得到了很大的的提升和發(fā)展，有效克服了過去由男性因素引起的各種不育癥，成為目前治療男性不育最有效的方法[1]。ICSI主要應(yīng)用于由男性因素造成的常規(guī)IVF受精失敗，其總體受精率可以達(dá)到70%以上，對患有少弱精和畸精癥等患者均有良好的效果[23]。盡管如此，在ICSI周期中仍然有13%的受精失敗發(fā)生[4]，對于引起受精失敗的原因尚存在很多爭議，Rawe等[5]發(fā)現(xiàn)在ICSI后受精失敗的卵母細(xì)胞中

4、，有39.9%是由于卵母細(xì)胞沒有正常激活，無法形成原核或者排出第二極體，表明卵母細(xì)胞的非正常激活是造成受精失敗的主要原因之一。NasrEsfahani等[6]認(rèn)為由魚精蛋白缺乏所引起的染色體過早濃縮（PrematurechromosomalcondensationPCC）也是造成受精失敗的重要原因。除此之外，精子畸形（如圓頭精子）也會(huì)對ICSI受精率造成一定影響[7]。針對ICSI受精失敗的問題，近年來，不斷有文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)用卵母細(xì)胞輔助激

5、活（Assistedoocyteactivation，AOA）來改善結(jié)局，取得了較為明顯的效果。雖然目前在安全性方面仍然面臨很多爭議，但該技術(shù)的進(jìn)步使人們能夠成功克服ICSI后受精失敗，有望成為治療男性不育的重要輔助手段。除了精子方面的因素，卵母細(xì)胞本身在激活中也扮演著很重要的角色。有證據(jù)表明，卵母細(xì)胞在從GV期到MII期的成熟過程中建立起了Ca2的釋放機(jī)制，這期間細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)生了一系列的變化，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重組，IP3受體增加和生化性質(zhì)的改

6、變（對IP3敏感性增加），Ca2濃度升高等[22]。而細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的不完全成熟有可能會(huì)抑制卵母細(xì)胞對PLCζ的反應(yīng)[23]。同時(shí)，還有人認(rèn)為卵母細(xì)胞內(nèi)的線粒體也可通過IP3和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)Ca2信號通路[24]。2ICSI受精失敗患者精子激活能力的檢測與診斷對于ICSI受精失敗的患者，我們需要確認(rèn)導(dǎo)致ICSI受精失敗的是精源性因素還是卵源性因素，以便于制定相應(yīng)的后續(xù)治療方案。目前來說，小鼠卵母細(xì)胞激活檢測（themouseoocyteac

7、tivationtestMOAT）是較為可靠的檢測方法之一，其原理是用患者的精子對小鼠卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI，通過檢測卵母細(xì)胞的受精率，來評估患者精子的激活能力是否正常。一般根據(jù)受精率的高低把患者分為三組：1.激活率≤20%，為低激活組；2.激活率在21%84%之間，為中等激活組；3.激活率≥85%，為高激活組[25]。處于低激活組的患者提示其有精源性的功能障礙，處于高激活組的患者提示其精子激活能力正常，而處于中等激活組的患者，其受精率尚

8、不足以證明其精子的激活能力正常，還需要對其鈣離子震蕩的頻率和振幅進(jìn)行檢測以確認(rèn)結(jié)果。但是這種技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中還是有很多不足，第一，只有當(dāng)精子的激活率處于極低水平（≤20%）時(shí)才能認(rèn)為是精源性功能障礙，當(dāng)激活率高于該水平時(shí)依然無法確定受精失敗的原因；第二，人精子的磷脂酶Cζ活性高于小鼠[26]，如果MOAT結(jié)果提示患者精子對小鼠卵母細(xì)胞激活率只是略低于正常水平，實(shí)際上有可能該患者的精子并不足以激活人卵母細(xì)胞。這些因素都會(huì)降低MOAT結(jié)果的

9、準(zhǔn)確性，同時(shí)該實(shí)驗(yàn)還需要穩(wěn)定的小鼠卵母細(xì)胞來源，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，也限制了該方法的廣泛應(yīng)用。有研究者比較了正常人和ICSI后受精失敗患者精子的MOAT結(jié)果，發(fā)現(xiàn)受精失敗患者組的2PN率為0%(046)，而對照組的2PN率為81.5%(6681)[27]，也可以證實(shí)受精失敗患者精子的激活能力低于常人。考慮到精子中的PLCζ在卵母細(xì)胞激活中的關(guān)鍵性作用，有人提出可以通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測患者精子中PLCζ的表達(dá)量，以此作為評價(jià)精子激活能力的依據(jù)[2