油田污染土壤中石油降解菌的篩選、鑒定及其微生物多樣性分析.pdf

1、石油在給人們帶來巨大經(jīng)濟利益的同時，也對生態(tài)環(huán)境造成了巨大威脅。在其勘察、開采、儲存及運輸過程中，油田周圍大面積土壤都受到嚴重的污染，對自然環(huán)境及動、植物均會造成不同程度的危害，因此，石油污染土壤的治理具有重要意義。目前，治理石油污染土壤的方法主要有物理修復、化學修復以及生物修復，其中，生物修復（包括微生物修復和植物修復）方法因具有成本低、效果優(yōu)、無二次污染、可大面積應用等優(yōu)點而受到人們的廣泛關注。
　　本論文對中國江蘇省淮安市金

2、南油田（119°02′26.60″E，32°57′11.53″N）距油井不同距離的石油污染土壤進行取樣，通過氣相色譜法初步分析了采油區(qū)土壤中各組分的分布情況；采用平板分離技術對樣本中的石油降解菌株進行分離、純化并對純培養(yǎng)進行理化性質、降解性能的測定；運用16S rRNA序列鑒別技術及克隆測序技術對細菌的序列進行比對分析，并初步分析了功能基因的分布情況；利用 PCR-DGGE微生物群落分析技術和克隆測序技術對污染源不同距離的石油污染土壤中

3、的微生物多樣性進行分析，考察微生物群落多樣性與環(huán)境因子的關系，識別污染土壤中的優(yōu)勢菌群，旨在為石油污染土壤降解菌群的構建及原位生物修復提供理論依據(jù)。
　　分別使用烘干法和氣相色譜法對選定油井周邊不同距離的土壤進行理化指標和石油烴類含量的測定，了解樣本的初始特征及污染程度；以原油為唯一碳源，篩選出9株具有石油降解功能的菌株，分別命名為JSA01、JSA02、JSA03、JSB01、JSB02、JSB03、JSC01、JSC02、JS

4、D01。經(jīng)形態(tài)觀察、生理生化反應和分子技術方法鑒定，確定9株菌隸屬于 Pseudomonas、 Raoultella、 Lysinibacillus、 Escherichia、Klebsiella；進一步利用通過16S rRNA基因序列同源性分析等研究方法對石油降解菌的系統(tǒng)發(fā)育地位進行確定。
　　對石油降解菌的基因組 DNA及質粒 DNA進行提取，進一步探究alkB、 LmPH、 GSTs三種功能基因的分布情況；結果表明，GSTs