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文檔簡介
1、植物組織培養(yǎng)術語及常見英漢對照植物組織培養(yǎng)術語及常見英漢對照★植物組織培養(yǎng)(PlantTissueCulture):是指通過無菌操作分離植物體的一部分(外植體explant),接種到培養(yǎng)基上,在人工控制的條件下(包括營養(yǎng)、激素、溫度、光照、濕度)進行培養(yǎng),使其產(chǎn)生完整植株的過程。(主要有原生質體(Protoplast),懸浮細胞,組織(愈傷組織Callus、莖尖分生組織),器官(胚,花藥,子房,根和莖)的培養(yǎng)。其中最常見的是愈傷組織培養(yǎng)
2、。)★愈傷組織(Callus):原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團薄壁細胞,在組培中則指人工培養(yǎng)基上由外植體長出來的一團無序生長的薄壁細胞。★植物細胞全能性(Cellulartotipotency):任何具有完整細胞核的植物細胞,都擁有形成一個完整植珠所必須的全部遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。(Haberlt1902)★微(快)繁步驟(micropropagation):母株(完整)→外植體(母株的一小部分,種子亦可)→接種到培養(yǎng)
3、基上→長芽(繼代增殖)→長根(試管外生根亦可)→練苗,馴化→完整植株★組培發(fā)展簡史:細胞學說:Schleiden和Schwann。1.探索:20世紀初,Haberlt提出“細胞全能性”(1902);1904年,Hanning培養(yǎng)蘿卜和辣根菜的胚成功;Laibach(19251929)亞麻種間雜種胚培養(yǎng)成功,證明胚培養(yǎng)在植物遠緣雜交上可利用;1922年,Robiins(美)和Kotte(德)離體根尖培養(yǎng)成功。2.奠基:Gautheret,
4、White和Nobecourt,組培奠基人。White和Gautheret發(fā)現(xiàn)了B族維生素和生長素;Skoog(1944)和Skoog和崔(1951)等發(fā)現(xiàn)腺嘌呤和生長素的比例控制芽和根的形成,Overbeek等(1941)首次將椰子汁(CM)作為添加劑,Steward等在胡蘿卜組培也使用CM;1952年,Mel和Martin首次證實通過莖尖離體培養(yǎng)可獲無病毒植株;19531954年,Muir單倍體培養(yǎng)獲得成功;1955年,Miller
5、分離出激動素(KT);1957年,Skoog和Miller提出植物激素控制器官形成的概念;1958年,Steward首次證實Haberlt的細胞全能性設想;Wickson和Thimann指出CTK打破腋芽休眠;Murashige發(fā)展快繁技術;19581959年,Reinert和Steward胡蘿卜愈傷組培中形成體細胞胚。3.迅速發(fā)展:1971年,Takebe首次由煙草原生質體獲得再生植株;1972年,Carlson獲得煙草的第一個體細胞
6、雜種;1964年,Guha和Maheshwari由毛曼佗羅離體花藥培養(yǎng)胚;1960年,Mel提出離體無性繁殖蘭花?!锝M培意義:1、基礎理論研究(試驗體系的準確性和可重復性,廣泛用于細胞、組織的代謝生理及其它生化等方面的研究(如分化問題))。2、應用研究(無性繁殖系快速繁殖的生產(chǎn)、試管苗的商品化,遺傳育種,種質保存,克服遠緣雜交,種質資源創(chuàng)新,獲得轉基因植株)?!锝M培應用前景:1、作物育種上的應用(1、花藥和花粉培養(yǎng)2、胚胎培養(yǎng)3、細胞融
7、合4、基因工程5、培養(yǎng)細胞突變體6、種質保存)2、作物脫毒和快繁上的應用(馬鈴薯,蘭花)3、在植物有用產(chǎn)物生產(chǎn)上的應用4、在遺傳、生理、生化和病理研究上的應用。★植物激素調控:auxinCTK1(促進生根);=1(愈傷組織);1(促進發(fā)芽)★脫分化(dedifferentiation):在組織培養(yǎng)中,不分裂的靜止細胞,放在一定的培養(yǎng)基上后,細10mm的莖段和直徑10mm的葉片部分(太大激素作用減弱,太小則不易成活)?!锵咀⒁馐马棧?、
8、表面消毒劑對植物組織是有害的,應正確選擇消毒劑的濃度和處理時間,以減少組織的死亡。2、在表面消毒后,必須用無菌水漂洗材料3次以上以除去殘留殺菌劑,但若用酒精消毒,則不必漂洗。3、與消毒劑接觸過的切面在轉移到無菌基質前需將其切除,因為消毒劑會阻礙植物細胞對基質中營養(yǎng)物質的吸收。4、若外植體污染嚴重則應先用流水漂洗1小時以上或先種子培養(yǎng)得到無菌種苗,然后用其各個部分建立組織培養(yǎng)。5、HgCl2效果最好,但對人的危害最大,用后要用水沖洗至少5
9、次?!锴o尖培養(yǎng):切取莖的先端部分或莖的分生組織部分進行無菌培養(yǎng)。步驟:無菌培養(yǎng)的建立→芽的誘導→生根培養(yǎng)→試管苗的移栽(遺傳變異)注意點:試管苗移栽過程中,由異養(yǎng)→自養(yǎng),恒溫→溫差,無菌→有菌,光弱→光強,濕度高→濕度低,應該保持苗的水分平衡(加塑料薄膜和使用噴霧機),選擇適當?shù)幕|,注意光、溫的條件?!锊欢ㄅ叩恼T導:組織片→含有24D的培養(yǎng)基上→產(chǎn)生不定胚→去除24D的培養(yǎng)基上→球型胚→心型胚→魚雷型胚→植物體。不定芽的誘導:用BA誘
10、導,在球、心、魚雷時要去除BA?!锱咛ヅ囵B(yǎng)的意義:1、對于胚乳發(fā)育不良或胚與胚乳間不親和的材料進行離體胚培養(yǎng),有助于遠緣雜交獲得成功。2、為研究胚在各個發(fā)育時期的營養(yǎng)需要提供了一個很好的機會。3、能對整個胚及其各部分的再生潛力進行研究?!锱吲囵B(yǎng)中的兩個重要問題:1、胚剝離的方法:剝離的最佳時間是授粉后1315天。2、培養(yǎng)基的成分:找到合適的培養(yǎng)基,在胚培養(yǎng)中加入蔗糖(能源、保持適當滲透壓)?!锘ㄋ幣囵B(yǎng)方法:取材地點:大田和溫室。取材:大
11、多采用單核期的花粉培養(yǎng),因誘導產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體的頻率較高。花粉時期的確定:常采用醋酸洋紅碘化鉀染色,再壓片鏡檢。實際操作中常根據(jù)花蕾長度、大小與花粉年齡的相關性確定。預處理:低溫、高溫或交叉處理。培養(yǎng)基:有MS,Nitsch,Miller,B5和N6。低濃度的生長素和細胞分裂素相結合,高濃度的蔗糖對花粉的誘導生長有一定作用。培養(yǎng)基中加入活性炭對提高誘導頻率也有一定效果。消毒、接種和培養(yǎng):花藥→在燒杯中研碎(有溶劑)→過濾→濃度梯度離
12、心→收集中間層→離心。單倍體的鑒定和加倍處理:單倍體用2%秋水仙素處理24小時,愈傷組織細胞自然加倍?!锘ǚ刍ㄋ幣囵B(yǎng)的意義:1、在單倍體細胞中只有一個染色體組,表現(xiàn)型和基因型一致,一旦發(fā)生突變,無論是顯性還是隱性,在當代就可表現(xiàn)出來,因此單倍體是體細胞遺傳研究和突變育種的理想材料。2、在品種間雜交育種過程中,通過F1代花藥培養(yǎng)得到單倍體后,經(jīng)染色體加倍立即成為純合二倍體,從雜交到獲得不分離的雜種后代單株只需要2個世代和常規(guī)育種相比,顯著
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