微生物大小的測定及顯微鏡直接計數(shù)法

1、微生物學實驗報告姓名年級班級組別一組同組者科目微生物題目微生物大小和數(shù)量的測定儀器編號一、目的要求目的要求1學習并掌握使用顯微鏡測微尺測定微生物大小的方法。2了解血球計數(shù)板的構(gòu)造、明確其計數(shù)原理。3學習并掌握使用血球計數(shù)板測定微生物細胞或孢子數(shù)量的方法。二、基本原理基本原理l顯微測微尺可用于測量微生物細胞或孢子的大小，包括鏡臺測微尺和目鏡測微尺兩個部件。鏡臺測微尺全長1mm，等分為100格，每格0.01mm。用于校正目鏡測微尺沒小哥的長

2、度.目鏡測微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.測量前應預先用鏡臺測微尺來校正并計算出在某一放大鏡下目鏡測微尺每小格所代表的實際長度再以后作為測量微生物細胞的長度.目鏡測微尺每格長度（μm）=（兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)x10）兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2.球菌用直徑表示大?。粭U菌用寬和長來表示μm圖一：測微尺的校正3顯微直接計數(shù)法：將小量待測樣品懸浮液置于計菌器上，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。顯微計數(shù)法適用于各種含

3、單細胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如酵母、細菌、霉菌孢子等。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數(shù)板，一般細菌則采用彼得羅夫霍澤（PetrofHausser）細菌計數(shù)板或Hawksley計數(shù)板。三種計數(shù)板的原理和部件相同，只是細菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計數(shù)板下部的細菌不易看清。血球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個平臺。中間較寬的平臺，被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數(shù)

4、區(qū)。計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)（大方格）分為16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。計數(shù)區(qū)由400個小方格組成。每個大方格邊長為1mm，其面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，蓋載玻片間的高度為0.1mm，所以每個計數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3。使用血球計數(shù)板計數(shù)時，通常測定五個中方格的微生物數(shù)量，求其平均值，再乘以25或16，就得到一個大方格的總菌數(shù)，然后再換算成1（

5、3）菌體大小的測定1制作枯草芽孢桿菌的單染色制片洗片→干燥→加熱、固定、干燥→結(jié)晶紫染色2min→自然干燥2制作酵母水浸片玻片中央滴一滴美藍→接種酵母菌→蓋蓋玻片3將鏡臺測微尺取下，換上細菌制片，先在低倍鏡和高倍鏡下找到目的物，然后在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的大小。先量出菌體的長和寬占目鏡測微尺的格數(shù)，再以目鏡測微尺每格的長度計算出菌體的長和寬。同一種群中的不同菌體細胞之間也存在個體差異，因此在測定每一種菌種細胞大小時應對多個細胞進行

6、測量，然后計算取平均值。2顯微鏡計數(shù)。（1）血球計數(shù)板清洗。（2）自然干燥。（3）對酵母菌液進行適當?shù)奶荻认♂尅Ｈ≡?mL到試管中，用移液管移取9mL水注入試管中。再取上一次稀釋的菌液中的1mL加到另一支試管中，加9mL水。依此類推。即可得到一系列稀釋梯度的菌液。（4）加樣品。血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，將酵母菌懸液搖勻，用無菌滴管吸取少許，從計數(shù)板平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一滴，利用表面張力溝槽中流出多余的菌懸液。加樣后靜置5m

7、in，使細胞或孢子自然沉降。（5）將加有樣品的血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數(shù)。若發(fā)現(xiàn)菌液太濃，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)有不多于8個個菌體。每個計數(shù)室選5個中格（可選4個角和中央的一個中格）中的菌體進行計數(shù)。若有菌體位于格線上，則計數(shù)原則為計上不計下，計左不計右。如遇酵母出芽，芽體全記或全不計。（6）清洗。使用完畢后，將血球計數(shù)板及蓋玻片進行清洗、干燥，放回盒

8、中，以備下次使用。5、注意事項注意事項（1）使用鏡臺測微尺進行校正時，若一時無法直接找到測微尺，可先對刻尺外的圓圈線進行準焦后再通過移動標本推進器進行尋找。（2）細菌的個體微小，在進行細胞大小測定時一般應選用油鏡，以減小誤差。（3）進行顯微鏡計數(shù)時應先在低倍鏡下尋找大方格的位置，找到計數(shù)室后將其移至視野中央，再換高倍鏡觀察和計數(shù)。（4）酵母菌計數(shù)加樣品前，一定將菌液搖勻。（5）為了確定稀釋梯度，可以先將酵母菌的原液加到計數(shù)板上計數(shù)。六、