土壤中提取放線菌

1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?掌握配置合成培養(yǎng)基的一般方法2掌握稀釋倒平板法從土壤中分離放線菌的原理與方法3掌握放線菌的染色及制片方法4了解放線菌的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，并能夠加以區(qū)分二、實(shí)驗(yàn)原理：（一）、綜述：放線菌在自然界分布廣泛，主要以孢子或菌絲狀態(tài)存在于土壤、空氣和水中，尤其是含水量低、有機(jī)物豐富、呈中性或微堿性的土壤中數(shù)量最多。土壤特有的泥腥味，主要是放線菌的代謝產(chǎn)物所致。（二）、菌落特征：放線菌的菌落由菌絲體組成。一般圓形、光平或有許多皺褶，光學(xué)顯微

2、鏡下觀察，菌落周圍具輻射狀菌放線菌絲?？偟奶卣鹘橛诿咕c細(xì)菌之間，因種類不同可分為兩類：一類是由產(chǎn)生大量分枝和氣生菌絲的菌種所形成的菌落。鏈霉菌的菌落是一類型的代表。鏈霉菌菌絲較細(xì)，生長(zhǎng)緩慢，分枝多而且相互纏繞，故形成的菌落質(zhì)地致密、表面呈較緊密的絨狀或堅(jiān)實(shí)、干燥、多皺，菌落較小而不蔓延；營(yíng)養(yǎng)菌絲長(zhǎng)在培養(yǎng)基內(nèi)，所以菌落與培養(yǎng)基結(jié)合較緊，不易挑起或挑起后不易破碎：當(dāng)氣生菌絲尚未分化成孢子絲以前，幼齡菌落與細(xì)菌的菌落很相似，光滑或如發(fā)狀纏結(jié)

3、。有時(shí)氣生菌絲呈同心環(huán)狀，當(dāng)孢子絲產(chǎn)生大量孢子并布滿整個(gè)菌落表面后，才形成絮狀、粉狀或顆粒狀的典型的放線菌菌落；有些種類的孢子含有色素，使菌落有面或背面呈現(xiàn)不同顏色，帶有泥腥味。另一類菌落由不產(chǎn)生大量菌絲體的種類形成，如諾卡氏放線菌的菌落，粘著力差，結(jié)構(gòu)呈粉質(zhì)狀，用針挑起則粉碎。若將放線菌接種于液體培養(yǎng)基內(nèi)靜置培養(yǎng)，能在瓶壁液面處形成斑狀或膜狀菌落，或沉降于瓶底而不使培養(yǎng)基混濁；如以震蕩培養(yǎng)，常形成由短的菌絲體所構(gòu)成的球狀顆粒。（三）、

4、形態(tài)與結(jié)構(gòu)：1菌絲（mycelium）：放線菌種類很多，多數(shù)放線菌具有發(fā)育良好的分支狀菌絲體，少數(shù)為桿狀或原始絲狀的簡(jiǎn)單形態(tài)。菌絲大多無隔膜，其粗細(xì)與桿狀細(xì)菌相似，直徑為1微米左右。根據(jù)菌絲的著生部位、形態(tài)和功能的不同，放線菌菌絲可分為基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種。（1）基內(nèi)菌絲(substratemycelium)：又稱初級(jí)菌絲或者營(yíng)養(yǎng)菌絲.色淡，主要功能是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和排泄代謝產(chǎn)物。可產(chǎn)生黃、藍(lán)、紅、綠、褐和紫等水溶色素和脂溶性色

5、素，色素在放線菌的分類和鑒定上有重要的參考價(jià)值。放線菌中多數(shù)種類的基內(nèi)菌絲無隔膜，不斷裂，如鏈霉菌屬和小單孢菌屬等；但有一類放線菌，如諾卡氏菌型放線菌的基內(nèi)菌絲生長(zhǎng)一定時(shí)間后形成橫隔膜，繼而斷裂成球狀或桿狀小體。（2）氣生菌絲（aerialmycelium）：是基內(nèi)菌絲長(zhǎng)出培養(yǎng)基外并伸向空間的菌絲，又稱二級(jí)菌絲。在顯微鏡下觀察時(shí)，一般氣生菌絲顏色較深，比基內(nèi)菌絲粗，長(zhǎng)度相差懸殊，形狀直伸或彎曲，可產(chǎn)生色素，多為脂溶性色素。（3）孢子絲（

6、spehypha）：是當(dāng)氣生菌絲發(fā)育到一定程度，其頂端分化出的可形成孢子的菌絲，叫孢子絲，又稱繁殖菌絲.放線菌孢子絲的形態(tài)及其在氣生菌絲上的排列方式，隨菌種不同而異，是鏈球菌菌種鑒定的重要依據(jù)。孢子絲的形狀有直形、波曲、鉤狀、螺旋狀.螺旋狀的孢子絲較為常見，其螺旋的松緊、大小、螺數(shù)和螺旋方向因菌種而異。孢子絲的著生方式有對(duì)生、互生、叢生與輪生等多種。2孢子（spe）：孢子絲發(fā)育到一定階段便分化為孢子。在光學(xué)顯微鏡下，孢子呈圓形、橢圓形、

7、桿狀、圓柱狀、瓜子狀、梭狀和半月狀等，即使是同一孢子絲分化形成的孢子也不完全相同，因而不能作為分類、鑒定的依據(jù)。孢子的顏色十分豐富。3孢囊：生孢囊放線菌的特點(diǎn)是形成典型孢囊，孢囊著生的位置因種而異。有的菌孢囊長(zhǎng)在氣絲上，有的菌長(zhǎng)在基絲上。孢囊外圍都有囊壁，無壁者一般稱假孢囊。孢囊有圓形、棒狀、指狀、瓶狀或不規(guī)則狀之分。孢囊內(nèi)原生質(zhì)分化為孢囊孢子，帶鞭毛者遇水游動(dòng)，如游動(dòng)放線菌屬；無鞭毛者則不游動(dòng)，如鏈孢囊菌屬。（四）、觀察方法：1插片培

8、養(yǎng)觀察：將放線菌菌種制成孢子懸液后（濃度以10—2—10—3為好），取0.2ml放在適合放線菌生長(zhǎng)的平板培養(yǎng)基上，用玻璃刮鏟涂布均勻，然后將滅過菌的蓋玻片斜插入固體培養(yǎng)基中，置28—32℃下培養(yǎng)，3—5天后取出蓋玻片放在載玻片上鏡檢，可見放線菌的自然生長(zhǎng)的個(gè)體形態(tài)。2壓片觀察：取放細(xì)菌培養(yǎng)體一塊，應(yīng)帶培養(yǎng)基，放在載玻片上，用另一載玻片對(duì)準(zhǔn)菌塊的氣生菌絲輕輕按壓，然后將載玻片垂直拿起。將印有放線菌的涂面朝上，通過酒精燈火焰2～3次加熱固定

9、。染色1min。水洗，晾干。本次實(shí)驗(yàn)采用了壓片觀察三、實(shí)驗(yàn)器材試劑：10%酚、可溶性淀粉、硝酸鉀、氯化鈉、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸鐵、瓊脂、草酸氨結(jié)晶紫儀器：藥匙、燒杯、量筒、玻璃棒、三角燒瓶、培養(yǎng)皿、試管、棉花、紗布、接種環(huán)、接種針、載玻片、酒精燈、滅菌鍋四、實(shí)驗(yàn)過程1將自己所需的玻璃器皿包扎好，并滅菌2配置高氏1號(hào)固體培養(yǎng)基和生理鹽水并裝瓶和試管3采取土樣→烘干并研磨→稱取1g溶于99ml水配成0.01的溶液→搖晃20分鐘，再靜置→