hplc故障及排除方法

1、診狀診狀可能的原因可能的原因解決方法1.柱溫變化柱恒溫2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱3.緩沖液容量不夠用25mmolL的緩沖液4.柱污染每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件調(diào)節(jié)流動(dòng)相(一)保留時(shí)間變化保留時(shí)間變化6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱1.流速增加檢查泵重新設(shè)定流速2.樣品超載降低樣品量3.鍵合相流失流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向4.流動(dòng)相組成變化防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀(二)保留時(shí)間縮短保留時(shí)間

2、縮短5.溫度增加柱恒溫1.流速下降管路泄漏更換泵密封圈排除泵內(nèi)氣泡2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動(dòng)相改性劑如加三乙胺或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失同前(二)34.流動(dòng)相組成變化同前(二)4(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)保留時(shí)間延長(zhǎng)5.溫度降低同前(二)51.樣品體積過大用流動(dòng)相配樣總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱采用較弱腐蝕性條件4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼加在線過濾器過濾樣品(

3、四)出現(xiàn)肩峰或分叉出現(xiàn)肩峰或分叉5.進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子1.進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥改進(jìn)閥和樣品的清洗2.樣品中未知物處理樣品3.柱未平衡重新平衡柱用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天新配用抗氧化劑(五)鬼峰鬼峰5.水污染(反相)通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水1.氣泡(尖銳峰)流動(dòng)相脫氣加柱后背壓(六)2.污染(隨機(jī)噪聲)清洗柱凈化樣品用HPLC級(jí)試劑3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪

4、聲更換氘燈4.電干擾(偶然噪聲)采用穩(wěn)壓電源檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)基線噪聲基線噪聲5.檢測(cè)器中有氣泡流動(dòng)相脫氣加柱后背壓1.柱超載降低樣品量增加柱直徑采用較高容量的固定相2.峰干擾清潔樣品調(diào)整流動(dòng)相3.硅羥基作用加三乙胺用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值鈍化樣品4.同前(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)36.死體積或柱外體積過大連接點(diǎn)降至最低對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管(七)峰拖尾峰拖

5、尾7.柱效下降用較低腐蝕條件更換柱采用保護(hù)柱1.進(jìn)樣體積過大同(四)12.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%5.流動(dòng)相粘度過高增加柱溫采用低粘度流動(dòng)相6.檢測(cè)池體積過大用小體積池卸下熱交換器7.保留時(shí)間過長(zhǎng)等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫8.柱外體積過大將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小(八)峰展寬峰展寬9.樣品過載