耳聾操作培訓(xùn)

1、凱普技術(shù)支持中心2016.09,凱普耳聾產(chǎn)品操作培訓(xùn),成人男性和女性及新生兒（或患兒）外周血及血斑 抗凝外周血全血(不可用肝素抗凝)?？鼓?-8℃存放7天以內(nèi)；在-20℃或 -80℃；保存時(shí)間可至兩年以上，但要避免反復(fù)凍融。濾紙干血斑樣本：制備完成的采集卡常溫、干燥、避光最多可保存3周， 2℃~8℃可保存一個(gè)月， -20℃可保存三個(gè)月。羊水 羊水穿刺檢查宜在孕16～21周進(jìn)行。2~8℃保存不超過24h，-20

2、℃或 -80℃其保存時(shí)間可至半年以上。建議先將羊水離心收集細(xì)胞后，倒掉上清再冷凍保存，以免細(xì)胞裂解，核酸釋放到液體中，影響DNA產(chǎn)量。 絨毛膜 早孕絨毛采樣檢查宜在孕8～11周進(jìn)行。2~8℃保存不超過24h，-20℃或 -80℃其保存時(shí)間可至半年以上,,適用樣本及保存時(shí)間,抗凝血全血樣本DNA提取方法,血液取樣前應(yīng)混合均勻,裂解過程中最好顛倒幾次，有利于裂解充分,加4度冰凍的無水乙醇可提高DNA回收效率,TE洗脫液

3、可稍微加熱，并將洗脫液加至硅膠膜上靜置再進(jìn)行離心洗脫，有利于提高DNA的回收率。,羊水樣本DNA提取方法,1）取5-10ml羊水樣本，放入合適的離心管中，4000rpm離心10min2）去上清，在離心管中加入400ml的生理鹽水或溶液P，混勻3）取步驟2中的溶液200ul，下同血液DNA提取方法。剩余標(biāo)本保存，以備復(fù)查使用,血斑樣本DNA提取方法,以下步驟同血液DNA提取相同,注意：1，解凍完全的MIX試劑和-20℃保存的Taq酶

4、取出后需點(diǎn)動(dòng)離心（必須?。甙聪鄳?yīng)的比例混合后，輕力混勻，點(diǎn)動(dòng)離心。Taq酶不能在室溫放置時(shí)間過久2，因MIX和酶在混合后分裝過程中會(huì)有損失，建議在配試劑時(shí)A、B組按28μl進(jìn)行計(jì)算3，若DNA質(zhì)量不佳，在加模板時(shí)可適當(dāng)加大模板量0.5-1μL4, MIX應(yīng)避免反復(fù)凍融,擴(kuò)增體系的配置,耳聾易感基因擴(kuò)增為多重PCR擴(kuò)增，對(duì)PCR儀質(zhì)量要求較高，建議選用進(jìn)口PCR儀(推薦使用ABI)，博日TC-96A PCR儀亦可。A

5、組耳聾和B組耳聾的PCR擴(kuò)增程序一樣，可同時(shí)在同一臺(tái)PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。最好選用進(jìn)口PCR管，PCR管避免長(zhǎng)時(shí)間在紫外線下照射，在上機(jī)前應(yīng)確保PCR管底無氣泡PCR擴(kuò)增完成后可在4℃暫存，如需過夜放置，需將PCR產(chǎn)物放置在-20℃,擴(kuò)增注意事項(xiàng),雜交過程及其注意事項(xiàng),同一樣本的A，B擴(kuò)增產(chǎn)物加在一個(gè)反應(yīng)室內(nèi),WB1清洗時(shí)一定要用低速排液,雜交過程及其注意事項(xiàng),雜交過程中實(shí)時(shí)問題處理參見21分型產(chǎn)品,結(jié)果判讀,耳聾結(jié)果判讀需謹(jǐn)慎對(duì)

6、待！,耳聾基因檢測(cè)結(jié)果由于無其他相關(guān)數(shù)據(jù)可供核對(duì)驗(yàn)證，因此對(duì)結(jié)果的判讀應(yīng)當(dāng)尤為謹(jǐn)慎。對(duì)于新生兒篩查等標(biāo)本量較大的項(xiàng)目，陽性率相對(duì)較低，可以通過對(duì)陽性標(biāo)本進(jìn)行測(cè)序以確認(rèn)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)雜交信號(hào)不強(qiáng)、背景不好的試驗(yàn)結(jié)果，需謹(jǐn)慎對(duì)待；特別是對(duì)于線粒體DNA的相關(guān)位點(diǎn)如1494M、1555M，如無法確定是否有雜交信號(hào)需重做。對(duì)于雙重雜合或純合子，最好能夠安排再次重檢，以再次確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,結(jié)果判讀,耳聾檢測(cè)結(jié)果判讀需謹(jǐn)慎對(duì)待！,免費(fèi)測(cè)

7、序范圍,1 、正常對(duì)照點(diǎn)和突變點(diǎn)均未出的樣本，已經(jīng)過兩次或以上的復(fù)查，結(jié)果仍是如此的；2、正常對(duì)照點(diǎn)顯色正常，而突變位點(diǎn)的顯色較淺的樣本，已經(jīng)過兩次或以上的復(fù)查，結(jié)果仍是如此的；3、 檢測(cè)結(jié)果與其它產(chǎn)品不一致4、 試驗(yàn)結(jié)果與理論不符,測(cè)序服務(wù),標(biāo)本郵寄地址：廣州市黃埔區(qū)中新知識(shí)城鳳凰三橫路71號(hào)收件人：姚婕：15880292285 。需測(cè)序標(biāo)本在寄送前需告知負(fù)責(zé)該家醫(yī)院的市場(chǎng)或技術(shù)人員以便后期跟進(jìn)。因快遞公司不接受血液樣

8、品的郵寄工作，建議醫(yī)院將血液包裝過后郵寄，并附帶樣本基本情況的說明。,試劑盒范圍內(nèi)測(cè)序服務(wù),試劑盒范圍外測(cè)序服務(wù),試劑盒范圍外的特殊樣本從醫(yī)院正式開展之日起一年內(nèi)提供免費(fèi)服務(wù)，之后按200元/例的標(biāo)準(zhǔn)收費(fèi)。如臨床樣本中發(fā)現(xiàn)稀有型別，合作的學(xué)術(shù)成果，包括文章，專利等，公司和醫(yī)院共享。,測(cè)序服務(wù),,,1 廣東省內(nèi)：送測(cè)之日起8至12個(gè)工作日。2 廣東省外：送測(cè)之日起20個(gè)工作日。（因血液制品需走陸運(yùn)，故省外樣本的測(cè)序時(shí)間較長(zhǎng)）3 臨