動(dòng)物實(shí)驗(yàn)graduate-2013

1、第八章 醫(yī)學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)動(dòng)物的選擇及應(yīng)用,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)田楓2010.01,“I’m so proud! All of my kids are going into research”,主要內(nèi)容,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇人類疾病動(dòng)物模型影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是根據(jù)研究目的，恰當(dāng)?shù)剡x用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品種、品系，進(jìn)行各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)，觀察和記錄動(dòng)物的反應(yīng)過程或反應(yīng)結(jié)果，以探討或檢

2、驗(yàn)生命科學(xué)中未知因素的一種活動(dòng)。是生物研究中的重要方法之一，也是從動(dòng)物身上獲得有關(guān)情報(bào)資料的唯一手段。,關(guān)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)（續(xù)）,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇,相似性原則特殊性原則標(biāo)準(zhǔn)化原則規(guī)格化原則經(jīng)濟(jì)性原則,原則,,相似性原則,利用與人體某些機(jī)能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病特點(diǎn)的相似性選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織結(jié)構(gòu)：豬的皮膚組織結(jié)構(gòu)與人類的相似系統(tǒng)機(jī)能：犬有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)，毒理方

3、面反應(yīng) 和人也較接近繁殖特性：哺乳動(dòng)物和人近似，性成熟、妊娠期和壽命一般是 成比例的疾病特點(diǎn)：如旱獺肝炎病毒感染體液成分：鳥類糞尿混合排出；草食動(dòng)物尿液呈堿性；肉食動(dòng) 物尿液呈酸性。選擇時(shí)要注意解剖特性：有些動(dòng)物的解剖結(jié)構(gòu)與人類差別較大，要特別注意,特殊性原則,發(fā)熱、解熱

4、和檢查致熱源實(shí)驗(yàn)-----適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)；開胸和心臟實(shí)驗(yàn)----適宜選用兔做實(shí)驗(yàn)；觀察藥物對排卵的影響，進(jìn)行避孕藥研究-----適宜選用兔、貓；動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)-----適宜選用兔、豬、猴；肝外科實(shí)驗(yàn)研究------適宜選用大鼠；膽囊功能研究------不能選用大鼠；,充分利用不同品種品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存在的某些特殊反應(yīng),供研究用近交系小鼠,實(shí) 驗(yàn) 研 究 類 別 動(dòng) 物 品 系心血管疾病

5、 DBA／2N自身免疫性疾病 NZB／N、 腦積水 C57BL／KaLwN、 D2／nSnN腎盂積水 C57L／N、STR／N 白內(nèi)障 STA

6、R／N 牙周病 DBA／2N (有抗力)、STR／N (易感)多尿癥 STR／N、STR／1N 白血病 L615、L7212腭 裂

7、 A／HeN (自發(fā))、C57BL／6N (誘發(fā))放射線 有抗力：C57BL／6N 敏感：BALB／cAnN，LACA． 淀粉樣變 A／HeN， NZW／N補(bǔ) 體 BALB／c A

8、nN (活性高) ． DBA／2N (活性低),人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在解剖、生理及代謝方面的比較,標(biāo)準(zhǔn)化原則,選擇與研究內(nèi)容相匹配的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物系指經(jīng)遺傳學(xué)、微生物學(xué)、環(huán)境及營養(yǎng)控制而繁育的動(dòng)物。,規(guī)格化原則,年齡----年齡不同，其生物學(xué)特性往往不同，一般選性成熟后的青壯年動(dòng)物。太小的動(dòng)物的生理功

9、能未達(dá)到成年水平。太老的動(dòng)物的各器官老化，代謝功能下降，只在老年醫(yī)學(xué)研究中使用；體重----在正常營養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件下，體重與年齡有一定的相關(guān)性；性別----許多實(shí)驗(yàn)證明，同一品種（系）不同性別的動(dòng)物對外界刺激的反應(yīng)不一致。,經(jīng)濟(jì)性原則,無菌兔,人類疾病動(dòng)物模型,,What is the Animal Model?,an animal model in which normative biology or behavior can

10、be studied, or in which a spontaneous or induced pathological process can be investigated, and in which the phenomenon in one or more respects resembles the same phenomenon in humans or other species of animal.醫(yī)學(xué)研究中建立的

11、具有人類疾病模擬表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對象和相關(guān)材料。,Classification of Animal Models,According to cause of the developingSpontaneous (genetic) disease models （自發(fā)）Induced (experimental) disease models （誘發(fā)/實(shí)驗(yàn)）Immunodeficiency animal model（免疫缺陷）遺傳

12、修飾動(dòng)物模型抗疾病動(dòng)物模型生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型,Spontaneous (genetic) Disease Models,These models of human disease use naturally occurring genetic variants (mutants). Many hundreds of strains and stocks with inherited disorders modeling similar

13、 conditions in humans have been characterized and conserved.指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未經(jīng)任何人工處置，在自然條件下動(dòng)物自然發(fā)生、或由于基因突變的異常表現(xiàn)通過遺傳育種保留下來的動(dòng)物模型。,Spontaneously Hypertensive Rats,Coat Color: AlbinoFeatures: used for studies in hypertension and card

14、iovascular research. Males, twelve weeks of age or older, dependably exhibit average systolic blood pressures greater than 200 mmHg. Progeny are monitored for elevated blood pressure to insure continued phenotypic expre

15、ssion of hypertension.,Details of Spontaneous Disease Models,血壓測定,C3H Mice,Coat Color: Black AgoutiFeatures: The C3H is widely used as a model for drug treatments of neurologic disorders with applications in toxicology

16、 and oncology. High incidence rate of breast cancer in female mice and liver cancer in male .,Non-Obese Diabetic (NOD) Mice,Coat Color: AlbinoFeatures: The NOD exhibits destructive autoimmune pancreatic insulitis as e

17、arly as four weeks of age. Insulin-dependent diabetes is seen in females by three months of age.,Senescence Accelerated Mouse,Established in the Department of Senescence Biology, Kyoto University, Japan as a novel murine

18、 model of senescence acceleration and age-associated disorders. This strain includes nine strains of accelerated senescence-prone, short lived mice (SAMP) and three strains of accelerated senescence-resistant, long liv

19、ed mice (SAMR).,Senescence Accelerated Mouse,Each SAMP strain shows relatively strain specific age-associated pathologies. These characteristic pathological phenotypes are similar to age-associated disorders often observ

20、ed in elder humans. They include senile osteoporosis, osteoarthrosis, age-related deficits in learning and memory with/without forebrain atrophy, presbycusis, senile amyloidosis, age-related impairment of the immune resp

21、onse and so on.,SAMP8,SAMR1,Moris,自發(fā)性動(dòng)物模型,包括裸鼠、SCID小鼠、白內(nèi)障小鼠、癲癇模型、肥胖癥小鼠、無毛小鼠、高血壓大鼠、青光眼兔等。,Assessment of Spontaneous Model,Advantages Spontaneously developing（自然發(fā)生） Similar to human diseases （與人類疾病有較好的相似性）Disadv

22、antage Limited quantity and difficult to apply （數(shù)量有限，應(yīng)用有難度）,Induced（Experimental) Disease Models,As the name implies, induced models are healthy animals in which the condition to be investigated is experimentally i

23、nduced.以物理的、化學(xué)的或生物的致病因素作用于動(dòng)物，造成動(dòng)物組織、器官或全身一定的損害，出現(xiàn)某些類似人類疾病時(shí)的功能、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的改變，以供研究用。,Tumor Animal Model,Induced tumor animal model 使用致癌因素在實(shí)驗(yàn)條件下誘發(fā)動(dòng)物發(fā)生腫瘤的動(dòng)物模型。Transplant tumor animal model 指將動(dòng)物或人體腫瘤移植同種或異種動(dòng)物 連續(xù)傳代而培養(yǎng)出

24、的模型。,Details of Induced disease models,Cardiovascular Diseases Animal Model,Atherosclerosis model：animals fed by high-fat and high cholesterol diet or non-feeding method Hypertension model：kidney packing、renal artery c

25、oarctation、noise stimulusMyocardial ischemia and myocardial infarction model： electric stimulus、drugs、coronary artery blockage,,,,,Diabetes Model,注射致高血糖因子，如生長激素、胰高糖素、糖皮質(zhì)激素以及兒茶酚胺類激素等。注射化學(xué)物質(zhì)引起胰島β細(xì)胞的損傷，如鏈脲佐菌素(STZ)、四氧嘧啶可

26、造成胰島β細(xì)胞不可逆損傷；環(huán)丙庚哌、天門冬素酶等可引起β細(xì)胞可逆性損傷。注射生物及生物制品引起β細(xì)胞破壞，如鼠腦炎、心肌炎病毒M型變異可誘發(fā)若干品系的成年小鼠糖尿病。手術(shù)切除胰腺的大部分或全部，并給予高糖飲食刺激，引起繼發(fā)性永久性糖尿病。,Assessment of Induced Model,Quantity enough（數(shù)量足夠）Condition accord（條件一致）和自然產(chǎn)生的疾病模型在某些方面存在一定差異

27、。,動(dòng)物模型復(fù)制原則,相似性可重復(fù)性可靠性適用性和可控性易行性和經(jīng)濟(jì)性,Immunodeficiency Animal Model,Animals is certain or some immunodeficiency because of spontaneous or artificial methods.由于先天遺傳突變或用人工方法造成 免疫系統(tǒng)某種或多種成分缺陷的動(dòng)物。,Classification of Im

28、munodeficiency Animal,Congenital Immunodeficiency animal （先天性） T-lymphocyte deficiency animal ：nude mice,nude rats B -lymphocyte deficiency animal ：CBA/N mice NK cell deficien

29、cy animal ：Beige mice Severe combined immunedeficiency：SCID miceAcquired immunodeficiency syndrom （獲得性） primate,mice and cat AIDS model,T-lymphocyte Deficiency Animal,History of Nude Mice,1962年英國格拉斯

30、哥醫(yī)院Grist在非近交系的小鼠中偶然發(fā)現(xiàn)有個(gè)別小鼠無毛。1966年證實(shí)是由于第11對染色體基因突變所致。1968年，Pantelouris解剖發(fā)現(xiàn)裸鼠失去了正常的胸腺。1969年Rygaard首先將人結(jié)腸腺癌移植裸小鼠獲得成功。 由于裸鼠原種抵抗力差，生育力低，壽命短，不能用于實(shí)際。和純系BALB/C，C3H，C57BL/6小鼠交配，不斷選育，獲得了三種近交系鼠（Inbred Nude Mice）新種。裸鼠自發(fā)現(xiàn)以來，廣泛應(yīng)

31、用于腫瘤學(xué)、免疫學(xué)和病毒學(xué)等多個(gè)學(xué)科的研究。,Anatomy and Physiology Feature,胸腺殘留一些上皮樣細(xì)胞；淋巴組織胸腺依賴區(qū)的淋巴細(xì)胞消失；外周血淋巴細(xì)胞減少。雖然有原始的T細(xì)胞，但缺乏成熟的T細(xì)胞。T細(xì)胞的輔助，抑制及殺傷功能不全。無接觸敏感性，無移植排斥，無移植物抗宿主反應(yīng)。B細(xì)胞數(shù)量正常但功能有缺陷，合成的免疫球蛋白主要是IgM，只有少量IgG。 粒細(xì)胞功能較低，NK細(xì)胞活性高。,裸大鼠 Nud

32、e Rats,毛色特征：（1）白色，黑色，黑白相間；（2）部分個(gè)體在發(fā)育的不同階段，會(huì)出現(xiàn)有毛和無毛現(xiàn)象的交替。品系來源： 1979-1980年期間，含有裸基因的8個(gè)近交系大鼠在一系列交配之后育成了NIH裸大鼠。2001年Charles River從NIH引入，進(jìn)行剖腹產(chǎn)凈化，命名為Crl:NIH-Foxn1rnu。2008年11月維通利華從Charles River引入該品系核心群。,裸大鼠 Nude Rats,繁育信

33、息：（1）1：1比例交配（♂rnu/rnu×♀rnu/+）（2）妊娠期21-23天，離乳期21天；（3）產(chǎn)仔數(shù)：10-12只/窩品系特征： 該品系沒有胸腺，缺乏T細(xì)胞，在胸腺外周淋巴器官的主要區(qū)域表現(xiàn)為細(xì)胞群體衰竭特征。主要用途： 腫瘤生物學(xué)和腫瘤移植研究：皮膚腫瘤與皮膚癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤；外傷與整形外科面的研究。,注意,裸鼠并不是真正意義上的無毛，長毛是一種正常的生理現(xiàn)象。裸鼠出生后大約十天左

34、右，在頭面部、頸部可見稀疏的毛發(fā)生長；隨著周齡增加，在軀干的其他部位也可見稀疏毛發(fā)的生長。這些穿透了表皮的毛桿也是嚴(yán)重扭曲的，而且經(jīng)常在長到應(yīng)有長度前就折斷了。,KM Hairless Mice,A: Heterozygous mice at 10 months.B, C: Homozygous mice at 10 months.The mutant mouse is covered with sparse hair, and ca

35、nnot open its eyes normally,Scd1ab-Xy mutation,,B-lymphocyte Deficiency Animal,CBA/N,B cell function is low,Severe Combined Immune Deficiency Animal,SCID mice,CB-17小鼠中由于第16對染色體隱性基因突變，純合突變導(dǎo)致淋巴細(xì)胞抗原受體基因VDJ區(qū)域重排的重組酶活性異常，基因重排

36、時(shí)斷裂無法正常連接，從而影響B(tài)、T細(xì)胞的正常功能分化。外觀體重與普通小鼠相同。對鼠肝炎，巴氏桿菌、卡氏肺囊蟲極易感染，感染后易發(fā)病死亡。SPF環(huán)境沒有B、T 陽性標(biāo)志細(xì)胞，對外來抗原無細(xì)胞和體液免疫NK、LAK細(xì)胞功能正?；蛟龈?；,Feature of SCID,The C.B-17-scid does exhibit extremely low levels of Ig in ~20% of the mice at 12 w

37、eeks of age. The incidence of Ig will increase as the mice age. Despite this “l(fā)eakiness” （滲漏）C.B-17-scid's do not mount an antibody response to challenge by immunogenic material.   (部分小鼠出現(xiàn)低水平的功能性T和B細(xì)胞,血清

38、中Ig含量明顯升高)。,C3H SCID小鼠,scid突變基因引入C3H小鼠中而育成C3H SCID重組近交系。C3H SCID小鼠與CB-17 SCID小鼠的不同除背景基因不同外，發(fā)現(xiàn)在三月齡時(shí)C3H SCID小鼠僅有15%可測到血清免疫球蛋白，而CB-17 SCID小鼠則達(dá)79%。C3H SCID小鼠并不因年齡的增長而增加血清免疫球蛋白陽性的比例，也不會(huì)隨年齡增加血清中免疫球蛋白濃度。,SCID.BG小鼠,利用BALB/c- b

39、eige/beige同源近交系（congenic strain）小鼠將beige基因引入CB-17 SCID小鼠。beige基因突變小鼠降低體內(nèi)NK細(xì)胞（Natural killer cells）活性。,NOD/Lt-SCID小鼠,用非肥胖糖尿病小鼠NOD/Lt與SCID小鼠雜交，降低了Nk細(xì)胞活性。,SHO（SCID Hairless Outbred）,人們一直想讓SCID小鼠擁有裸鼠無毛的優(yōu)點(diǎn)Charles River Lab的

40、研究人員自2007年開始就著手培育無毛的SCID小鼠，他們通過Crl:HA-Prkdcscid和Crl:SKH1-Hrhr這兩個(gè)品系雜交，最終在2008年得到了兩條染色體上均帶有SCID基因的無毛封閉群小鼠模型SHO（SCID Hairless Outbred）.2008年6月，實(shí)驗(yàn)人員通過對比的方法將人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3分別接種到SCID和SHO身上，研究發(fā)現(xiàn)，SHO除去具有與SCID小鼠相同的腫瘤生長特性之外，還摒除了Nu/N

41、u裸鼠接種PC-3時(shí)出現(xiàn)的皮膚潰瘍現(xiàn)象。,,,免疫系統(tǒng)人源化小鼠,將人的胚胎胸腺造血干細(xì)胞等移植到免疫缺陷小鼠，可有效地建立人類天然與適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。免疫系統(tǒng)相關(guān)疾病研究及免疫藥物研發(fā)提供了良好實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。未來人源化小鼠模型的發(fā)展趨勢是為免疫缺陷小鼠敲入多種人的基因，使小鼠體內(nèi)表達(dá)人的細(xì)胞因子或其他受體，從而獲得更好的人來源的細(xì)胞重建。,Other Immune Deficiency Animal,,NZBW F1 野生色,

42、WBB6F1—W/WV （WB—W/+♀XC5TBL/6—WV/+）F1,Anaemia, gastric ulcer，bone marrow failure modelWhite,black eye,疾病動(dòng)物模型的注意事項(xiàng),沒有一種動(dòng)物模型能完全復(fù)制人類疾病，模型實(shí)驗(yàn)結(jié)論的正確性只是相對的，最終必須在人體身上得到驗(yàn)證。盡可能使模型動(dòng)物處于最小的變動(dòng)和最少的干擾之中；動(dòng)物進(jìn)化的高級程度并不意味著所有器官和功能接近于人的程度

43、；不能盲目使用近交系動(dòng)物；查找文獻(xiàn)并咨詢動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所需動(dòng)物和條件是 否可行，了解前人所積累的經(jīng)驗(yàn)，避免低水平的重復(fù)或缺乏科學(xué)依據(jù)的盲動(dòng)所造成人力 物力的浪費(fèi)。,影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的因素,,R=(A+B+C) ×D + ER:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的總反應(yīng)A:動(dòng)物種間的共同反應(yīng)B:動(dòng)物品種，品系特有的反應(yīng)C:動(dòng)物的個(gè)體反應(yīng)D:環(huán)境因素（包括實(shí)驗(yàn)處理）E:實(shí)驗(yàn)誤差A(yù),B,C是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在嚴(yán)格控制環(huán)

44、境因素D或改變其中某一條件后就可能得到一個(gè)理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果R。,動(dòng)物對實(shí)驗(yàn)處理的反應(yīng)可用以下公式表示：,小鼠肝炎病毒感染,裸鼠的肝臟病變,waste syndrome,,出現(xiàn)消耗性疾病，給腫瘤免疫學(xué)研究造成嚴(yán)重干擾,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物方面,仙臺(tái)病毒感染,仙臺(tái)病毒感染肺病變,對麻醉實(shí)驗(yàn)和吸入毒理學(xué)研究等產(chǎn)生嚴(yán)重干擾,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因素方面,最適宜溫度20-24℃，溫差：3或4℃,溫 度,不同種類動(dòng)物“熱平衡”區(qū)的范圍不同。在熱平衡區(qū)，動(dòng)物呈基礎(chǔ)代謝率。

45、如果環(huán)境溫度降至低于熱平衡區(qū)溫度的下限，動(dòng)物的代謝率將呈線性增長。如果環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)溫度的上限，代謝率也將增長，這不是防御機(jī)制，而是由于環(huán)境溫度導(dǎo)致體溫升高，升高的體溫提高了代謝率。因此，環(huán)境溫度高于熱平衡區(qū)比低于它使動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)更強(qiáng)烈。,環(huán)境因素方面,濕度,Ringtail: Low environmental humidity, high temperatu

46、res, and drafts predispose young rats and mice to develop annular constrictions of the tail and occasionally feet or digits. Localized edema can lead to dry gangrene and tissue sloughing.,環(huán)境因素方面,噪聲（Noise）,噪音是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)的常

47、見原因。引起動(dòng)物緊張，導(dǎo)致不安和騷動(dòng)。國家標(biāo)準(zhǔn)≤60 dB超過100dB的噪聲，能夠引起某些品系的小鼠、大鼠和倉鼠發(fā)生抽搐；能夠引起動(dòng)物心跳、呼吸次數(shù)增加，引起大鼠血液甘油三酯水平升高和血壓升高，而血糖降低；,環(huán)境因素方面,一個(gè)籠子中可以放多少只動(dòng)物？ 經(jīng)驗(yàn)告訴我們是每籠2-5只動(dòng)物變異最低，動(dòng)物單籠飼養(yǎng)變異高，當(dāng)每籠動(dòng)物數(shù)量超過5只時(shí)變異同樣迅速攀升。,飼養(yǎng)密度——每籠動(dòng)物數(shù)（Number of animals per

48、cage）,環(huán)境因素方面,,飼養(yǎng)密度,環(huán)境因素方面,飼養(yǎng)密度,身處狹小籠中，實(shí)驗(yàn)小鼠精神失常。 英國和瑞士的研究人員曾安裝一臺(tái)24小時(shí)監(jiān)控的攝像機(jī)，記錄了實(shí)驗(yàn)小鼠的一舉一動(dòng)。老鼠們反復(fù)地做著同一動(dòng)作。其中有些老鼠沿著籠子的不銹鋼毫不費(fèi)力地爬到頂部，前腿掛在天花板上，嘴則咬住籠欄，而后又跳到籠子底部。而另一只老鼠則在不停地翻跟斗，每秒鐘一個(gè)，一口氣能翻40分鐘。它們每一個(gè)動(dòng)作的目的就是為了不停地重復(fù)整套動(dòng)作，而且做得那么認(rèn)真執(zhí)著，與精神

49、病人的表現(xiàn)一模一樣，毫無二致。,環(huán)境因素方面,勢力范圍,Male mice will fight when first co-mingled in a cage, and they need to be observed very closely during this time of establishing a social dominance hierarchy within the group. Weak and non-agg

50、ressive animals might be injured or killed if not removed from the cage.,環(huán)境因素方面,大多數(shù)動(dòng)物已經(jīng)形成了對人類的不信任，傾向于逃離人類。經(jīng)過小心的捉拿操作和逐漸的適應(yīng)，動(dòng)物能夠在某種程度上學(xué)會(huì)調(diào)整其逃走的本能。粗暴的捉拿操作和新的員工可再激活動(dòng)物逃跑的本能，并可能影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,環(huán)境因素方面,,,,,Factors influence animal exper

51、iment,?? sensitivity and reproducibility,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù),,主要內(nèi)容,抓取與固定編號方法給藥方法采血方法麻醉方法處死方法職業(yè)安全無害化處理,Animal Restraint,Mouse-Avoid grasping and pulling the tip of the tail,Rat,Tail should be lifted only at the base and for s

52、hort period,tail skin may tear,Restrainer of Mice and Rat,Guinea pig,Hold with two hands,Rabbit,Use two hands for lifting and should not be restrained by the ears,Restrainer of Rabbit,,Dog,,性別鑒定,Fur coloring-picric acid,

53、染色法：一般適用于短期實(shí)驗(yàn)，大小鼠常用。原則：動(dòng)物背部朝上 頭頂 1、右前肢2、 右側(cè)腰部3、右后肢4 、 尾跟部5、左后肢6、 左側(cè)腰部7、左前肢8、 背部9、不標(biāo)號0或10 后面的數(shù)字永遠(yuǎn)大于前 面的數(shù)字，如12、23、56、 89、123、345等等；而 沒有11、21、43、65等等。,Ear punching,,金屬耳號,玻璃管

54、動(dòng)物標(biāo)記(微芯片microchip)）,1、可以標(biāo)記的動(dòng)物種類多2、體內(nèi)標(biāo)簽，不易破壞3、使用壽命長，達(dá)到20年,可循環(huán)使用4、準(zhǔn)確率高，讀錯(cuò)率為10萬分之一5、可以準(zhǔn)確標(biāo)記每一個(gè)動(dòng)物,動(dòng)物標(biāo)簽編碼規(guī)則,3位國家代碼+3位地區(qū)代碼 +12位動(dòng)物標(biāo)簽編碼如： 國碼：720 區(qū)域：899 序號：075733300002,玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽,玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽注射器,􀂄注射（植入）標(biāo)簽前一定要保

55、證消毒到位，以避免不必要的感染,玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽閱讀器,注射（植入）標(biāo)簽時(shí)應(yīng)15-45度角注射，方便閱讀器以之發(fā)生電磁感應(yīng)，敏捷地讀出數(shù)據(jù)。玻璃管動(dòng)物標(biāo)簽閱讀器的最佳閱讀距離為7-12CM，不要太近或太遠(yuǎn),紋身,皮下注射,腹腔注射,肌肉注射,Vein Injection of Mouse,,Vein Injection of Rabbit,,Vein Injection of Dog,Gavaging Method of Mouse,

56、,Gavaging Method of Rabbit,Injection volume in milliliters,Animal SC IM IV IP Rat 5-8 0.3 0.5 5-10Mouse 2-3 0.2 0.05

57、 2-3Hamster 3-4 0.1 0.3 3-4G. P. 5-10 0.5 0.5 5-8Rabbit 30-50 0.5-1 1-5 50-100,,,,人與動(dòng)物的給藥量換算方法,人與動(dòng)物對同一藥物的耐受性相差很大。一般情況下，動(dòng)物的耐受性比人大，也就是

58、單位體重動(dòng)物的用藥量比人要大。一般可按下列比例換算：人用藥量為1；小鼠、大鼠為25-50；豚鼠、家兔為15-20；犬、貓為5-10。,Bleeding,Requiring anesthesiaCardiac punctureJugular veinPosterior vena cavaLateral saphenous vein (GP),Not requiring anesthesiaOphthalmic venous p

59、lexusTail veinEar veinCephalic vein (rabbit, dogs, cat)Lateral saphenous veinToe & tail cliping,Bleeding (cont.),Maximum amount of blood that can be safely removed for blood collection = 1% of body we

60、ight.Total blood volume is approximately 6% of body weighte.g.5 kg rabbit X 1% = 50 ml bloodAnimal produce 0.75-1.0 ml/kg/day of blood5 kg rabbit, 1ml/kg = X ml/5kg, X = 5 ml/dayIt will takes 10 days for the animals

61、 to replace the 50 ml that were with drawn,Ophthalmic venous plexus,Cardiac puncture,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采尿方法,代謝籠法：能將尿液和糞便分開而達(dá)到收集動(dòng)物尿液目的的特殊裝置。適用于大、小鼠。導(dǎo)尿法：適用于雄性兔、犬等。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉(Anaesthesia),動(dòng)物麻醉目的：消除動(dòng)物手術(shù)疼痛，便于實(shí)驗(yàn)操作，保證動(dòng)物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。麻醉的意義：

62、第一是善待動(dòng)物，第二是提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的 效率。,,,,全身麻醉：,,局部麻醉：（普魯卡因、利多卡因等）,,揮發(fā)性麻醉劑：吸入給藥——乙醚、氯仿等非揮發(fā)性麻醉劑：靜脈、皮下、肌肉、腹腔給藥——氯胺酮、戊巴比妥鈉等,Anaesthesia Apparatus,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的安樂死(euthanasia),指以人道的方法處死動(dòng)物的過程。處死過程中盡量減少其驚恐和焦慮，使其安靜地?zé)o痛苦的死亡。 安樂死

63、必須符合的標(biāo)準(zhǔn)： 1.死亡時(shí)盡可能減少驚恐、疼痛。 2.使其在最短時(shí)間內(nèi)失去意識迅速死亡。 3.方法可靠且可重復(fù)。 4.對操作人員安全。 5.采用的方法要與研究的要求和目的一致。 6.對觀察者和操作者的情緒影響最小。 7.對環(huán)境污染的影響最小。 8.需要的機(jī)械設(shè)備 簡單，價(jià)廉，易操作。 9.處死動(dòng)物的地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離并與動(dòng)物房分開。,E

64、uthanasia (cont.)-Rodents,AcceptableInhalant anesthetic overdoseCOCO2Barbiturate overdoseMicrowave irraditation,Conditionally acceptableN2 (sedated or anesthetized) ArgonCervical dislocation (BW<200g)Decapit

65、ation,Euthanasia (cont.)-Unacceptable,Humane concernsDecompressionDrowningStrychnineFor use in conscious animalsExsanguinationRapid freezingAir embolism,Sole methodNicotineMagnesium sulfatePotassium chlorideAl

66、l curariform agentsStunningHazardous to humansChloroformCyanide,常用脊椎動(dòng)物安樂死方法,,說明：O:建議使用方法；N:不得使用方法；M:一般情況不推薦使用，除非實(shí)驗(yàn)需要。,Occupational Health and Safety Program for Personnel with Laboratory Animal Contact,Risk Assessmen

67、t:AllergiesBites and ScratchesSharps injuries (punctures, cuts, etc.)Chemical ExposureZoonotic Disease,Respiratory Protection,SHARPS,If needles are used, needles are not to be purposely bent or broken by hand, remov

68、ed from disposable syringes or otherwise manipulated by hand.Needles should not be recapped unless absolutely necessary. If needles must be recapped, a single-handed technique should be used.,SHARPS,For sharps that pos