我國動物性食品安全管理汪霞

1、《中國獸藥典》二〇一五年版（一部） 解讀汪 霞wangxia@ivdc.org.cn,主 要 內(nèi) 容　 一、凡例 二、紫外--可見分光光度法 三、高效液相色譜法（氣相色譜法） 四、獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則 五、分析方法驗證轉(zhuǎn)移確認,凡 例 （總則）,一、《中華人民共和國獸藥典》簡稱《中國獸藥典》，依據(jù)《獸藥管理條例》組織制定和頒布實施，是國家監(jiān)督管理獸藥質(zhì)量的法定技術(shù)標準。《

2、中國獸藥典》一經(jīng)頒布實施，其同品種的上版標準或其原國家標準即同時停止使用。 除特別注明版次外，《中國獸藥典》均指現(xiàn)行版《中國獸藥典》。通用的、效期內(nèi)最低標準,凡 例 （總則）,二、獸藥典收載的凡例、附錄對獸藥典以外的其他獸用化學(xué)、抗生素、生化藥品等國家標準具同等效力。 其他國家標準：《獸藥國家標準 化學(xué)藥品、中藥卷》第一冊、《獸藥國家標準匯編》（獸藥地方標準上升國家標準 第一、二、三冊）、《進口獸藥質(zhì)量標準》

3、、農(nóng)業(yè)部公告（未成冊）等未收載在本版獸藥典中的標準。,凡 例 （總則）,,凡 例 （總則）,三、凡例是為正確使用《中國獸藥典》進行獸藥質(zhì)量檢定的基本原則，是對《中國獸藥典》正文、附錄及與獸藥質(zhì)量檢定有關(guān)的共性問題的統(tǒng)一規(guī)定。 凡例是解釋和正確使用《中國獸藥典》進行質(zhì)量檢定的基本原則，并把正文品種、附錄及質(zhì)量檢定有關(guān)的共性問題加以規(guī)定，避免在全書中重復(fù)說明。凡例中的有關(guān)規(guī)定具有法定的約束力。,凡 例 （總則）,四、凡例

4、和附錄中采用“除另有規(guī)定外”這一用語，表示存在與凡例或附錄有關(guān)規(guī)定不一致的情況時，則在正文中另作規(guī)定，并按此規(guī)定執(zhí)行。,凡 例 （總則）,六、正文所設(shè)各項規(guī)定是針對符合《獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的產(chǎn)品而言。 任何違反獸藥GMP或有未經(jīng)批準添加物質(zhì)所生產(chǎn)的獸藥，即使符合《中國獸藥典》或按照《中國獸藥典》暫不能將其添加物或相關(guān)雜質(zhì)定性為何物質(zhì)，亦不能認為其符合規(guī)定。,正文： 質(zhì)量標準是按照批準的處方來源、生產(chǎn)工藝、貯藏運輸

5、條件所制定的、用以檢測獸藥質(zhì)量。,制法：所有獸藥的生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)驗證，并經(jīng)國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門批準，生產(chǎn)過程均應(yīng)符合《獸藥GMP》的要求。,檢查：各雜質(zhì)檢查項目系指該獸藥在按既定工藝進行生產(chǎn)和正常貯藏過程中可能含有或產(chǎn)生并需要控制的雜質(zhì)，如殘留溶劑、有關(guān)物質(zhì)等，如果改變生產(chǎn)工藝時需增修訂有關(guān)項目。,凡 例（正文）,八、《中國獸藥典》各品種項下收載的內(nèi)容為標準正文。正文系根據(jù)藥物自身的理化與生物學(xué)特性，按照批準的處方來源、生產(chǎn)工藝、貯藏

6、運輸條件等所制定的、用以檢測獸藥質(zhì)量是否達到用藥要求并衡量其質(zhì)量是否穩(wěn)定均一的技術(shù)規(guī)定。,凡 例（正文）,申請文號 仿產(chǎn)品 不是仿標準,凡 例（正文）,九、正文內(nèi)容根據(jù)品種和劑型的不同，按順序可分別列有：（1）品名（包括中文名、漢語拼音與英文名）；（2）有機藥物的結(jié)構(gòu)式；（3）分子式與分子量；（4）來源或有機藥物的化學(xué)名稱；（

7、5）含量或效價規(guī)定；（6）處方； （7）制法；（8）性狀；（9）鑒別；（10）檢查；（11）含量測定；（12）類別；（13）作用與用途；（14）用法與用量；（15）注意事項；（16）不良反應(yīng)；（17）休藥期； （18）規(guī)格；（19）貯藏；（20）制劑等。,凡 例（附錄）,十、附錄主要收載制劑通則、通用檢測方法和指導(dǎo)原則。制劑通則系按照獸藥劑型分類，針對劑型特點所規(guī)定的基本技術(shù)要求；通用檢測方法系各正文品種進行相同檢查項目的

8、檢測時所應(yīng)采用的統(tǒng)一的設(shè)備、程序、方法及限度等；指導(dǎo)原則系為執(zhí)行獸藥典、考察獸藥質(zhì)量、起草與復(fù)核獸藥標準等所制定的指導(dǎo)性規(guī)定。,凡 例（附錄）,十四、制法項下主要記載獸藥的重要工藝要求和質(zhì)量管理要求。 （1）所有獸藥的生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)驗證，并經(jīng)國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門批準，生產(chǎn)過程均應(yīng)符合《獸藥GMP》的要求。 （2）來源于動物組織提取的獸藥，其所用動物種屬要明確，所用臟器均應(yīng)來自經(jīng)檢疫的健康動物，涉及牛源的應(yīng)取自無

9、牛海綿狀腦病地區(qū)的健康牛群；來源于人尿提取的獸藥，均應(yīng)取自健康人群。上述獸藥均應(yīng)有明確的病毒滅活工藝要求以及質(zhì)量管理要求。 （3）直接用于生產(chǎn)的菌種、毒種、來自人和動物的細胞、DNA重組工程菌及工程細胞，來源途徑應(yīng)經(jīng)國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門批準并應(yīng)符合國家有關(guān)的管理規(guī)范。,凡 例（項目與要求）,十五、性狀項下記載獸藥的外觀、臭、溶解度以及物理常數(shù)等。 （1）外觀性狀是對獸藥的色澤和外表感觀的規(guī)定。,凡 例（項目與

10、要求）,十五、（2）溶解度是獸藥的一種物理性質(zhì)。對在特定溶劑中的溶解性能需做質(zhì)量控制時，在該品種項下另作具體規(guī)定。 試驗法：除另有規(guī)定外，稱取研成細粉的供試品或量取液體供試品，置25℃±2℃一定容量的溶劑中，每隔5分鐘強力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆粒或液滴時，即視為完全溶解。,凡 例（項目與要求）,十六、鑒別項下規(guī)定的試驗方法，系根據(jù)反映該獸藥某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等特性

11、所進行的獸藥鑒別試驗，不完全代表對該獸藥化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。,凡 例（項目與要求）,?凡 例（項目與要求）,采用色譜法檢測有關(guān)物質(zhì)時，雜質(zhì)峰（或斑點）不包括溶劑、輔料或原料藥的非活性部分等產(chǎn)生的色譜峰（或斑點）。必要時，可采用適宜的方法對上述非雜質(zhì)峰（或斑點）進行確認。 處方中含有抑菌劑的注射劑和眼用制劑，應(yīng)建立適宜的檢測方法對抑菌劑的含量進行控制。正文已明確列有抑菌劑檢查的品種必須依法對產(chǎn)品中使用的抑菌劑進行該項檢查，并

12、應(yīng)符合相應(yīng)的限度規(guī)定。,?凡 例（項目與要求）,各類制劑，除另有規(guī)定外，均應(yīng)符合各制劑通則項下有關(guān)的各項規(guī)定。 例子：【檢查】 其他 應(yīng)按照各制劑通則項下規(guī)定的檢驗項目進行檢查。 各制劑通則項下帶【 】的要 做，不帶的不做。如軟膏劑含量均勻度。,凡 例（項目與要求）,十八、含量測定項下規(guī)定的試驗方法，用于測定原料藥及制劑中有效成分的含量，一般可采用化學(xué)、儀器或生物測定方法。 原料藥

13、：純度達到98.5%以上時，首選容量法； 非水法測定鹽酸鹽含量時革除醋酸汞的使用，采取電位滴定或是篩選合適的溶媒確保終點突躍指示劑變色明顯 UV吸收系數(shù)小于100的、多組分物質(zhì)不宜采用紫外分光光度法，多考慮HPLC 制劑：容量法、永停滴定法、紫外分光光度法等專屬性不強的方法或測定復(fù)方制劑含量時，多考慮HPLC法；一般采用外標法，前處理繁雜的，采用內(nèi)標法。,凡 例（項目與要求）,十九、類別

14、、作用與用途，系指獸藥的主要作用與用途或?qū)W科的歸屬劃分，不排除在臨床實踐的基礎(chǔ)上作其他類別藥物使用。 二十、用法與用量，系指常用的給藥方法和除另有規(guī)定外成年畜禽的常用劑量。,凡 例（項目與要求）,二十一、制劑的規(guī)格，系指每一支、片或其他每一個單位制劑中含有主藥的重量（或效價）或含量（％）或裝量。注射液項下，如為“1ml?10mg”，系指1ml中含有主藥10mg；對于列有處方或標有濃度的制劑，也可同時規(guī)定裝量規(guī)格。,凡

15、 例（項目與要求）,二十二、貯藏項下的規(guī)定，系為避免污染和降解而對獸藥貯存與保管的基本要求，以下列名詞術(shù)語表示： 遮光 系指用不透光的容器包裝，例如棕色容器或黑紙包裹的無色透明、半透明容器； 避光 系指避免日光直射； 密閉 系指將容器密閉，以防止塵土及異物進入； 密封 系指將容器密封以防止風(fēng)化、吸潮、揮發(fā)或異物進入； 熔封或嚴封 系指將容器熔封或

16、用適宜的材料嚴封，以防止空氣與水分的侵入并防止污染；,凡 例（項目與要求）,陰涼處 系指不超過20℃； 涼暗處 系指避光并不超過20℃； 冷處 系指2～10℃； 常溫 系指10～30℃。 除另有規(guī)定外，貯藏項下未規(guī)定溫度的一般系指常溫。,凡 例（項目與要求）,二十三、制劑中使用的原料藥和輔料，均應(yīng)符合本版獸藥典的規(guī)定；本版獸藥典未收載者，必須制定符合獸藥

17、用要求的標準，并需經(jīng)國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門批準。 本版獸藥典收載的藥用輔料標準是對在品種【類別】項下規(guī)定相應(yīng)用途輔料的基本要求。 制劑生產(chǎn)企業(yè)使用的藥用輔料即使符合本版獸藥典藥用輔料標準，也應(yīng)進行藥用輔料標準的適用性驗證。 藥用輔料標準適用性驗證應(yīng)充分考慮藥用輔料的來源、工藝，以及制備制劑的特點、給藥途徑、使用對象以及使用劑量等相關(guān)因素的影響。,凡 例（項目與要求）,在采用本版獸藥典或《中

18、國藥典》收載的藥用輔料時，還應(yīng)考慮制備制劑的給藥途徑、制劑用途、配方組成、使用劑量等其他因素對其安全性的影響。根據(jù)制劑的安全風(fēng)險的程度，選擇相應(yīng)等級的藥用輔料。特別是對注射劑、眼用制劑等高風(fēng)險制劑，在適用性、安全性、穩(wěn)定性等符合要求的前提下應(yīng)盡可能選擇供注射用級別的藥用輔料。 采用本版獸藥典或《中國藥典》收載的藥用輔料對制劑的適用性及安全性等可能產(chǎn)生影響時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)根據(jù)制劑的特點，采用符合要求的藥用輔料，并建立相應(yīng)的藥用

19、輔料標準（更高要求或增加項目）。,凡 例（檢驗方法和限度）,,凡 例（檢驗方法和限度）,,凡 例（檢驗方法和限度）,,凡 例（檢驗方法和限度）,二十四、采用本版獸藥典規(guī)定的方法進行檢驗時應(yīng)對方法的適用性進行確認。 二十五、本版獸藥典正文收載的所有品種，均應(yīng)按規(guī)定的方法進行檢驗。如采用其他方法，應(yīng)將該方法與規(guī)定的方法做比較試驗，根據(jù)試驗結(jié)果掌握使用，但在仲裁時仍以本版獸藥典規(guī)定的方法為準。,凡 例（檢驗方法和限度

20、）,二十六、本版獸藥典中規(guī)定的各種純度和限度數(shù)值以及制劑的重（裝）量差異，系包括上限和下限兩個數(shù)值本身及中間數(shù)值。規(guī)定的這些數(shù)值不論是百分數(shù)還是絕對數(shù)字，其最后一位數(shù)字都是有效位。 試驗結(jié)果在運算過程中，可比規(guī)定的有效數(shù)字多保留一位數(shù)，而后根據(jù)有效數(shù)字修約規(guī)則進舍至規(guī)定有效位。計算所得的最后數(shù)值或測定讀數(shù)值均可按修約規(guī)則進舍至規(guī)定的有效位，取此數(shù)值與標準中規(guī)定的限度數(shù)值比較，以判斷是否符合規(guī)定的限度。,凡 例（檢驗方法和

21、限度）,修約口訣：四舍六入五考慮，五后非零則進一，五后全零看五前，五前偶舍奇進一，不論數(shù)字多少位，都要一次修約成。 例：將12.1498修約到一位小數(shù)，12.1 將12.1498修約到兩位有效位數(shù)，12 將1.050修約到一位小數(shù)，1.0 將0.350修約到一位小數(shù)，0.4 將0.0325修約到兩位有效位數(shù)，0.032

22、 將15.4546修約為兩位有效位數(shù)，15,凡 例（檢驗方法和限度）,二十七、原料藥的含量（％），除另有注明者外，均按重量計。如規(guī)定上限為100％以上時，系指用本獸藥典規(guī)定的分析方法測定時可能達到的數(shù)值，它為獸藥典規(guī)定的限度或允許偏差，并非真實含有量；如未規(guī)定上限時，系指不超過101.0％。 例：雙羥萘酸噻嘧啶項下，按干燥品計算，含C11H14N2S?C23H16O6應(yīng)為97.0%~103%。,凡

23、例（檢驗方法和限度）,二十七、制劑的含量限度范圍，系根據(jù)主藥含量的多少、測定方法誤差、生產(chǎn)過程不可避免的偏差和貯存期間可能產(chǎn)生降解的可接受程度而制定的，生產(chǎn)中應(yīng)按標示量100%投料。 高投料時要有理由并驗證。,凡 例（標準品、對照品）,二十八、標準品系指用于生物檢定或效價測定的標準物質(zhì)，其特性量值一般按效價單位（或µg）計；對照品系指采用理化方法進行鑒別、檢查或含量測定時所用的標準物質(zhì)，其特性量值一般按純度（

24、%）計。 標準品與對照品的建立或變更批號，應(yīng)與國際標準品或原批號標準品或?qū)φ掌愤M行對比，并經(jīng)過協(xié)作標定。然后按照國家獸藥標準物質(zhì)相應(yīng)的工作程序進行技術(shù)審定，確認其質(zhì)量能夠滿足既定用途后方可使用。標準品與對照品均應(yīng)按其標簽或使用說明書所示的內(nèi)容使用或貯藏。,凡 例（計量）,二十九、試驗用的計量儀器均應(yīng)符合國務(wù)院質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督部門的規(guī)定。 三十、（2）本版獸藥典使用的滴定液和試液，其濃度要求精密標定的滴定液用

25、“XXX滴定液（YYYmol/L）”表示；作其他用途不需精密標定其濃度時，用“YYYmol/L XXX溶液”表示，以示區(qū)別。,凡 例（計量）,三十、（3） 水浴溫度 除另有規(guī)定外，均指98～100℃； 熱水 系指70～80℃； 微溫或溫水 系指40～50℃； 室溫（常溫） 系指1

26、0～30℃； 冷水 系指2～10℃； 冰浴 系指約0℃； 放冷 系指放冷至室溫。,凡 例（計量）,（7）液體的滴，系在20℃時，以1.0ml水為20滴進行換算。（8）溶液后標示的“（1→10）”等符號，系指固體溶質(zhì)1.0g或液體溶質(zhì)1.0ml加溶劑使成10ml的

27、溶液；未指明用何種溶劑時，均系指水溶液；兩種或兩種以上液體的混合物，名稱間用半字線“-”隔開，其后括號內(nèi)所示的“:”符號，系指各液體混合時的體積（重量）比例。 例：鹽酸溶液（9→1000）； 冰醋酸-水-二乙胺（5:5:2）（10）乙醇未指明濃度時，均系指95％（ml/ml）的乙醇。,凡 例（計量）,（9）本版獸藥典所用藥篩，選用國家標準的R40/3系列，分等如下：

28、 篩號 篩孔內(nèi)徑（平均值） 目號 一號篩 2000µm±70µm 10目 二號篩 850µm±29µm 24目 三號篩 355µm±13µm

29、 50目 四號篩 250µm±9.9µm 65目 五號篩 180µm±7.6µm 80目 六號篩 150µm±6.6µm 100目

30、 七號篩 125µm±5.8µm 120目 八號篩 90µm±4.6µm 150目 九號篩 75µm±4.1µm 200目,凡 例（精確度）,三十二、（1）“精密

31、稱定”系指稱取重量應(yīng)準確至所取重量的千分之一；“稱定”系指稱取重量應(yīng)準確至所取重量的百分之一；“精密量取”系指量取體積的準確度應(yīng)符合國家標準中對該體積移液管的精密度要求；“量取”系指可用量筒或按照量取體積的有效數(shù)位選用量具。取用量為“約”若干時，系指取用量不得超過規(guī)定量的±10％。 例：取5ml 用量筒 取5.0ml 用刻度吸管 取5.00ml

32、或精密量取5ml 用移液管,凡 例（精確度）,三十二、（1）稱取“0.1g”，系指稱取重量可為0.06～0.14g；稱取“2g”，系指稱取重量可為1.5～2.5g；稱取“2.0g”，系指稱取重量可為1.95～2.05g；稱取“2.00g”，系指稱取重量可為1.995～2.005g。,凡 例（精確度）,三十二、（2）恒重，除另有規(guī)定外，系指供試品連續(xù)兩次干燥或熾灼后稱重的差異在0.3mg以下的重量；干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均

33、應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1小時后進行；熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在繼續(xù)熾灼30分鐘后進行。 注意：采用烘箱或恒溫減壓干燥箱干燥時，應(yīng)待溫度升至規(guī)定值并達到平衡后，再放入供試品。 減壓干燥時，稱量瓶蓋勿放入減壓干燥器中，且開啟前應(yīng)緩緩旋開進氣閥，以免氣流吹散供試品。,凡 例（精確度）,三十二、（3）試驗中規(guī)定“按干燥品（或無水物，或無溶劑）計算”時，除另有規(guī)定外，應(yīng)取未經(jīng)干燥（或未去水、或未去溶劑）的供試品進

34、行試驗，并將計算中的取用量按檢查項下測得的干燥失重（或水分、或溶劑）扣除。,凡 例（精確度）,三十二、（4）試驗中的“空白試驗”，系指在不加供試品或以等量溶劑替代供試液的情況下，按同法操作所得的結(jié)果；含量測定中的“并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正”，系指按供試品所耗滴定液的量（ml）與空白試驗中所耗滴定液的量（ml）之差進行計算。,凡 例（精確度）,三十二、（5）試驗時的溫度，未注明者，系指在室溫下進行；溫度高低對試驗結(jié)果有顯著影響者，

35、除另有規(guī)定外，應(yīng)以25℃±2℃為準。 例：為防止HNO2的分解與逸失，用亞硝酸鈉滴定液進行永停滴定時，須在30℃以下進行。,凡 例（試藥、試液、指示劑）,三十三、試驗用的試藥，除另有規(guī)定外，均應(yīng)根據(jù)附錄試藥項下的規(guī)定，選用不同等級并符合國家標準或國務(wù)院有關(guān)行政主管部門規(guī)定的試劑標準。試液、緩沖液、指示劑與指示液、滴定液等，均應(yīng)符合附錄的規(guī)定或按照附錄的規(guī)定制備。,凡 例（試藥、試液、指示劑）,三十四、試驗用

36、水，除另有規(guī)定外，均系指純化水。酸堿度檢查所用的水，均系指新沸并放冷至室溫的水。 三十五、酸堿性試驗時，如未指明用何種指示劑，均系指石蕊試紙。,凡 例（說明書、包裝、標簽）,三十七、獸藥說明書應(yīng)符合《獸藥管理條例》及國務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門對說明書的規(guī)定。 三十八、直接接觸獸藥的包裝材料應(yīng)符合國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門的有關(guān)規(guī)定，均應(yīng)無毒、潔凈，與內(nèi)容獸藥應(yīng)不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，并不的影響內(nèi)容獸藥的質(zhì)量。

37、 ……,紫外--可見分光光度法,在190~800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度。 用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定 對溶劑的要求 含有雜原子的有機溶劑末端吸收干擾測定，注意溶劑的使用范圍均不能小于截止使用波長。 水、乙腈 200nm 甲醇、乙醇 205nm 三氯甲烷 245nm,紫外--可見分光光度

38、法,溶劑檢查：以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)），將溶劑置1cm石英吸收池中測定其吸光度。,紫外--可見分光光度法,測定法 空白：一般為配制供試品溶液的同批溶劑；用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理，制得。 比色池：1cm石英吸收池。 吸光度讀數(shù)：一般為0.3～0.7。 狹縫波帶寬度：應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光

39、度不再增大為準。,紫外--可見分光光度法,測定波長： 在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確。除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長作為測定波長。,紫外--可見分光光度法,1、鑒別和檢查 分別按各品種項下規(guī)定的方法進行。 2、含量測定 一般有以下幾種

40、。 （1）對照品比較法 （2）吸收系數(shù)法：吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100，并注意儀器的校正和檢定。 （3）計算分光光度法 （4）比色法,高效液相色譜法,色譜柱：反相、正相、離子交換、手性分離等。品種正文中未指明色譜柱溫度時系指室溫。 注意： 如使用緩沖液或含鹽溶液作為流動相，在試驗結(jié)束后，應(yīng)先用不含鹽的流動相沖洗，使色譜柱內(nèi)的鹽完全溶解洗脫出來，再用較高濃度的甲

41、醇/乙腈-水溶液沖洗。 長期保存時，反相柱可貯存于甲醇或乙腈中，正相柱可貯存于經(jīng)脫水處理的正己烷中，離子交換柱可貯存于含5%甲醇或含0.05%疊氮化鈉的水中。,高效液相色譜法,檢測器,高效液相色譜法,流動相： 用高純度的試劑配制流動相；水應(yīng)為新鮮制備的高純水。pH值應(yīng)用pH計進行調(diào)節(jié)，偏差不超過±0.2pH值單位。用0.45µm或0.22µm濾膜過濾，用前脫氣處理。

42、 應(yīng)貯存于玻璃、聚四氟乙烯等容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。緩沖鹽溶液應(yīng)盡量新鮮配制使用。,高效液相色譜法,色譜條件： 不可改變：填充劑種類、流動相組分、檢測器類型； 可適當改變：色譜柱內(nèi)徑與長度、填充劑粒徑、流動相流速、流動相組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等。,高效液相色譜法,調(diào)整流動相組分比例時， 當小比例組分的百分比例X小于等于33％時，允許改變范圍為0.7X～1.3X；當X大于33％時，允

43、許改變范圍為X-10％～X+10％。使用二極管陣列檢測器檢查峰純度。 例1 兩組分50:50，調(diào)節(jié)范圍為40:60~60:40. 例2 兩組分2:98，調(diào)節(jié)范圍為1.4:98.6~2.6:97.4. 例3 三組分60:35:5，對于35%的組分，調(diào)節(jié)范圍為50:45:5~70:25:5；對于5%的組分，調(diào)節(jié)范圍為58.5:35:6.5~61.5:35:3.5.,高效液相色譜法,系統(tǒng)適用性試驗

44、 理論板數(shù)：應(yīng)指明測定物質(zhì)，一般為待測物質(zhì)或內(nèi)標物質(zhì)的理論板數(shù)。 分離度：除另有規(guī)定外，待測物質(zhì)色譜峰與相鄰色譜峰之間的分離度應(yīng)大于1.5。 靈敏度：通常以信噪比(S/N)來表示。系統(tǒng)適用性試驗中可以設(shè)置靈敏度實驗溶液來評價色譜系統(tǒng)的檢測能力。有關(guān)物質(zhì)檢查時尤為重要。,高效液相色譜法,拖尾因子：以峰高作定量參數(shù)時，除另有規(guī)定外，T值應(yīng)在0.95～1.05之間；以峰面積作定量參數(shù)時，嚴重拖尾會對積分造

45、成影響，此時應(yīng)在品種正文項下對拖尾因子作出規(guī)定。 重復(fù)性：采用外標法時，通常取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積的RSD應(yīng)不大于2.0%。采用內(nèi)標法時，通常配制相當于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別至少進樣2次，計算平均校正因子,其RSD應(yīng)不大于2.0%。,高效液相色譜法,測定法 內(nèi)標法：可避免樣品前處理及進樣體積誤差對測定結(jié)果的

46、影響。 外標法 加校正因子的主成分自身對照法（雜質(zhì)檢查） 不加校正因子的主成分自身對照法（雜質(zhì)檢查） 面積歸一化法：用于雜質(zhì)檢查時，由于儀器響應(yīng)的線性限制，峰面積歸一化法一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。,高效液相色譜法,超高效液相色譜儀是適應(yīng)小粒徑(約2μm)填充劑的耐超高壓、小進樣量、低死體積、高靈敏度檢測的高效液相色譜儀。 相比于HPLC，UPLC的運行時間更短、分離度更好、靈敏度更高、溶劑

47、用量更少。 若需使用小粒徑(約2μm)填充劑，輸液泵的性能，進樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也應(yīng)作適當?shù)恼{(diào)整。當對其測定結(jié)果產(chǎn)生爭議時，應(yīng)以品種項下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準。,高效液相色譜法,方法轉(zhuǎn)換驗證：重點考慮靈敏度、分離度符合性轉(zhuǎn)換前提：色譜柱柱效一致，首選同品牌、同填料但粒徑小的柱。轉(zhuǎn)換需調(diào)整的參數(shù)：流速、進樣量、梯度洗脫程序。,高效液相色譜法,方法轉(zhuǎn)換提示1：原方法

48、中系統(tǒng)適用性試驗*含分離度、靈敏度，比對轉(zhuǎn)換前后方法測試結(jié)果，出峰順序和個數(shù)均一致，系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果符合要求，定性和定量無需驗證。*不含靈敏度，定性、定量、溶出度、含量均勻度測定無需驗證；有關(guān)物質(zhì)需驗證靈敏度，達到對照（品）溶液二十分之一即可。,高效液相色譜法,方法轉(zhuǎn)換提示2：原方法中沒有系統(tǒng)適用性試驗要求，溶出度、含量均勻度無需驗證；定性要求峰純度、分離度滿意即可；有關(guān)物質(zhì)要求峰純度、分離度滿意，且靈敏度符合要求；定量（包括中藥制

49、劑）要求峰純度、分離度滿意即可；無法進行分離度比較，可進行2～3種條件強制破壞試驗后進行測定，比較兩者圖譜，雜質(zhì)個數(shù)和相對峰面積輸出應(yīng)基本一致。,氣相色譜法,載氣源：氦氣、氮氣、氫氣。 注：新方法中應(yīng)注明載氣流速。進樣部分：溶液直接進樣、自動進樣、頂空進樣。 注：頂空進樣方法中，應(yīng)注明平衡溫度、平衡時間、傳輸線溫度、定量環(huán)溫度等。色譜柱：填充柱、毛細管柱。柱溫箱：柱溫 檢測器：FID、E

50、CD，等。 溫度設(shè)置：柱、進樣口（高于柱溫30~50℃）、檢測器（FID比柱溫高，不低于150 ℃ ，通常為250~350 ℃ ）,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,需驗證的情況：建立獸藥質(zhì)量標準、獸藥生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂。 驗證項目：鑒別試驗，限量或定量檢查，原料藥或制劑中有效成分含量測定，制劑中其他成分（如防腐劑等）測定，獸藥溶出度、釋放度中溶出量的測定。 驗證

51、指標：準確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。 在分析方法驗證中，須采用標準物質(zhì)進行試驗。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,① 已有重現(xiàn)性驗證，不需要驗證中間精密度。 ② 如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補充。 ③ 視具體情況予以驗證。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,準確度：方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（％）表示

52、。 1、化學(xué)藥含量測定 原料藥：①對照品 ②與另一方法比較。 制劑： ①處方量空白輔料中添加對照品； ②制劑中添加對照品 ③與另一方法比較 準確度也可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,2、化學(xué)藥雜質(zhì)定量

53、測定 ① 原料藥中添加已知雜質(zhì)； ② 制劑處方量空白輔料中添加已知雜質(zhì)； ③ 與另一方法比較； ④ 不加校正因子的主成分自身對照法計算。 3、中藥化學(xué)成分測定 用對照品進行加樣回收率測定，即向已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的被測成分對照品，依法測定。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,4、校正因子的準確度 絕對（或定量）校正因子是指單位面積的色譜峰代表

54、的待測物質(zhì)的量。待測物質(zhì)與所選定的參照物質(zhì)的絕對校正因子之比，即為相對校正因子。 相對校正因子可采用替代物（對照品）和被替代物（待測物）標準曲線斜率比值進行比較獲得；采用紫外吸收檢測器時，可將替代物（對照品）和被替代物（待測物）在規(guī)定波長和溶劑條件下的吸收系數(shù)比值進行比較，計算獲得。 GC和HPLC的相對重量校正因子，正文項下描述為待測物峰面積與相對校正因子的乘積進行結(jié)果計算。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,5、數(shù)據(jù)

55、要求 ①同一濃度（相當于100%濃度水平），至少測定6份。 ②3種不同濃度（化學(xué)藥1.2﹕1、1﹕1、0.8﹕1左右；中藥1.5﹕1、1﹕1、0.5﹕1左右），每種3份測定。 應(yīng)報告測定方法、測定結(jié)果和RSD%或置信區(qū)間。樣品中待測成分含量和回收率限度關(guān)系可參考表2。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,表2 樣品中待測成分含量和回收率限度,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,精密度：在規(guī)定

56、的測試條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。 重復(fù)性：同實驗室、同時間、同人員。 中間精密度：同實驗室、不同時間、不同人員。 重現(xiàn)性：不同實驗室、不同人員。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,精密度的數(shù)據(jù)要求 表3 樣品中待測成分含量和精密度RSD可接受范圍,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,專屬性：在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）存在下，采用的分析方法

57、能正確測定被測物的能力。 如方法專屬性不強，應(yīng)采用多種不同原理的方法予以補充。 1、鑒別反應(yīng) 應(yīng)呈陰性反應(yīng),獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,2、含量測定和雜質(zhì)測定 雜質(zhì)可得：向試樣中加入雜質(zhì)或輔料，考察分離度或測定結(jié)果。 雜質(zhì)不可得：①與另一得到驗證方法比較； ②加速破壞試驗。 比較測定結(jié)果或雜質(zhì)個數(shù)。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則

58、,檢測限：試樣中被測物能被檢測出的最低量。 檢測限作為限度試驗指標和定性鑒別的依據(jù)，沒有定量意義。 1、直觀法 2、信噪比法 3:1或2:1 3、基于響應(yīng)值標準偏差和標準曲線斜率法 按照LOD=3.3δ/S公式計算，式中LOD：檢測限；δ響應(yīng)值的偏差；S：標準曲線的斜率。 4、數(shù)據(jù)要求 上述計算方法獲得的檢測限數(shù)據(jù)須用含量相近

59、的樣品進行驗證。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,定量限：被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)符合準確度和精密度要求。 1、直觀法 2、信噪比法 10:1 3、基于響應(yīng)值標準偏差和標準曲線斜率法 4、數(shù)據(jù)要求 上述計算方法獲得的定量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進行驗證。應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)果，包括準確度和精密度驗證數(shù)據(jù)。,獸藥質(zhì)量標準分析方

60、法驗證指導(dǎo)原則,線性：在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試響應(yīng)值與試樣中被測物濃度呈比例關(guān)系的程度。 至少制備5份不同濃度的對照品溶液。 數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,范圍：分析方法能達到一定精密度、準確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。 含量測定：測試濃度的80％～120％； 含量均勻度檢查：測試濃度的70％～130

61、％，特殊劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當放寬； 溶出度或釋放度：一般為限度的±30％，或為下限的-20％至上限的+20％； 雜質(zhì)測定：規(guī)定限度的±20％； 含量測定與雜質(zhì)檢查同時，峰面積歸一化法：雜質(zhì)規(guī)定限度的-20％至含量限度（或上限）的＋20％。 校正因子測定時，范圍一般應(yīng)根據(jù)其應(yīng)用對象的測定范圍確定。,獸藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則,耐用性：在

62、測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。 可以先采用均勻設(shè)計確定主要影響因素，再通過單因素分析等確實變動范圍。 典型變動因素：被測溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)、時間等。 液相：流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、柱溫、流速等。 氣相：不同品牌或批號的色譜柱、固定相、不同類型的擔體、載氣流速、柱溫、進樣口和檢測器溫度等。,分析方法驗證轉(zhuǎn)移確認,方法驗

63、證（上一部分已介紹）實驗室通過試驗設(shè)計和測試，證明被驗證的方法適用于該方法擬定的檢測用途。（獸藥典：方法驗證的目的是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要求。）,分析方法驗證轉(zhuǎn)移確認,方法驗證（上一部分已介紹） 在建立獸藥質(zhì)量標準時，分析方法需經(jīng)驗證，這項工作大多是由產(chǎn)品研發(fā)者來完成，從新產(chǎn)品雛形開始質(zhì)量控制方法研究就要介入，隨著產(chǎn)品研發(fā)過程的不斷深入，產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法也在根據(jù)產(chǎn)品的變化而不斷調(diào)整和優(yōu)化，最終形成一個終產(chǎn)品質(zhì)量控制方

64、法，方法驗證工作貫穿于新產(chǎn)品研發(fā)始終。當獸藥生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，則質(zhì)量標準分析方法也需進行驗證。,分析方法驗證轉(zhuǎn)移確認,方法轉(zhuǎn)移 方法研發(fā)實驗室建立了分析方法經(jīng)過驗證后，其他實驗室使用這個方法進行檢測，出現(xiàn)方法在2個（方法研發(fā)和方法接收）不同實驗室之間轉(zhuǎn)移，方法接收實驗室要證明其能夠成功地在本實驗室運行該方法，就是方法轉(zhuǎn)移了。,分析方法驗證轉(zhuǎn)移確認,方法轉(zhuǎn)移 研發(fā)實驗室接收實驗室

65、 質(zhì)控實驗室、分地點質(zhì)控實驗室、合同公司質(zhì)控實驗室、產(chǎn)品購買公司質(zhì)控實驗室、注冊或復(fù)核檢驗實驗室比對性測試 被測樣品數(shù)量、方法的重要性和復(fù)雜性、接收實驗室設(shè)備及人員情況、研發(fā)實驗室提供樣品及其檢驗報告。,分析方法驗證轉(zhuǎn)移確認,方法確認 一是對象是藥典分析方法或法定分析方法二是證明藥典分析方法或法定分析方法適用于被測樣品三是證明方法使用人員有能力成功地操作藥典分析方法或法定分析方法。提示：無需進行方法驗證,分析方法驗證轉(zhuǎn)

66、移確認,方法確認 無需確認的項目：干燥失重、熾灼殘渣、重金屬、熱分析法、各種濕法化學(xué)分析，如酸值測定、用簡單儀器進行的檢驗，如pH值測定等。需要確認：專屬性；被測物濃度在定量限附近的限度檢查，常見的如殘留溶劑檢查；較高濃度的限度檢查和含量測定，常見的如有關(guān)物質(zhì)較高的限度檢查、水分等。 新標準要進行方法確認,,回 顧　 一、凡例 二、紫外--可見分光光度法 三、高效液相色譜法（氣相色譜法）