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1、怎樣鑒別異型淋巴細(xì)胞,檢驗(yàn)科:戴君潔,主要內(nèi)容,一、物品準(zhǔn)備,準(zhǔn)備干凈的玻片、推片瑞氏染液、待檢EDTA抗凝全血計(jì)時(shí)器顯微鏡計(jì)數(shù)器,血涂片的制備:1、制作血涂片的載玻片要求清潔、干燥、中性、無(wú)油膩;2、距載玻片一端約1cm處滴EDTA抗凝全血30ul;3、將推片放置于血滴的前端,緊挨血滴,使其順推片邊緣散開;4、調(diào)整好推片與載玻片的夾角,使其約呈30度角,均勻向前推片。,影響涂片厚薄的因素有:血滴大小、推片與載玻片間的
2、夾角,推片速度、血細(xì)胞比容。制備涂片時(shí),血滴越大、角度越大、推片速度越快,血膜越厚,反之越薄。血細(xì)胞比容增高、血液粘度較高時(shí),應(yīng)采用小血滴、小角度、慢推,可得滿意結(jié)果;血細(xì)胞比容減低、血液較稀時(shí),應(yīng)采用大血滴、大角度、快推。,血涂片的好壞直接影響到細(xì)胞的鑒別。 一張良好的血涂片,要求厚薄適宜、頭體尾明顯、細(xì)胞分布均勻、血膜邊緣整齊、兩端和兩邊留有一定空隙。,三、涂片染色,1、滴入瑞氏染液I液數(shù)滴蓋滿標(biāo)本,30秒; 2、再
3、加入瑞氏染液II液與I液比例為1:1,染1—3分鐘; 3、用流水沖洗涂片。,注意事項(xiàng):1、血涂片干透后火焰固定,否則細(xì)胞在染色過程中容易脫落。2、沖洗時(shí)應(yīng)以流水沖洗,不能先倒掉染液,以防燃料沉著在血涂片上。沖洗時(shí)間不能過久,以防脫色。如血涂片上有燃料顆粒沉積,可滴加甲醇,然后立即用流水沖洗。3、染色過淡可以復(fù)染,復(fù)染時(shí)應(yīng)先加緩沖液‘然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡,也可用甲醇脫色。4、染色的深淺與血涂片中細(xì)胞數(shù)量、血膜
4、厚度、染色時(shí)間、染液濃度、PH值密切相關(guān),可根據(jù)情況適當(dāng)糾正。,四、顯微鏡觀察,由于各種白細(xì)胞體積大小不等,在血涂片中分布很不均勻,一般體積較小的淋巴細(xì)胞在頭、體部分布較多,而尾部和兩側(cè)以中性粒細(xì)胞核單核細(xì)胞較多,異常大的細(xì)胞常在片尾末端出現(xiàn)。一般認(rèn)為細(xì)胞分布在片頭至片尾的3/4區(qū)域比較均勻,因此分類時(shí)最好選擇在體尾交界處,且必須按一定方式有規(guī)律地移動(dòng)視野。需在油鏡下觀察。先調(diào)粗螺旋找到視野,再調(diào)動(dòng)細(xì)螺旋慢慢找到較為清晰的視野。,在
5、病毒或過敏原等因素刺激下,外周血淋巴細(xì)胞增生并發(fā)生異常形態(tài)變化,稱異型淋巴細(xì)胞或“Downey”細(xì)胞。已知此種細(xì)胞屬T淋巴細(xì)胞,其形態(tài)的變異是因增生亢進(jìn),甚至發(fā)生母細(xì)胞化的結(jié)果。根據(jù)細(xì)胞形態(tài)可分為三型。,,2,,,,I型空泡型,III型幼稚型,II型不規(guī)則型,分型,細(xì)胞中等大小,細(xì)胞 多呈圓形或部分不規(guī)則 形或阿米巴型,胞質(zhì)嗜 堿性強(qiáng),呈深藍(lán)色,含 有大小不等的空泡或呈 泡沫狀,無(wú)
6、顆?;蛴猩?數(shù)顆粒,胞核偏位,呈 橢圓形,腎形或分葉形, 染色質(zhì)粗糙,呈粗網(wǎng)狀 或成堆排列。,,I型(泡沫型或漿細(xì)胞型),細(xì)胞胞體較I型大, 形態(tài)不規(guī)則,胞質(zhì)量 多,呈淺灰藍(lán)色,但 靠胞膜邊緣處較深染 且不整齊,無(wú)空泡, 可有少數(shù)天青胺藍(lán)顆 粒,胞核呈圓形、橢 圓型或不規(guī)則形,染 色質(zhì)較I型細(xì)致,亦呈 網(wǎng)狀。,,Ⅱ型(不規(guī)則型
7、或單核細(xì)胞樣型),細(xì)胞直徑 15um~18um,形態(tài)不規(guī)則,胞質(zhì)呈藍(lán)色,可有分布較均勻的小空泡,一般無(wú)顆粒,胞核圓形或卵圓形,可見核仁1個(gè)~2個(gè),染色質(zhì)細(xì)致、均勻,呈網(wǎng)狀排列,無(wú)濃集現(xiàn)象。,Ⅲ型(幼稚型或幼淋巴細(xì)胞樣型),異型淋巴細(xì)胞除I、II、III型三個(gè)類型外,有時(shí)也可見到少數(shù)組織細(xì)胞樣的難以歸類的異型淋巴細(xì)胞。,,異型淋巴細(xì)胞,異型淋巴細(xì)胞增多主要見于傳染性單核細(xì)胞增多癥、病毒性肝炎、流行性出血熱、濕疹等病毒性疾病和過敏性疾病。正
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