生化試劑參數(shù)

1、生化試劑各機(jī)型參數(shù)確定,目錄,生化試劑主要參數(shù)及意義生化試劑其他參數(shù)及意義各機(jī)型生化分析儀概括介紹各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),生化試劑主要參數(shù)及意義,生化試劑說明書中各參數(shù)（例：脂肪酶）,項(xiàng)目名稱方法類型反應(yīng)方向測(cè)定波長(zhǎng)測(cè)定溫度樣本體積試劑量分析時(shí)間校正方法,生化試劑主要參數(shù)及意義,項(xiàng)目名稱(test name)：常以項(xiàng)目的英文縮寫來設(shè)置。方法類型(assay/Method )（適用于儀器的方法）：方法類型主要分為

2、：終點(diǎn)法和動(dòng)力學(xué)法終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法：樣本與試劑混勻一定時(shí)間后讀取反應(yīng)終點(diǎn)吸光度，如血糖氧化酶法、總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法等。兩點(diǎn)終點(diǎn)法：（又稱固定時(shí)間法）樣本與試劑混勻一定時(shí)間后先讀取吸光度A1，延遲一定時(shí)間后讀取吸光度A2，計(jì)算吸光度差值與標(biāo)準(zhǔn)比較求得結(jié)果。如肌酐苦味酸法等?？上齼?nèi)源性物質(zhì)干擾。,生化試劑主要參數(shù)及意義,動(dòng)力學(xué)法一級(jí)動(dòng)力學(xué)法：（兩點(diǎn)速率法）樣本與試劑反應(yīng)不斷消耗反應(yīng)物，反應(yīng)速度不斷減小，吸光度變化不

3、斷減小，在特定時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，該時(shí)間段內(nèi)吸光度升高或降低與樣本濃度成正比，如同型半胱氨酸、總膽汁酸等。零級(jí)動(dòng)力學(xué)法：（連續(xù)監(jiān)測(cè)法，用于酶活性監(jiān)測(cè)）樣本與試劑反應(yīng)，反應(yīng)物可勻速生成某個(gè)產(chǎn)物，如NADH，在特定波長(zhǎng)下吸光度均勻的增大或減小，增大或減小的速度與樣本濃度呈正比。如堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶等。,生化試劑主要參數(shù)及意義,一級(jí)動(dòng)力學(xué)法：（兩點(diǎn)速率法）,生化試劑主要參數(shù)及意義,零級(jí)動(dòng)力學(xué)法：（連續(xù)監(jiān)測(cè)法，用于酶活性監(jiān)測(cè)）,生化試劑主

4、要參數(shù)及意義,反應(yīng)方向(response direction)正向反應(yīng)（UP/INC/+）：吸光度增加。負(fù)向反應(yīng)（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。測(cè)定溫度30℃、37℃、25℃樣本體積（sample volum）一般為2-35μl ，以0.1μl步進(jìn)。試劑量（regengt volum）一般為20-300μl ，以1μl步進(jìn)。不同機(jī)型生化分析儀的樣本量及試劑量限制不同，樣本與試劑可根據(jù)比例進(jìn)行增大或減少。,

5、生化試劑主要參數(shù)及意義,測(cè)定波長(zhǎng)（wavelength）：不同生化分析儀具備不同的波長(zhǎng)?？蛇x擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)。主波長(zhǎng)（main wavelength/primary wavelength ）根據(jù)待測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下具有最大吸收峰來選擇主波長(zhǎng)。副波長(zhǎng)（次波長(zhǎng)sub wavelength/second wavelength ）可不選擇設(shè)定。副波長(zhǎng)可消除樣本溶血，血清渾濁的干擾影響，副波長(zhǎng)與主波長(zhǎng)越接近越好。檢測(cè)時(shí)吸光度值為

6、主波長(zhǎng)的吸光度減去副波長(zhǎng)的吸光度。,生化試劑主要參數(shù)及意義,分析時(shí)間：孵育時(shí)間（incubate time）一點(diǎn)終點(diǎn)法的孵育時(shí)間是指樣本與試劑開始到反應(yīng)終點(diǎn)的時(shí)間；兩點(diǎn)終點(diǎn)法是指第一個(gè)吸光度反應(yīng)點(diǎn)開始到第二個(gè)吸光度點(diǎn)為止時(shí)間。一般為5min。延遲時(shí)間（delay time）加入第二反應(yīng)試劑后到第一個(gè)吸光度監(jiān)測(cè)點(diǎn)開始的時(shí)間。即樣本與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至第一個(gè)吸光度選擇點(diǎn)之間的時(shí)間。單試劑一般設(shè)置為30s，雙底物反應(yīng)或酶類

7、反應(yīng)一般設(shè)置為1-3min。連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間（ continuous monitoring time）在延遲時(shí)間后的零級(jí)反應(yīng)開始，監(jiān)測(cè)至少4個(gè)點(diǎn)（3個(gè)吸光度變化值），一般為1-2min。,生化試劑主要參數(shù)及意義,校正方法（Calibration Type）：可采用標(biāo)準(zhǔn)液（校準(zhǔn)液）定標(biāo)方式或理論K值方式獲取標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性定標(biāo)（ Linear/AB）：兩點(diǎn)定標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈直線。非線性定標(biāo)（Spline/4AB/polygonal）：

8、多點(diǎn)定標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線近似于直線。理論K值 （Factor/MB）：多用于連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定酶活時(shí)，無需定標(biāo)曲線，根據(jù)摩爾消光系數(shù)計(jì)算得到結(jié)果。 106× VF= —————— ?×v×L,生化試劑主要參數(shù)及意義,V：反應(yīng)體系總體積（ml）；v：樣本體積（ml）?：摩爾消光系數(shù)（cm2/mol）L：比色杯光徑（cm）；106：將mol換算為μmol,生化試劑其他

9、參數(shù)及意義,試劑吸光度上限、下限/試劑吸光度界限(OD Limt) 底物耗盡限額(substrate exhaust limit)試劑吸光度線性范圍(Linearity） 試劑線性范圍（Technical Limit）前區(qū)檢查限(Prozone Check Limt) 方程式（Fomular）小數(shù)位（Decimal Places）雙份界限（Duplicate Limit）敏感性界限(Sensitivity Limit)

10、第一標(biāo)準(zhǔn)吸光度界限(S1 Abs.limt)反應(yīng)過程吸光度界限(Absorbance Limit),生化試劑其他參數(shù)及意義,試劑吸光度上限、下限/試劑吸光度界限(OD Limt) 常用規(guī)定波長(zhǎng)及光徑下的吸光度值表示。終點(diǎn)法常在0點(diǎn)讀數(shù)，連續(xù)監(jiān)測(cè)法常以反應(yīng)監(jiān)測(cè)起始點(diǎn)來判讀該吸光度值?？捎糜谂袛嘣噭┵|(zhì)量。檢測(cè)試劑空白時(shí)，若超過此參數(shù)的限值，則提示試劑可能失效。,底物耗盡限額(substrate exhaust limit)連續(xù)監(jiān)測(cè)

11、法或兩點(diǎn)終點(diǎn)法時(shí)設(shè)置。根據(jù)吸光度上升或下降設(shè)定MAX-OD/MIN-OD，吸光度超過設(shè)定界限時(shí)，代表樣品酶活非常高，底物消耗太快，所測(cè)得結(jié)果不能代表真實(shí)酶活力。,生化試劑其他參數(shù)及意義,試劑吸光度范圍(Linearity） 線性度不能超過設(shè)定界限，超限時(shí)說明吸光度的變化量之間已經(jīng)不成線性或說明底物不足，檢測(cè)結(jié)果會(huì)變低。試劑線性范圍（Dynamic Range/Technical Limit）與試劑/樣本比值有關(guān)，超出范圍的

12、樣本應(yīng)增加樣本量重測(cè)或樣本稀釋后重測(cè)。,生化試劑其他參數(shù)及意義,方程式（Fomular）Y=aX+ba為截距，b為斜率。用于校正檢測(cè)結(jié)果，一般a為1.000，b為0.000，,小數(shù)位（Decimal Places）主要根據(jù)項(xiàng)目參考范圍的小數(shù)位進(jìn)行設(shè)定，一般0-2位。,前區(qū)檢查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比濁法項(xiàng)目，可根據(jù)項(xiàng)目要求選YES或NO，比較終點(diǎn)法后兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)的差別，如果后一點(diǎn)比前一點(diǎn)的吸光度低

13、，表示已經(jīng)有抗原過剩，樣本應(yīng)稀釋后重測(cè),生化試劑其他參數(shù)及意義,雙份界限（Duplicate Limit）也稱離散性，是同一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液兩次測(cè)定吸光度的差值，表示試劑和儀器的重復(fù)性,此值越小表示試劑和儀器的精密度越高,敏感性界限(Sensitivity Limit) 可以檢測(cè)的最低吸光度值，也就是檢測(cè)最低濃度的可靠性,第一標(biāo)準(zhǔn)吸光度界限(S1 Abs.limt)通常指零濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度界限，在終點(diǎn)法和速率法中計(jì)算方式不同,生化試劑其

14、他參數(shù)及意義,反應(yīng)過程吸光度界限(Absorbance Limit)在動(dòng)力學(xué)反應(yīng)中,由于高濃度（活性）樣本使底物耗盡，所測(cè)吸光度已不可靠,使高濃度的樣本測(cè)定值低很多,甚至為負(fù)值。為能正確反映測(cè)定結(jié)果，需設(shè)置底物耗盡限(某一特定吸光度)，是在反應(yīng)時(shí)間內(nèi)反應(yīng)沒有發(fā)生底物耗盡時(shí)所能達(dá)到的最小(反應(yīng)曲線向下)或最大(反應(yīng)曲線向上)的吸光度值 ，該吸光度即為吸光度界限?？捎糜诖_保高濃度（活性）樣本結(jié)果的準(zhǔn)確性。,淡藍(lán)色字體標(biāo)注參數(shù)設(shè)定時(shí)一般為機(jī)

15、器默認(rèn)。,各機(jī)型生化分析儀概括介紹,AU400,AU640,AU2700,AU480,各機(jī)型生化分析儀概括介紹,AU系列,各機(jī)型生化分析儀概括介紹,各機(jī)型生化分析儀概括介紹,日立系列,各機(jī)型生化分析儀概括介紹,Beckman CX5,Beckman LX20,各機(jī)型生化分析儀概括介紹,Beckmam系列,各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),不同機(jī)型分析方法 表示方法 常用選

16、擇項(xiàng) COBAS Asaay Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end HITACHI Assay code Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point endOLYMPUS Method RATE/FIXED/ENDBECKMAN

17、 Reaction type RATE1/2/END1/2ABBOTT Reaction defintion Rate /Flex Rate/End,各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),不同機(jī)型反應(yīng)方向 表示方法 可選擇項(xiàng) COBAS INC/DEC

18、 INC/DECHITACHI INC/DEC INC/DECOLYMPUS Reaction Slope +/-BECKMAN Reaction Direction Positive/NegativeABBOTT Reaction Mode

19、 Up/Down,各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),不同機(jī)型測(cè)定波長(zhǎng) 主波長(zhǎng) 次波長(zhǎng)COBAS Wave(Main/ Sub)HITACHI Wave(Main/

20、 Sub)OLYMPUS Wavelength pri Wavelength secBECKMAN Primary Wavelength Secondary WavelengthABBOTT Wavelength Primary Wavelenght Secon

21、dary 不同機(jī)型所具波長(zhǎng)數(shù)目不同，一般波長(zhǎng)分布為 從紫外線到紅外線340-800nm。參數(shù)設(shè)定時(shí)可選擇與項(xiàng)目要求相近的波長(zhǎng)。,各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),不同機(jī)型反應(yīng)時(shí)間：儀器的一個(gè)分析周期中，試劑和樣本混合最后一點(diǎn)測(cè)定讀數(shù)時(shí)間 常見儀器可以選擇的時(shí)間COBAS P800 :1~10、15、22分鐘 C501: 3~10分鐘HITACHI ：3、5、8、10、15、22分鐘OLYMPUS

22、固定時(shí)間： 8.3分鐘ABBOTT固定時(shí)間：9.6 分鐘BECKMAN可達(dá)時(shí)間：975秒,各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),不同機(jī)型試劑加入相應(yīng)時(shí)間(分鐘) HITACHI R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) P800 R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) C501 R1 R2(

23、1.5) R3(5) OLYMPUS R1 R2(3.3) ABBOTT R1 R2(5.1),各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn),不同機(jī)型讀點(diǎn)間隔時(shí)間及最大讀點(diǎn)數(shù) 讀點(diǎn)間隔(秒) 最大讀點(diǎn)數(shù) P800 18 34 C501 8