第三十六章微生物檢驗的質量控制

1、第三十六章微生物檢驗的質量控制,微生物檢驗的質量控制，包括室內質量控制和室間質量控制評價。室內質量控制是由實驗室內部制定并實施的，是質量保證的核心和基礎。室間質量控制評價是由實驗室外部的組織或機構對實驗室進行的質量評價。,第一節(jié) 室內質量控制,（一）人員與組織管理 經過廣泛的基礎訓練教育，包括微生物學、基礎醫(yī)學臨床醫(yī)學知識的學習，專業(yè)化的實驗技能培訓。 參加醫(yī)務人員的繼續(xù)教育。配有一名經嚴格訓練并長期從事于微

2、生物檢驗的技術人員，全面負責實驗室的工作。,（二）操作手冊,包括：①各級人員的職責和權限；②實驗室安全措施；③標本采集和處理指南；④本室開展的檢驗項目及最低鑒定要求；⑤培養(yǎng)基和試劑的配制方法；⑥質量控制方案；⑦常用參考數據；⑧其他制度。,（三）培養(yǎng)基的質量控制,培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培養(yǎng)基質量的好壞，直接關系到分離培養(yǎng)的成敗。目前大多數實驗室都使用干粉培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對來自著名的微生物培養(yǎng)

3、基生產公司的培養(yǎng)基，質量比較穩(wěn)定。只要按照說明書的要求貯存，在有效期內使用可獲得滿意效果。,測定羊血瓊脂平板的性能,（四）試劑、抗血清和染色液質量控制,1．試劑及染色液注明配制日期， 有效日期及貯存條件。測試 同時進行陽性和陰性對照試 驗。,2．抗血清的質量控制來源可靠， 根據使用說明使用與保存。 凍干制品還應注明配成水溶 液的日期?？寡鍛吻?。 第一次使用時，應用已知菌 效價和特異

4、性進行測定。合 格者方可使用。,（五）抗生素與抗生素紙片,抗菌藥物敏感試驗是臨床進行抗菌治療的指導性實驗，其結果的正確性直接關系到抗菌治療的成敗。常用有紙片法和稀釋法，保證結果的準確性極為重要。,舉例：紙片法質量控制,①培養(yǎng)基：應使用合格的MH瓊脂， 應使用標準菌株、已知藥敏紙 片和標準方法進行測試，符合 要求才可使用。 ②菌懸液濃度標準： 為1.5×108CFU／ml 。,③含藥紙片應冷凍保存

5、，－20℃ 可保存一年。新購紙片用標準 菌株和培養(yǎng)基，用標準方法測 定，符合要求方可使用。,④實驗過程及結果測量：菌懸液應 在15min內接種至平板，平放3min， 然后將藥物紙片貼到平板上， 100mm的平皿不超過5張，置35℃ 孵育18h，測量精確度1／10mm。⑤質控菌株有：金黃色葡萄球菌 ATCC25923；大腸 埃希菌ATCC25922

6、 等。,⑥抑菌環(huán)的質控范圍：在20個試驗 結果中只能有1個結果超出所列的 范圍。 ⑦質控測定次數：每批新的MH瓊脂和 含藥紙片必須用質控菌株進行檢測 30日，30個抑菌環(huán)直徑只有少于3個 結果超出范圍。達到要求后，每周 檢測一次。,（六）儀器,1．高壓滅菌器和干熱滅菌器最好 在滅菌器裝上溫度記錄裝置， 以保證整個滅菌過程中保持合 適的溫度。為了保證滅菌的徹 底

7、，可用生物指示劑嗜熱脂肪 芽胞桿菌ATCC7953監(jiān)視滅菌效 果。,2．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱 應在每 日工作開始和結束時記錄溫度。 3．二氧化碳培養(yǎng)箱 每天檢查CO2含量。4．厭氧罐或厭氧箱 美籃為指示劑， 無氧時應無色。,5．生物安全柜 更換濾網由專門 技術人員進行。6．細菌培養(yǎng)儀 對每批培養(yǎng)瓶進 行生長試驗。保證在有效期內 使用。7．微生物鑒定儀 應及時更新系 統(tǒng)操作軟件，

8、使之能識別最新 認識的微生物。,（七）標本檢驗過程的質量控制,微生物學實驗室除了上述儀器、試劑、人員等進行質量控制外，還應對標本檢驗過程中涉及的每個環(huán)節(jié)進行全程質量控制。包括從標本采集 ，直接涂片檢查 ，分離培養(yǎng)到鑒定的全過程。使用自動化鑒定儀或編碼方式鑒定，必須進行核對以防錯誤。,（八）室內全面質量控制,實驗室人員要對以上各項的質量控制內容進行全面實施。由個人負責全面的質量控制，自我核對，定期與參考實驗室核對

9、并接受考評。,（九）標準菌株的來源和保存,l．標準菌株的來源 標準菌株是 指具有典型的、穩(wěn)定的生理生 化特征，并被國際社會所認可 的菌株。來源于專門的機構， 如衛(wèi)生部藥物生物制品鑒定所 菌種保藏中心。,2．標準菌株的保存,（l）一般保存法：將菌種于半固體培 養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng) 18h時后封蓋無菌石 蠟油，

10、置4℃保存。,（2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種 保藏方法，它具 有不改變菌種性 狀和保存時間長 等優(yōu)點，但需有 專門的冷凍干燥 設備。,第二節(jié) 空間質量控制,（一）機構 我國負責臨床微生物學實驗室質量控

11、制 的部門是各級臨床檢驗中心和參考實驗 室，負責定期或不定期地通過各項熟練 程度考核和盲點試驗檢查各實驗室的工 作質量和水平，進行總結和評估。各級 實驗室可同時接受國內、國際多個質量 控制機構或參考實驗室的質量評價。,（二）一般性檢查項目,包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情況。1．培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存 方法、滅菌質量、有效期。2．室內全面質量控制的建立，室內工作人員 的熟練程度的考核和

12、盲點試驗的進行情況， 細菌檢驗的操作手冊及操作的規(guī)范性。3．設備的操作卡，操作人員的操作水平，設 備的使用保養(yǎng)、維修記錄。,（三）熟練程度的考核,由質控管理機構（檢驗中心或參考實驗室）發(fā)放模擬標本或菌種，接收的實驗室知道菌株的來源、檢驗的內容和時間。實驗室完成鑒定后在規(guī)定時間內將結果反饋至檢驗中心或參考實驗室，進行評價。,分析結果錯誤的原因，提供有關的教育資料或舉辦學習班，不斷培養(yǎng)和訓練技術人員，提高了解決類

13、似問題的技術水平。但受試實驗室通常對這些菌株特別重視，采用超過常規(guī)操作標準的方法進行鑒定，使上報結果不能準確反映實驗室的真實水平。,（四）盲點試驗,為了準確反映受控實驗室日常處理臨床標本的實際水平及能力，較好的方法是進行未知標本的盲點質量控制。由質控管理機構將模擬標本混入臨床普通標本，送人實驗室進行常規(guī)測定。,實驗室主管及實驗操作者不知道哪一個標本是來自質控機構的。實驗結果由質控管理機構負責收回，進行評價。,（

14、五）質控結果的分析與評價,質控管理機構對每次質控結果進行統(tǒng)計分析，將每一實驗室的結果與標準進行比較。根據參加的規(guī)模和鑒定的正確數，計算鑒定正確率及所有參加實驗室的平均分，以及每個實驗室的得分。,世界衛(wèi)生組織對每一個正確的鑒定得3分；部分正確但可以接受的鑒定結果得2分；鑒定結果部分錯誤得1分；完全錯誤的0分。,英國國家微生物學質量控制實驗室的計算公式為：標本鑒定正確數－平均實驗室正確數 /實驗室平均正確數的標準差,高