淺部感染真菌

1、第二十章 病原性真菌,第一節(jié) 淺部感染真菌 淺部感染真菌包括表面感染真菌、 皮膚癬真菌和皮下組織感染真菌。,一、表面感染真菌,主要寄居于人體皮膚和毛干的最表層，在我國主要是糠秕馬拉色菌，為條件致病菌，是一種嗜脂性酵母樣菌。它侵犯皮膚角質(zhì)層引起一種慢性、無癥狀的淺部真菌病，即汗斑，無明顯炎癥反應(yīng)。主要是色素異常性改變，由淡變深，而老斑疹色素由深轉(zhuǎn)淺，成為白斑。還可引起毛囊炎、脂溢

2、性皮炎等。,微生物檢驗(yàn),1．直接顯微鏡檢查 可采用透明膠帶粘貼取材法，將透明膠帶直接貼于皮膚表面，數(shù)分鐘后揭下，直接貼于載玻片上鏡檢或經(jīng)棉藍(lán)染色或革蘭染色后鏡檢?？梢婃咦雍途z。孢子為圓形或卵形，厚壁，芽頸較寬，常成簇分布；菌絲粗短，呈臘腸樣。,2．分離培養(yǎng)與鑒定 將鱗屑接種于含菜籽油的培養(yǎng)基，37℃孵育3d后，在培養(yǎng)基上開始生長，20d左右菌落約lOmm乳酪色酵母型菌落，表面光滑。取菌落作涂片染色鏡檢，觀察真菌形態(tài)。,二、皮膚癬

3、真菌,寄生于皮膚角蛋白組織的淺部真菌稱為皮膚癬菌，又稱皮膚絲狀菌。約有45種，一部分僅感染動(dòng)物，對(duì)人致病的約有20余種。無性階段屬于半知菌門，而有性型則屬于子囊菌門。分為毛癬菌屬、表皮癬菌屬和小孢子癬菌屬等三個(gè)菌屬。,(一)臨床意義,皮膚癬菌易侵犯人體皮膚、指甲、毛發(fā)的角蛋白組織并生長繁殖致病，是因?yàn)槠淠墚a(chǎn)生角質(zhì)溶解酶。皮膚癬菌是接觸傳染，只要反復(fù)接觸患者均有可能被感染。在同一病人有不同的臨床表現(xiàn)，如毛癬菌屬可引起發(fā)癬、體

4、癬、甲癬；而相同部位的病可由不同皮膚癬菌引起，如甲癬(俗稱灰指甲)可由毛癬菌屬和表皮癬菌屬引起 。,1．毛癬菌屬,有20種，其中有13種對(duì)人致病。常見的有紅色毛癬菌、紫色毛癬菌、須毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌和許蘭毛癬菌等。毛癬菌感染的皮屑、甲屑或病發(fā)10％KOH溶液消化后鏡檢，可見有菌絲，病發(fā)內(nèi)、外可見菌絲或孢子。在沙氏培養(yǎng)基上可白、紅、橙或棕色，表面呈絨毛狀、粉末狀或蠟狀菌落。鏡下可見梳狀、球拍、螺旋或鹿角菌絲；葡萄狀或梨狀

5、小分生孢子，細(xì)長薄壁大分生孢子。,2. 表皮癬菌屬,對(duì)人致病的只有絮狀表皮癬菌, 感染的皮屑和甲屑經(jīng)10％KOH液消化后鏡檢，可見分枝斷裂的有隔菌絲，少見孢子。在沙氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，菌落初為白色鵝毛狀，以后轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色粉末狀。鏡下可見球拍狀菌絲、卵圓形或巨大棒狀薄壁大分生孢子，無小分生孢子，在陳舊培養(yǎng)物中可見厚膜孢子。,3．小孢子癬菌屬,有15種，對(duì)人致病的有8種，常見的有鐵銹色小孢子菌、石膏樣小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌感染

6、的皮屑和毛發(fā)經(jīng)10％KOH處理后鏡檢，皮屑中有分枝斷裂菌絲，在毛發(fā)中呈現(xiàn)小孢子鑲嵌的鞘包裹著發(fā)干。在沙氏培養(yǎng)基中可見白色、棕黃色或黃褐色、粉末或絨毛狀菌落。鏡下可見梳狀、球拍狀或結(jié)節(jié)狀菌絲，卵圓形小分生孢子、厚壁梭形(紡錘形)大分生孢子。,(三)微生物檢驗(yàn),1．標(biāo)本采集 采集新發(fā)生的皮膚損害邊緣皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取無光澤病發(fā)，黃癬采集黃癬痂。將標(biāo)本盛于清潔紙袋，鱗屑要用黑紙包好。,2．直接顯微鏡檢查 皮屑標(biāo)本用

7、10％KOH液制成濕片，指甲用25％KOH或25％NaOH含 5％甘油處理。鏡檢可見透明、有隔，常有分支的菌絲及成鏈的關(guān)節(jié)孢子，三個(gè)癬菌屬難以鑒別。毛癬菌屬感染病發(fā)有發(fā)外型和發(fā)內(nèi)型孢子，而小孢子菌屬只有發(fā)外型孢子。,3．分離培養(yǎng)與鑒定,皮屑、甲屑和病發(fā)標(biāo)本，先用70％乙醇或在青、鏈霉素混合液內(nèi)處理 5min，再用生理鹽水洗3次，然后接種沙氏瓊脂斜面，25℃培養(yǎng)，每周觀察菌落形態(tài)及顏色，直至第四周。挑取菌落鏡檢菌絲和孢子，也可作棉蘭染色后

8、鏡檢或作小培養(yǎng)后鏡檢。必要時(shí)作其他鑒定如毛發(fā)穿孔試驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)和特殊營養(yǎng)需要試驗(yàn)等來鑒定皮膚癬菌。,毛發(fā)穿孔試驗(yàn),是將頭發(fā)發(fā)剪成lcm長，置于已加入25ml蒸餾水和2—3滴10％酵母浸膏液的平皿內(nèi)，高壓滅菌。將待檢皮膚真菌接種于平皿內(nèi)，置25℃孵育四周，每周檢查一次，每次取數(shù)根毛發(fā)置載玻片上，經(jīng)乳酚棉藍(lán)染色后，置低倍鏡下觀察。若毛發(fā)有裂口或陷凹者為陽性，否則為陰性。,4．藥物敏感試驗(yàn),皮膚癬菌對(duì)灰黃霉素、伊曲康唑等藥物敏感

9、。,三、皮下組織感染真菌,主要有著色真菌和孢子絲菌。一般經(jīng)外傷感染后，在局部皮下組織繁殖，并緩慢向周圍組織擴(kuò)散，還可經(jīng)淋巴、血液向全身擴(kuò)散。,(一)著色真菌,是自然界的腐生菌，經(jīng)破損皮膚而感染，引起病損皮膚變黑，引起著色真菌病。主要真菌有卡氏枝孢霉、裴氏著色真菌、緊密著色真菌和疣狀瓶霉。,1．臨床意義,常在患者外傷后感染，多發(fā)生四肢暴露部位，開始為小丘疹，表面干燥或濕潤，有鱗屑或鱗痂，逐漸形成斑塊結(jié)節(jié)，呈疣狀增殖。皮損

10、反復(fù)發(fā)生，且長期不愈，可致畸致殘。免疫功能低下時(shí)可侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)或經(jīng)血流擴(kuò)散。病理變化主要為角化過度及角化不全。,2．微生物特性,著色真菌菌絲短粗分隔，呈棕色，有三型分生孢子：①樹枝型：菌絲末端有分生孢子柄，柄端分叉長出孢子；②劍頂型：圍繞菌絲末端或菌絲橫隔處長有一圈分生孢子；③花瓶型：在菌絲分隔處長出花瓶狀的分生孢子柄，在瓶口長出成叢的小分生孢子。在葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)1周，出現(xiàn)灰黑色菌落，隨之菌落表面出現(xiàn)絨毛狀或天鵝

11、絨狀氣生菌絲，菌落色素加深。,3. 微生物檢驗(yàn),(1)直接顯微鏡檢查 皮屑用10％—20％KOH溶液加熱處理后鏡檢，可見單個(gè)或成群厚壁孢子，有橫隔或中間十字分隔。取乳頭狀增殖的病損擠壓出的分泌物鏡檢陽性率最高。膿汁、腦脊液或活組織也可做鏡檢。鏡檢結(jié)果結(jié)合臨床可確定診斷。,(2)分離培養(yǎng)與鑒定,1)將標(biāo)本接種沙氏培養(yǎng)基，生長緩慢，菌落從灰黑色至黑色，有氣生菌絲。菌落涂片鏡檢可見三種類型的分生孢子，有鑒定價(jià)值。2)明膠液化試驗(yàn)：致

12、病性菌株均不液化明膠。3)其他生化反應(yīng)：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化硝酸鹽，需維生素B1。,4．藥物敏感試驗(yàn),對(duì)5-FC、伊曲康唑、氟康唑敏感， 但易產(chǎn)生耐藥性。,(二)孢子絲菌,孢子絲菌屬于腐生性真菌，廣泛分布于土壤、塵埃、木材上。主要病原真菌是申克孢子絲菌。,孢子絲菌病是人獸共患性疾病，傳染源是人和動(dòng)物，傳播途徑主要經(jīng)破損皮膚接觸感染。經(jīng)微小創(chuàng)口侵入皮膚后，創(chuàng)口局部出現(xiàn)炎癥性小結(jié)，增大形成炎癥性斑塊或增生性糜爛?？裳亓馨?/p>

13、管分布，引起亞急性和慢性肉芽腫，稱為孢子絲菌性下疳。經(jīng)呼吸道引起肺孢子絲菌病，并可沿血行播散至其他器官如骨、眼等。,申克孢子絲菌是二相性真菌。在自然環(huán)境中或沙氏培養(yǎng)基上25℃～28℃培養(yǎng)時(shí)呈霉菌型(菌絲相)，而在組織內(nèi)或在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)為酵母型(組織相)。菌絲相可見菌絲兩側(cè)伸出細(xì)長分生孢子柄，末端長出成群梨狀小分生孢子。組織相則可見卵圓形小體，形似雪茄煙狀，常位于中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞內(nèi)。在沙氏培養(yǎng)基上形成黑褐皺褶薄膜菌落，而在

14、胱氨酸葡萄糖血瓊脂培養(yǎng)基上則形成灰黃色柔軟的類酵母型菌落。,3．微生物檢驗(yàn),(1)直接昆微鏡檢查：取患者膿、痰、血、痂皮或病理組織塊等作涂片或切片，革蘭或 PAS染色，在巨噬細(xì)胞或中性粒細(xì)胞內(nèi)、外，可見G+或PAS陽性(紫紅色)卵圓形的孢子。,(2)分離培養(yǎng)與鑒定：將標(biāo)本接種于沙氏培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)，2-3d開始生長，初為白色濕潤的酵母型菌落，以后變?yōu)榈Х壬辽詈稚Ｍ科旧R檢，可見典型的菌絲相的申克孢子絲菌。接種于胱氨酸葡萄糖血瓊

15、脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)2-3d，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。鏡下可見G+卵圓形的孢子。,(3)藥物敏感試驗(yàn)：對(duì)碘化鉀、伊曲康唑、特比 萘芬等藥物敏感。(4)抗體檢測(cè)：取患者血清做凝集試驗(yàn)，若抗體 效價(jià)大于l：320有診斷意義。(5)動(dòng)物接種：將標(biāo)本接種小白鼠腹腔內(nèi)，2周內(nèi) 引起腹腔炎，取膿汁作涂片染色鏡槍，可見 革蘭陽性、卵圓形或梭形小體。,第二節(jié) 深部感染真菌,深部感染真菌是指能侵襲深部組織和

16、內(nèi)臟及全身的真菌，主要有假絲酵母菌、隱球菌、曲霉、毛霉、組織胞漿菌和卡氏肺孢菌等，其中以隱球菌感染較常見。 組織胞漿菌為二相性真菌，假絲酵母菌、曲霉、毛霉和卡氏肺孢菌等為條件致病性真菌，只有在一定的條件下才引起機(jī)體致病。,一、假絲酵母菌,俗稱念珠菌，有81個(gè)種，其中有11種對(duì)人有致病性：白假絲酵母菌、為最常見的致病菌。此外，熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌也較多引起疾病。,(一)白假絲酵母菌,通常存在于人的口腔、

17、上呼吸道、腸道和陰道粘膜上，當(dāng)機(jī)體發(fā)生菌群失調(diào)或抵抗力降低時(shí)，可引起念珠菌病。如嬰兒的鵝口瘡、假絲酵母菌性陰道炎、龜頭炎、腸炎、肺炎、膀胱炎、腎孟腎炎和中樞神經(jīng)系統(tǒng)白假絲酵母菌病，如腦膜炎、腦膜腦炎、腦膿腫等。此外，因心瓣膜手術(shù)而引發(fā)心內(nèi)膜炎、長期用靜脈內(nèi)導(dǎo)管而引起全身性假絲酵母菌病，病死率極高。,1．微生物特性,白假絲酵母菌呈圓形或卵圓形，直徑3-6μm。革蘭陽性，著色不均勻。出芽方式繁殖，在組織內(nèi)可見芽生孢子、假菌絲，在玉米粉培養(yǎng)基

18、中可產(chǎn)生假菌絲和厚膜孢子。,2．微生物檢驗(yàn),1)直接顯微鏡檢查：取膿汁、痰和局部炎癥性分泌物直接涂片，革蘭染色后鏡檢，顯微鏡見到革蘭陽性(著色不均勻)、圓形或卵圓形菌體或孢子及假菌絲，可確認(rèn)為假絲酵母菌感染。2)抗原檢測(cè)：取病人血清作ELISA、免疫印跡法等檢測(cè)白假絲酵母菌抗原。3)核酸檢測(cè)：用PCR法將白假絲酵母菌DNA分子擴(kuò)增后以分子探針檢測(cè)，具有較好的敏性和特異性。,4)分離培養(yǎng),將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，25℃或37℃培養(yǎng)

19、1～４d后，可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。,鑒定,1)芽管形成試驗(yàn)：將假絲酵母菌接種于0.2～0.5m|血清中，37℃孵育1.5～４h觀察有無芽管形成。白假絲酵母菌可形成芽管，其他假絲酵母菌不形成芽管。2)厚膜孢子形成試驗(yàn)：將假絲酵母菌接種于玉米粉培養(yǎng)基25℃孵育1-2d后，白假絲酵母菌在菌絲頂端、側(cè)緣或中間形成厚膜孢子。,3)糖同化或發(fā)酵試驗(yàn),凡發(fā)酵某種糖一定能同化該糖，故只需做那些不發(fā)酵糖的同化試驗(yàn)。將假

20、絲酵母菌接種糖發(fā)酵管，25℃孵育，一般觀察2～3d，對(duì)不發(fā)酵或弱發(fā)酵管可延長至10d或2—4周。觀察有無酵母生長或液體培養(yǎng)基是否變混濁。現(xiàn)在商品化的產(chǎn)色培養(yǎng)基可快速鑒定白假絲酵母菌和其他假絲酵母菌。,(3)藥物敏感試驗(yàn)：對(duì)二性霉素B、5-FC等藥 物敏感，但對(duì)5-FC極易產(chǎn)生耐藥性。(4)抗體檢測(cè)：早期診斷可用ELlSA夾心法、 免疫酶斑點(diǎn)試驗(yàn)，方法簡便。也可用乳膠 凝集試驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)等檢測(cè)血

21、清 中抗白假絲酵母菌抗體。(5)動(dòng)物試驗(yàn)：將假絲酵母菌懸液注射1ml于家 兔耳靜脈或注射0.2ml于小白鼠尾靜脈，假 絲酵母菌對(duì)動(dòng)物無致病性。,(二)熱帶假絲酵母菌,廣泛分布于自然界，在人體表和外界相通的腔道中也存在。熱帶假絲酵母菌可引起皮膚、粘膜和內(nèi)臟假絲酵母菌病。它除可在粘膜細(xì)胞上增殖引起感染外，其產(chǎn)生的毒素可引起過敏反應(yīng)及產(chǎn)生的水解酶類引起組織損傷。,微生物檢驗(yàn),(1)直接顯微鏡檢查：將標(biāo)本作涂片革蘭

22、 染色后鏡檢，觀察Ｇ+假絲酵母菌。(2)分離培養(yǎng)與鑒定：將標(biāo)本接種在沙氏 培養(yǎng)基上形成色暗而干燥的菌落, 取 菌落作TZC反應(yīng)。,TZC反應(yīng),即在葡萄糖蛋白胨瓊脂內(nèi)加入0．05g／L氯化三苯基四氮唑(TZC)，熱帶假絲酵母菌在此培養(yǎng)基上生長后使培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色或紫色，而白假絲酵母菌不使培養(yǎng)基變色(淡紅)，其他假絲酵母菌使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。再取菌落做糖發(fā)酵或同化試驗(yàn)、芽管形成較遲(血清中6h以上)，不形成厚

23、膜孢子、動(dòng)物試驗(yàn)陰性。,二、隱球菌屬,包括17個(gè)種和7個(gè)變種，廣泛分布于自然界，人體體表、口腔和腸道中。外源性感染, 經(jīng)呼吸道侵入，由肺經(jīng)血行播散,可侵犯肺、腦及腦膜、皮膚、骨和關(guān)節(jié)。好發(fā)于細(xì)胞免疫功能低下者，如AIDS、惡性腫瘤、糖尿病、器官移植及大劑量使用糖皮質(zhì)激素者?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)新生隱球菌、淺白隱球菌和羅倫隱球菌有致病性。,(１)微生物特性,在組織中呈圓形或卵圓形，直徑一般在4～6μm，外周有寬厚莢膜，莢膜較菌大1～3倍，折光性強(qiáng)，一

24、般染色法不易著色而難以發(fā)現(xiàn)而得名。常采用墨汁負(fù)染色法，在黑色景下可鏡檢到透亮菌體和寬厚莢膜。非致病性隱球菌無莢膜。,（２）生物學(xué)多態(tài)性,有A、B、C、D等4個(gè)血清型，歸入兩個(gè)變種組：①新生隱球菌新生變種，有性階段為新生線黑粉菌，血清型為A、D；②新生隱球菌格特變種，有性階段為棒桿孢線黑粉菌，血清型為B、C。用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚藍(lán)培養(yǎng)基可區(qū)分兩個(gè)種，B、C型可使培養(yǎng)基由黃色變藍(lán)色，而A、D型則無此作用。在沙氏培養(yǎng)基上形成白色

25、粘稠菌落。,(３)微生物檢驗(yàn),(1) 標(biāo)本直接鏡檢：用病人腦脊液作墨汁負(fù)染色檢查是診斷隱球菌腦膜炎最簡便、快速方法。常規(guī)細(xì)胞染色可發(fā)現(xiàn)隱球菌，但易誤診和漏診。如用PAS染色后新生隱球菌呈紅色。,(2)抗原檢測(cè),用乳膠凝集試驗(yàn)、ELISA、和單克隆抗體法等免疫學(xué)方法檢測(cè)隱球菌莢膜多糖特異性抗原，已成為臨床上的常規(guī)診斷方法，其中以乳膠凝集試驗(yàn)最為常用，此法簡便、快速。特別對(duì)直接鏡檢和分離鑒定陰性者更有診斷價(jià)值。ELISA敏感性和特異性都較高

26、。單克隆抗體法除有較高敏感性和特異性外，標(biāo)本無須稀釋和預(yù)先處理的優(yōu)點(diǎn)。,(3)核酸檢測(cè),可用痰液、支氣管吸出物等標(biāo)本核酸檢測(cè)方法有DNA探針法、PCR探針法等，用于檢測(cè)的探針、引物主要選自保守區(qū)的重復(fù)序列。可檢出新生隱球菌，并可區(qū)別類型，是新生變種還是格特變種。非致病性隱球菌不被檢出。此方法不受藥物治療的影響，還能正確評(píng)價(jià)臨床療效和預(yù)后等。,（４）分離培養(yǎng),將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，病原性隱球菌在25℃和37℃生長，而非病原性隱球菌

27、在37℃時(shí)不生長。培養(yǎng)2—5d后觀察菌落形態(tài)特點(diǎn)，并取菌落作印度墨汁負(fù)染色鏡檢。,(５)鑒定,1）酚氧化酶試驗(yàn)：接種L-多巴枸櫞酸鐵和咖 啡酸培養(yǎng)基中，經(jīng)2～5d培養(yǎng)，呈棕黑色 菌落。2）脲酶試驗(yàn)：能產(chǎn)生脲酶分解尿素瓊脂培養(yǎng) 基中的尿素形成NH4和CO2，使pH升高， 培養(yǎng)基可由黃色變粉紅色，而白假絲酵母 菌為陰性。,3）糖同化及發(fā)酵試驗(yàn)：能同化葡萄糖、 半乳糖、

28、蔗糖和肌醇，但不能發(fā)酵糖 類，不能同化硝酸鹽。非致病性隱球 菌不能同化肌醇。,三、曲霉,廣泛分布于自然界，達(dá)900余種，分為18個(gè)群，對(duì)工業(yè)和醫(yī)藥的用途很大。釀酒造醬。生產(chǎn)有機(jī)酸及酶制劑，抗生素等。人體對(duì)曲霉有極強(qiáng)免疫力，只有在免疫功能降低時(shí)才能致病，如使用免疫抑制劑、腎上腺皮質(zhì)激素，放療化療，各種惡性腫瘤、糖尿病、AIDS等可誘發(fā)曲霉病。曲霉可侵犯許多部位，呼吸系統(tǒng)曲霉病主要有三種：過敏型、曲霉球和

29、肺炎。全身性曲霉病多發(fā)生敗血癥，危及生命。曲霉產(chǎn)生黃曲霉毒素、雜色曲霉毒素與原發(fā)性肝癌有關(guān)。,微生物特性,由分生孢子頭和足細(xì)胞兩部分組成特征性結(jié)構(gòu)。分子孢子頭包括分生孢梗莖、頂囊、瓶梗、梗基和分生孢子鏈。足細(xì)胞為特化的厚壁膨大的菌絲細(xì)胞。向上形成孢梗莖。,微生物檢驗(yàn),(1)直接顯微鏡檢查：取痰液等被檢材料涂 于載玻片上，在鏡下可見分枝的菌絲、 較粗的分生孢子頭，頂端膨大形成頂囊， 頂囊上有小梗，小梗上有許多小

30、分生孢 子。,(2)抗原檢測(cè)：用競(jìng)爭性ELISA測(cè)定病人血 清中曲霉抗原。(3)分離培養(yǎng)與鑒定 標(biāo)本接種沙氏瓊脂， 室溫培養(yǎng)后菌落形成快，呈毛狀，一般 為黃綠色。將菌落涂片鏡檢可見特征性 的分子孢子頭和足細(xì)胞。,(4)藥物敏感試驗(yàn) 對(duì)制霉菌素和兩性霉素B 敏感。(5)抗體檢測(cè) 檢測(cè)病人血清中抗曲霉抗體。 常用免疫擴(kuò)散檢測(cè)，其敏感性和特異性 較高，也可用對(duì)流免疫電

31、泳、ELISA、 生物素—親和素聯(lián)免疫吸附測(cè)定(BALISA)、 放射免疫測(cè)定(R1A)及間接免疫熒光法等。 菌絲和培養(yǎng)濾液可作ELISA抗原。,(6)皮膚試驗(yàn) 對(duì)過敏性支氣管肺炎病人可 用曲霉抗原提取液作皮試。 Ⅰ型超敏反應(yīng)在 15-20min發(fā)生陽性反應(yīng)。 Ⅱ型超敏反應(yīng)在4-10h出現(xiàn)陽性反應(yīng)。 Ⅳ型超敏反應(yīng)可出現(xiàn)于超敏反應(yīng)型肺炎病人。,四、毛霉,引起毛霉病的病原菌，以根霉屬最

32、為常見，尤其是少根根霉和米根霉兩種最多見。,毛霉病是一種發(fā)病急，進(jìn)展快、病死率極高的系統(tǒng)性條件致病性真菌感染。尤其是慢性消耗性疾病如糖尿病、白血病、長期應(yīng)用化療、皮質(zhì)類固醇激素的患者。臨床上常見的是眼眶及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毛霉病。起初多發(fā)于鼻粘膜或鼻竇，繼則眼眶軟組織及腦，也可全身性播散，預(yù)后較為嚴(yán)重。常在病死后尸檢才明確。,微生物特性,有無隔菌絲，在一些陳舊培養(yǎng)基中偶見有隔菌絲。有些霉菌有匍匐菌絲，在培養(yǎng)基表面橫向生長，其產(chǎn)生的假根伸入培

33、養(yǎng)基內(nèi)，孢囊梗與假根對(duì)生，在孢囊梗頂端形成孢子囊，內(nèi)生孢子囊孢子。,微生物檢驗(yàn),（1）直接鏡檢 取皮屑、膿液、血液、痰、鼻 竇抽取物等標(biāo)本，用20%KOH制成濕片， 直接鏡檢可見折光性強(qiáng)的粗大菌絲，直 徑6～15μm，無隔或少數(shù)分隔、壁薄、 偶見孢子囊及孢子囊梗。,(２)分離培養(yǎng),將臨床標(biāo)本接種于不含放線菌酮的麥芽糖培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基及沙氏瓊脂培養(yǎng)基，

34、25℃或37℃培養(yǎng)，毛霉生長較快，初起菌落表面呈棉花樣、白色，漸變?yōu)榛液稚?，頂端有黑色小點(diǎn)。鏡檢菌絲無隔或極少分隔，孢囊梗直接由菌絲長出，常單生，分枝或極少不分枝。因毛霉常污染環(huán)境，故直接鏡檢較培養(yǎng)更有意義。,鑒定,依據(jù)是菌落形態(tài)、色澤。分枝狀態(tài)：有無結(jié)合孢子及結(jié)合孢子的特點(diǎn)。孢子囊的形態(tài)，有無囊軸、囊領(lǐng)和囊托。生長溫度，有無厚壁孢子等 。,1)少根根霉：生長快，在37℃～40℃能生長。菌落初為白色，后變?yōu)榛液稚?。鏡檢見匍匐

35、菌絲和假根。孢囊梗單生或分枝，淡褐色或黃褐色，常從菌絲膨脹處生出。囊軸卵圓形或球形，無色或淡黃色。孢囊孢子圓形，表面有棘刺。偶有厚壁孢子。,2)米根霉：菌落同少根根霉。鏡檢見孢囊梗單生或分枝，孢子囊孢子淡褐色有條紋，形態(tài)不規(guī)則。假根發(fā)達(dá)。厚壁孢子極多。在室溫及40℃均可生長。,3)總狀毛霉：生長迅速，菌落呈毛狀，高可達(dá)1cm，灰色疏松。鏡檢見孢囊梗最初不分枝，以后不規(guī)則分枝。孢子囊球形，淡黃色。成熟時(shí)孢囊壁消解，囊軸球形。孢囊孢子卵形。

36、,4)傘梨頭霉：異名為傘狀毛霉。菌落呈毛狀、生長快，數(shù)日可長滿斜面和瓊脂平板。菌落粗糙，初為白色，后變?yōu)榈{(lán)灰色，背面深灰至黃綠色。孢囊梗長并呈傘形分枝，孢子囊灰色，囊軸圓形光滑，有囊托。孢囊孢子近球形，表面光滑。無厚壁孢子。,3．藥物敏感試驗(yàn) 對(duì)兩性霉素B敏感，靜 脈滴注療效較好。4．抗體檢測(cè) 用瓊脂雙擴(kuò)散、ELISA法檢 測(cè)病人體內(nèi)特異性抗體。即用勻漿抗原 檢測(cè)毛霉抗體的敏感性和特異性都較高

37、。 也可用免疫熒光技術(shù)在組織切片中檢測(cè) 和鑒定毛霉。,五、組織胞漿菌,有莢膜組織胞漿菌和杜波組織胞漿菌兩個(gè)種。 主要侵犯網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，莢膜組織胞漿菌引起：①原發(fā)急性型組織胞漿菌病，僅皮膚試驗(yàn)陽性。②慢性空洞型，引起肺損害，常被誤診為肺結(jié) 核。③嚴(yán)重播散型，全身器官均可損傷，預(yù)后嚴(yán)重。 淋巴瘤、白血病、霍奇金病、AIDS或用腎上 腺皮質(zhì)激素治療者常可感染本菌。,微生物特性,組織胞漿菌

38、是一種雙相型真菌，在25℃培養(yǎng)時(shí)呈典型菌絲體，在37℃培養(yǎng)時(shí)為酵母型，位于細(xì)胞內(nèi)或外。卵圓形，直徑為2～4μm、芽生孢子，一端較尖，一端較圓，自細(xì)，有莢膜。杜波組織胞漿菌圓形，直徑為12～15μm、薄壁的芽生孢子。,微生物檢驗(yàn),(1)標(biāo)本直接顯微鏡檢查　痰液標(biāo)本涂片后先用甲醇固定10 min，再用 姬姆薩染色鏡檢，如巨噬細(xì)胞發(fā)現(xiàn)卵圓形， 直徑2～4μm的較小，一端有出芽，可疑為 莢膜組織胞漿菌?！∑?/p>

39、損、膿液標(biāo)本，用20％KOH涂片后鏡檢， 可見12-15μm直徑的厚壁酵母細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi) 可見脂肪小滴，可疑為杜波組織胞漿菌。,(2)抗原檢測(cè),取患者痰液作免疫熒光法染色后鏡檢，可快速檢測(cè)其抗原，但特異性差，僅作組織胞漿菌初篩試驗(yàn)。,(3)分離培養(yǎng),將臨床標(biāo)本接種于含抗生素的沙氏培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)，生長緩慢，4～6周才開始生長，逐漸形成白色至棕色絨毛狀菌落。當(dāng)轉(zhuǎn)種于血瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃很快形成酵母型菌落。

40、,(4)鑒定,取可疑菌落涂片染色鏡檢，并作脲酶試驗(yàn)和明膠液化試驗(yàn)。莢膜組織胞漿菌分解尿素；而杜波組織胞漿菌不分解尿素，在24～96h內(nèi)可液化明膠，而莢膜組織胞漿菌則否。,(5)藥物敏感試驗(yàn) 組織胞漿菌對(duì)兩性霉素B、酮 康唑、伊曲康唑敏感。(6)抗體檢測(cè)血清中組織胞漿菌抗體，以補(bǔ)體結(jié) 合試驗(yàn)的敏感性和特異性最高，發(fā)病2-3周陽 性率可達(dá)90％，有判定頂后價(jià)值。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的抗體效價(jià)在１：32以上為陽性

41、， 抗體效價(jià)4倍增長，可有助于確診。乳膠凝集試驗(yàn)時(shí)，抗體效價(jià)為1：32時(shí)可確診。,六、卡氏肺孢菌,曾稱為卡氏肺孢子蟲。分類還存在一些爭議。已往大多數(shù)學(xué)者依據(jù)抗原蟲藥有效和具有孢囊、滋養(yǎng)體兩種形態(tài)，認(rèn)為應(yīng)屬于原蟲。近來分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，卡氏肺孢子蟲線粒體的16s和5s核糖體RNA的核苷酸序列與真菌有更多的同源性，染色特性也類似真菌，應(yīng)歸屬于真菌。,卡氏肺孢菌廣泛分布于自然界，主要是空氣傳播，在健康人體內(nèi)，多為無癥狀的隱性感染

42、。當(dāng)宿主免疫力下降，潛伏的卡氏肺孢菌在病人肺內(nèi)大量繁殖擴(kuò)散，使肺泡上皮細(xì)胞受損，導(dǎo)致間質(zhì)性漿細(xì)胞肺炎，又稱卡氏肺孢菌性肺炎, 是AIDS最常見、最嚴(yán)重的機(jī)會(huì)感染性疾病，病死率高達(dá)70％—100％。,微生物特性,生活史有包囊和滋養(yǎng)體兩種形態(tài)。滋養(yǎng)體壁較薄，單個(gè)核，形態(tài)不規(guī)則，直徑2～5μm，姬氏染色后胞質(zhì)呈藍(lán)色，核呈紫紅色。包囊為感染型，滋養(yǎng)體為繁殖型，呈二分裂法繁殖。,包囊分為成熟包囊和未成熟包囊，前者壁較厚，直徑6～8μm，呈球形

43、，內(nèi)含8個(gè)囊內(nèi)小體，大小1～1.5μm，呈球形排列規(guī)則或不規(guī)則單個(gè)核；后者一般呈橢圓形，3～5μm，囊內(nèi)核 1～8個(gè)。,微生物檢驗(yàn),(1) 標(biāo)本直接顯微鏡檢查 收集病人痰液和纖維支氣管鏡取材，涂 片姬氏染色后鏡檢，可見包囊內(nèi)的8個(gè) 囊內(nèi)小體，胞質(zhì)呈淺藍(lán)色，核1個(gè)呈紫 紅色。,(2)抗原檢測(cè)：用單克隆抗體來檢測(cè)病人血 清中卡氏肺孢菌抗原，有較好的敏感性 和特異性。(3)核酸