生物化學(xué)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能

1、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能,第 一 章,Structure and Function of Protein,蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(amino acids)通過(guò)肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。,蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性,1. 蛋白質(zhì)是生物體的重要組成成分2. 蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能　1）作為生物催化劑　2）代謝調(diào)節(jié)作用　3）免疫保護(hù)作用　4）物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和存儲(chǔ)　5）運(yùn)動(dòng)與支持作用　6）參與

2、細(xì)胞間信息傳遞3. 氧化供能,蛋白質(zhì)的分子組成The Molecular Component of Protein,第 一 節(jié),? 蛋白質(zhì)的元素組成,主要有C、H、O、N和S。 有些蛋白質(zhì)含有少量P或金屬元素Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Mo，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有 I 。,蛋白質(zhì)的含氮量平均為16％。,通過(guò)樣品含氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量的公式：,蛋白質(zhì)含量 ( g % ) = 含氮量( g % ) × 6.25,? 蛋白

3、質(zhì)元素組成的特點(diǎn),一、氨基酸 ——蛋白質(zhì)的基本組成單位,存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種，且均屬 L-?-氨基酸（甘氨酸除外）。,非極性疏水性氨基酸極性中性氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸,（一）氨基酸的分類(lèi),非極性疏水性氨基酸,2. 極性中性氨基酸,3. 酸性氨基酸,4. 堿性氨基酸,,習(xí)慣分類(lèi)方法芳香族氨基酸：Trp、Tyr、Phe含羥基氨基酸：Ser、Thr、Tyr含硫氨基酸：Cy

4、s、Met雜環(huán)族氨基酸：His雜環(huán)族亞氨基酸：Pro支鏈氨基酸：Val、Leu、Ile,,幾種特殊氨基酸Gly：無(wú)手性碳原子。Pro：為環(huán)狀亞氨基酸。Cys：可形成二硫鍵。,修飾氨基酸：　　蛋白質(zhì)合成后通過(guò)修飾加工生成的氨基酸。沒(méi)有相應(yīng)的編碼。如：胱氨酸、羥脯氨酸（Hyp）、羥賴氨酸（Hyl）。非生蛋白氨基酸：　　蛋白質(zhì)中不存在的氨基酸。如：瓜氨酸、鳥(niǎo)氨酸、同型半胱氨酸，是代謝途徑中產(chǎn)生的。,（二）氨基酸的理化性質(zhì),

5、1. 兩性解離及等電點(diǎn),2. 紫外吸收,3. 茚三酮反應(yīng),氨基酸的解離,氨基酸的等電點(diǎn),當(dāng)溶液為某一pH值時(shí)，AA主要以兼性離子的形式存在，分子中所含的正負(fù)電荷數(shù)目相等，凈電荷為0。這一pH值即為AA的等電點(diǎn)（pI）。在pI時(shí)，AA在電場(chǎng)中既不向正極也不向負(fù)極移動(dòng)，即處于兩性離子狀態(tài)。,Ka1*Ka2=……,側(cè)鏈不含離解基團(tuán)的中性AApI = (pK’1 + pK’2 )/2,甘氨酸滴定曲線,對(duì)于側(cè)鏈含有可解離基團(tuán)的AApI取決于

6、兩性離子兩邊pK’值的算術(shù)平均值酸性AA：pI = (pK’1 + pK’R-COO- )/2 堿性AA：pI = (pK’2 + pK’R-NH2 )/2,氨基酸的光譜性質(zhì),可見(jiàn)光區(qū)：無(wú)吸收遠(yuǎn)紫外和紅外區(qū)：都吸收近紫外區(qū)（200—400nm）：Tyr/Trp/Phe 原因：-C=C-C=C-C=C-C=C-,紫外吸收光譜,Trp 280nmTyr 275nmPhe 257nm,蛋白質(zhì)含量測(cè)定,280nm,弱酸

7、 加熱,與茚三酮生成藍(lán)紫色化合物,二、肽,* 肽鍵(peptide bond)：是由一個(gè)氨基酸的?-羧基與另一個(gè)氨基酸的?-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。,（一）肽(peptide),+,,,甘氨酰甘氨酸,肽鍵,,肽鍵有部分雙鍵性質(zhì),肽鍵由于共振而具有部分雙鍵性質(zhì)，因此， 肽鍵比一般C-N鍵短，且不能自由旋轉(zhuǎn) 肽鍵原子及相鄰的a碳原子組成肽平面 相鄰的a碳原子呈反式構(gòu)型,肽鍵比一般C-N鍵短,肽鍵為一平面,相鄰的a碳原子呈反式構(gòu)

8、型,* 肽是由氨基酸通過(guò)肽鍵縮合而形成的化合物。,* 兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽……,* 肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。,* 由十個(gè)以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。,N 末端：多肽鏈中有自由氨基的一端C 末端：多肽鏈中有自由羧基的一端,多肽鏈有兩端,* 多肽鏈(polypep

9、tide chain)是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu)。,多肽鏈,,多肽鏈,N末端,C末端,牛核糖核酸酶,（二） 幾種生物活性肽,1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH),結(jié)構(gòu):,谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的三肽谷氨酸的?-羧基形成肽鍵－SH為活性基團(tuán)為酸性肽是體內(nèi)重要的還原劑,GSH過(guò)氧化物酶,GSH還原酶,NADPH+H+,NADP+,主要功能:,肽類(lèi)激素：如促甲狀腺素釋放激素（TRH）,神經(jīng)肽(neu

10、ropeptide),2. 肽類(lèi)激素及神經(jīng)肽,蛋 白 質(zhì) 的 分 子 結(jié) 構(gòu)The Molecular Structure of Protein,第 二 節(jié),蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括： 一級(jí)結(jié)構(gòu) (primary structure)二級(jí)結(jié)構(gòu) (secondary structure)三級(jí)結(jié)構(gòu) (tertiary structure)四級(jí)結(jié)構(gòu) (quaternary structure),定義：蛋白質(zhì)的

11、一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序。,一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),主要化學(xué)鍵：肽鍵　　二硫鍵的位置屬于一級(jí)結(jié)構(gòu)研究范疇。,一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。,胰島素的一級(jí)結(jié)構(gòu),,30,21,二、蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對(duì)空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。,定義：,穩(wěn)定因素： 氫鍵,（一）肽單元 (peptide unit),參與組成肽鍵的6個(gè)原子位于同一平面，又

12、叫酰胺平面或肽鍵平面。它是蛋白質(zhì)構(gòu)象的基本結(jié)構(gòu)單位。,,肽單元,H,H,H,H,蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要形式,?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折疊 ( ?-pleated sheet ) ?-轉(zhuǎn)角 ( ?-turn ) 無(wú)規(guī)卷曲 ( random coil ),（二） ?-螺旋,?-螺旋結(jié)構(gòu)要點(diǎn): ①多肽鏈主鏈圍繞中心軸形成右手螺旋，側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)。 ②每圈螺旋含3.6個(gè)氨基酸，螺距為0.54nm。 ③

13、每個(gè)肽鍵的亞氨氫和第四個(gè)肽鍵的羰基氧形成的氫鍵保持螺旋穩(wěn)定。氫鍵與螺旋長(zhǎng)軸基本平行。,（三）?-折疊,①多肽鏈充分伸展，相鄰肽單元之間折疊成鋸齒狀結(jié)構(gòu)，側(cè)鏈位于鋸齒結(jié)構(gòu)的上下方。 ②兩段以上的β -折疊結(jié)構(gòu)平行排列 ，兩鏈間可順向平行，也可反向平行 。③兩鏈間的肽鍵之間形成氫鍵，以穩(wěn)固β -折疊結(jié)構(gòu)。氫鍵與螺旋長(zhǎng)軸垂直。,（四）?-轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲,?-轉(zhuǎn)角：,無(wú)規(guī)卷曲：沒(méi)有確定規(guī)律性的肽鏈結(jié)構(gòu)。,① 肽鏈內(nèi)形成180º回折

14、。②含4個(gè)氨基酸殘基，第一個(gè)氨基酸殘基與第四個(gè)形成氫鍵。③ 第二個(gè)氨基酸殘基常為Pro。,?-轉(zhuǎn)角：,超二級(jí)結(jié)構(gòu)(supersecondary structure) 超二級(jí)結(jié)構(gòu)：是指在多肽鏈內(nèi)順序上相互靠近的二級(jí)結(jié)構(gòu)常常在空間折疊中彼此相互作用，形成規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)聚合體。它是蛋白質(zhì)構(gòu)象中二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)之間的一個(gè)層次，故稱超二級(jí)結(jié)構(gòu)。通常類(lèi)型有： 1、?? 2、??

15、 3、???,,?? ?? ???,,（五）模體,蛋白質(zhì)分子中，二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)具有特殊功能的空間構(gòu)象，被稱為模體(motif)。,螺旋－環(huán)－螺旋,鋅指,,（六）影響二級(jí)結(jié)構(gòu)形成的因素,氨基酸側(cè)鏈所帶電荷 、大小及形狀。,影響α-螺旋形成的因素：,β -折疊形成條件：　　要求氨基酸側(cè)鏈較小。,三、蛋白

16、質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu),疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 Van der Waals力等。,穩(wěn)定因素：,整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。,定義,肌紅蛋白 (Mb),,纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)域,結(jié)構(gòu)域 (domain),大分子蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)?？煞指畛梢粋€(gè)或數(shù)個(gè)球狀或纖維狀的區(qū)域，折疊得較為緊密，各行其功能，稱為結(jié)構(gòu)域。,結(jié)構(gòu)域約含100-200個(gè)氨基酸殘基，各自有獨(dú)特的空間夠象，并承擔(dān)不同的生物學(xué)功能。,輕鏈,抗體

17、分子中結(jié)構(gòu)域示意圖,重鏈,四種類(lèi)型結(jié)構(gòu)域示意圖,反平行?,反平行?,平行?/ ?,小的不規(guī)則結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)域,,Triose phosphate isomerase,分子伴侶 (chaperon),通過(guò)提供一個(gè)保護(hù)環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu)的一類(lèi)蛋白質(zhì)。,* 可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合隨后松開(kāi)，如此重復(fù)進(jìn)行可使肽鏈正確折疊。,* 與錯(cuò)誤聚集的肽段結(jié)合，誘導(dǎo)其正確折疊。,* 對(duì)蛋白質(zhì)分子中二硫鍵的正確形成起重要的作用

18、。,作用：,亞基之間的結(jié)合力主要是氫鍵和離子鍵。,四、蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。,每條具有完整三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈，稱為亞基 (subunit)。,血紅蛋白（Hb）的四級(jí)結(jié)構(gòu),,從一級(jí)結(jié)構(gòu)到四級(jí)結(jié)構(gòu),血紅蛋白,蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是它的氨基酸序列,蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)是由氫鍵導(dǎo)致的肽鏈卷曲與折疊,Primarystructure,Secondarystructure,蛋白

19、質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)是多肽鏈自然形成的三維結(jié)構(gòu),蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)是亞基的空間排列,Polypeptide(single subunitof transthyretin),Transthyretin, with fouridentical polypeptide subunits,Tertiarystructure,Quaternarystructure,五、蛋白質(zhì)的分類(lèi),* 根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分,* 根據(jù)蛋白質(zhì)形狀,雙向電泳,六、蛋白質(zhì)

20、組學(xué)二維電泳,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系The Relation of Structure and Function of Protein,第 三 節(jié),（一）一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ),一、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,,天然狀態(tài)，有催化活性,尿素、β-巰基乙醇,,去除尿素、β-巰基乙醇,非折疊狀態(tài)，無(wú)活性,,（二）一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血,這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病，稱為“分子病”。,,,,,,,,,,,,,,

21、,,,,,,,,狗人猴,馬騾,鯨 兔豬,袋鼠,企鵝,雞 鴨,響尾蛇,龜,蒼蠅 蛾,脈孢菌屬,念珠菌屬,面包酵母菌,小麥,牛 蛙,金槍魚(yú),動(dòng) 物,爬行動(dòng)物,兩棲動(dòng)物,,魚(yú),哺乳動(dòng)物,鳥(niǎo),昆 蟲(chóng),植 物,脊椎動(dòng)物,從細(xì)胞色素C的一級(jí)結(jié)構(gòu)看生物進(jìn)化,（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu),二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度

22、變化而改變。,（二）血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧,肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線,* 協(xié)同效應(yīng)(cooperativity),一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。 促進(jìn)作用稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity)抑制作用稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative cooperativity),,,血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變小

23、，就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動(dòng)。,變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect),凡蛋白質(zhì)（或亞基）因與某小分子物質(zhì)相互作用而發(fā)生構(gòu)象變化，導(dǎo)致蛋白質(zhì)（或亞基）功能的變化，稱為蛋白質(zhì)的變構(gòu)效應(yīng)。,（三）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變與疾病,蛋白質(zhì)構(gòu)象?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤，盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生。,蛋白質(zhì)構(gòu)象病的機(jī)理：有些蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣

24、纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。,這類(lèi)疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。,瘋牛病瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。,PrPcα-螺旋,PrPscβ-折疊,正常,瘋牛病,,第四節(jié),蛋白質(zhì)的理化性

25、質(zhì)與分離純化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein,（一）蛋白質(zhì)的兩性電離,一、理化性質(zhì),蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。,蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)( isoelectric point, pI) 　　當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)

26、解離成正、負(fù)離子的趨勢(shì)相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。,利用蛋白質(zhì)兩性電離的性質(zhì)，可通過(guò)電泳、離子交換層析、等電聚焦等技術(shù)分離蛋白質(zhì)。,（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì),蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬(wàn)至100萬(wàn)之巨，其分子的直徑可達(dá)1～100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。,* 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素顆粒表面電荷水化膜,水化膜,溶液中蛋白質(zhì)的聚沉,（三）蛋白質(zhì)的變性、沉淀和凝固,* 蛋白質(zhì)的變性(denatu

27、ration)　　在某些物理和化學(xué)因素作用下，蛋白質(zhì)分子的特定空間構(gòu)象被破壞，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。,造成變性的因素：如加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。,應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來(lái)消毒及滅菌。防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。,蛋白質(zhì)變性后的性質(zhì)改變：　　溶解度降低、粘度增加、結(jié)晶能力消失、生物活性喪失及易受蛋白酶水解。,若蛋白質(zhì)變性程度較輕

28、，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性。,復(fù)性(renaturation),天然狀態(tài)，有催化活性,尿素、β-巰基乙醇,,去除尿素、β-巰基乙醇,非折疊狀態(tài)，無(wú)活性,,* 蛋白質(zhì)沉淀　　在一定條件下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽鏈融會(huì)相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀，但并不變性。,* 蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation) 　　蛋白質(zhì)變性后

29、的絮狀物加熱可變成比較堅(jiān)固的凝塊，此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中。,（四）蛋白質(zhì)的紫外吸收,由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長(zhǎng)處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測(cè)定。,（五）蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng),⒈茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction) 蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。,⒉雙縮脲反應(yīng)(biuret reaction)蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在

30、稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。,二、蛋白質(zhì)的分離和純化,（一）透析及超濾法,* 透析(dialysis)：利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開(kāi)的方法。,* 超濾法：應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過(guò)有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。,（二）丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀,*使用丙酮沉淀時(shí)，必須在0～4℃低溫下進(jìn)行，丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白

31、質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。,*鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。,*免疫沉淀法：　　　將某一純化蛋白質(zhì)免疫動(dòng)物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白，并形成抗原抗體復(fù)合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。,（三）電泳,蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在

32、電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng)。這種通過(guò)蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù), 稱為電泳(elctrophoresis) 。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。,幾種重要的蛋白質(zhì)電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：常用于蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定。*等電聚焦電泳：通過(guò)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。*雙向凝膠電泳：是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。,（四）層析,層析(chromatography)分離蛋白質(zhì)的原理

33、待分離蛋白質(zhì)溶液（流動(dòng)相）經(jīng)過(guò)一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 。,蛋白質(zhì)分離常用的層析方法* 離子交換層析：利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。* 凝膠過(guò)濾(gel filtration)又稱分子篩層析：利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離。,（五）超速離心,* 超速離心法(ultracentrifug

34、ation)既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。,*蛋白質(zhì)在離心場(chǎng)中的行為用沉降系數(shù)(sedimentation coefficient, S)表示,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的密度和形狀相關(guān) 。,三、多肽鏈中氨基酸序列分析,1. 分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成,2. 測(cè)定多肽鏈的N端與C端的氨基酸殘基,3. 把肽鏈水解成片段，分別進(jìn)行分析,4. 測(cè)定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用Edman降解法,5. 經(jīng)過(guò)組合排列對(duì)比，最