基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)動物實驗技術(shù)研2017

1、動物實驗研究中動物選擇的基本原則,選擇實驗動物的原則一、相似性原則二、特異性原則三、適宜規(guī)格的原則四、標(biāo)準(zhǔn)化原則五、經(jīng)濟易獲性原則六、借鑒與法規(guī),一、相似性原則 盡量選用與人體結(jié)構(gòu)、功能、代謝及疾病特征相似的動物。 目的：對動物和人類疾病進行類比研究，解決人類疾病的預(yù)防和治療問題。因此，動物的進化程度在選擇實驗動物時應(yīng)是首先考慮的問題。,兩基因組的DNA序列相似性達99%；基因相似程度達到96%；人類只

2、比黑猩猩多50個特殊基因。,,,,從進化的角度看，非人靈長類動物與人最為近似。分析顯示黑猩猩與人類基因相似程度達到96% (2005. 9.2)。,人和實驗動物在解剖、生理及代謝方面的相似點,,,建立人類疾病動物模型，可以下面幾個方面將實驗動物與人進行比較：1.結(jié)構(gòu)和功能的相似性2.年齡狀態(tài)的相似性3.生態(tài)或健康狀況的相似性4.疾病特點的相似性5.操作實感的相似性,二、標(biāo)準(zhǔn)化原則 盡量選用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的實驗動物,標(biāo)準(zhǔn)化動

3、物系遺傳背景明確，具有已知菌叢和模型性狀顯著且穩(wěn)定的動物。實驗動物質(zhì)量合格證，是標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物的標(biāo)志。,動物購買： 具有動物生產(chǎn)和質(zhì)量合格證的單位。,,三、特異性原則1 盡量選用解剖、生理特點符合實驗?zāi)康囊蟮膭游铮潜ＷC實驗成功的關(guān)鍵因素。很多實驗動物具有某些解剖生理特點，為實驗所要觀察的器官或組織等提供了很多的便利條件，如能適當(dāng)使用，將減少實驗準(zhǔn)備方面的麻煩，降低操作難度，使實驗容易成功。,家犬的甲狀旁腺位于甲

4、狀腺的表面，位置比較固定，大多數(shù)在兩個甲狀腺相對應(yīng)的兩端上. 家兔的甲狀旁腺分布比較散，位置不固定，除甲狀腺周圍外，有的甚至分布到主動脈弓附近，因此做甲狀旁腺摘除實驗，應(yīng)選用家犬而不能選用兔。,家兔頸部最粗、白色的為迷走神經(jīng)，中間最細(xì)的為減壓神經(jīng)，較細(xì)、呈灰白色的為交感神經(jīng)，它們是分別存在、獨自行走的。而馬、牛、豬、犬、貓、蛙等其他動物的 減壓神經(jīng)并不單獨行走，而是行走于迷走、交感干，或迷走神經(jīng)之中。因此要觀察減壓神經(jīng)對心臟的作

5、用時，就必須選用家兔。,,家兔胸腔內(nèi)構(gòu)造與其它動物不同，胸腔中央由縱膈連于頂壁、底壁及后壁之間將胸腔分為左右兩部，互不相通，縱膈由膈胸膜和縱膈胸膜兩層縱膈膜組成。肺被肋胸膜和肺胸膜膈開，心臟又被心包胸膜隔開。因此，開胸后打開心包胸膜暴露心臟進行實驗操作時，只要不弄破縱隔膜，動物不需要作人工呼吸。貓、狗等其他動物開胸后一定要作人工呼吸，才能進行心臟操作。,,長爪沙鼠腦底動脈環(huán)后交通支缺損，沒有聯(lián)系頸內(nèi)動脈系統(tǒng)和椎底動脈系統(tǒng)的后交通動

6、脈，不能構(gòu)成Willis動脈環(huán)，是復(fù)制腦缺血動物模型的首選動物。,2 充分利用不同品系實驗動物存在的某些特殊反應(yīng),不同種系實驗動物對同一因素的反應(yīng)往往是相似的，即共同性，但也有特殊反應(yīng)，有特殊性。家兔對體溫變化十分敏感——發(fā)熱、解熱和檢查致熱原等實驗研究。小鼠和大鼠體溫調(diào)節(jié)不穩(wěn)定，不宜選用；家兔對放射線十分敏感，發(fā)生休克，常選用小鼠、大鼠、犬和猴等。鴿子、家犬、猴和貓的嘔吐反應(yīng)敏感——適宜做嘔吐實驗。家兔、豚鼠等草食動物嘔吐反應(yīng)不

7、敏感，小鼠和大鼠無嘔吐反應(yīng)。豚鼠易于過敏——過敏性實驗研究。,1、年 齡 不同品種（品系）的實驗動物其壽命各不相同，年齡不同，生物學(xué)特性不同，受到外界因素作用時，可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)。 如果對狗和小鼠均觀察一年，所反應(yīng)的發(fā)育過程是不同的；即使同樣是狗，不同的年齡階段所得的實驗數(shù)據(jù)也不盡相同。 一般實驗應(yīng)該選擇性成熟的青壯年動物為宜。幼齡動物的某些功能尚不完善，而老年動物的各系統(tǒng)功能和代謝作用均下降，除特殊試驗外（如老年醫(yī)學(xué)研究

8、），也不宜選用。,四、適宜規(guī)格的原則,實驗動物年齡與體重一般呈正相關(guān)，可按體重推算年齡。例如KM小鼠6周齡時雄性約為32g，雌性28g；Wistar大鼠雄性約為180g，雌性160g。 一般來說，選擇的實驗動物年齡、體重應(yīng)盡可能一致，若相差懸殊，則易增加動物反應(yīng)的個體差異，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。 不同品種、品系的動物都有各自的生長曲線，如大小鼠，同齡而不同品種、品系，其體重有差異。42天　Wistar

9、 雄性 187g 雌性 166g　SD 雄性 206g 雌性 172g,2、體 重,3、性 別性別不同，對實驗的敏感程度也不同。如用戊巴比妥鈉麻醉大鼠，雌性動物的敏感性是雄性動物的2.5～3.8倍；雌性小鼠對四環(huán)素毒素的耐受力低于雄鼠。 一般來說，若對實驗動物性別無特殊要求，則宜選用雌雄各半，以避免因性別差異所造成的結(jié)果誤差。,,,,4、生理狀況 動物如果懷

10、孕、哺乳、換毛等，對實驗結(jié)果影響很 大，因此實驗不宜選用處于特殊生理狀態(tài)下的動物進行。 家兔有年齡性換毛和季節(jié)性換毛，每年的4～5月和9～10月為季節(jié)性換毛。年齡性換毛有兩次，出生100天時第一次，5月齡時第二次。換毛時家兔的抵抗力最差，尤其是第二次年齡性換毛時更差。 在實驗過程中發(fā)現(xiàn)動物懷孕，則體重及某些生理、生化指標(biāo)均可受到嚴(yán)重影響，有時應(yīng)將懷孕動物剔除。,不同藥物或化合物，在不同種系動物上引起的反應(yīng)是有很大差異的。

11、這些在選擇實驗動物時必須加以注意。,實驗動物對某些藥物反應(yīng) 的差異,雌激素 能終止大鼠、小鼠妊娠 但不能終止人的妊娠嗎 啡 對犬、兔、猴、大鼠、人 中樞抑制 對小鼠、貓有興奮 安妥明（降血脂藥）使家犬下肢癱瘓 對其它動物無此副作用鶴草酚（驅(qū)蟲藥） 使家犬失明 對猴無此

12、副作用苯 引起家兔白細(xì)胞減少 狗白細(xì)胞增多苯胺及其衍生物 引起犬、貓、豚鼠與人相似的病理變化－變性血紅蛋白，對家兔則不易引起，對鼠則完全不產(chǎn)生。,5、品種、品系的不同,五、經(jīng)濟易獲性原則 盡量選用結(jié)構(gòu)與功能簡單又能反映研究指標(biāo)的動物,復(fù)制動物模型時，在條件允許的情況下，盡量考慮與人相似、進化程度高的動物作模型。但不能因此就認(rèn)為進化程度越高等的動物其所有器官和

13、功能越接近人類。動脈粥樣硬化：非人靈長類，病變部位經(jīng)常在小動脈，與人類分布不同；鴿子作模型，胸主動脈出現(xiàn)的黃斑面積可達10%，鏡下變化與人也較相似。果蠅具有生活史短（12天），飼養(yǎng)簡便，染色體少（4對），唾液腺染色體制作容易等優(yōu)點，是遺傳學(xué)研究的絕好材料。,不應(yīng)一味追求進化程度高的動物，進化程度高或結(jié)構(gòu)功能復(fù)雜的動物有時會給實驗條件的控制和實驗結(jié)果的獲得帶來難以預(yù)料的困難。除了經(jīng)費開支之外，還會影響試驗的周期。在不影響實驗結(jié)果正確性

14、的前提下，盡量選用結(jié)構(gòu)功能相似又能反映研究指標(biāo)、易獲得、最經(jīng)濟、最易飼養(yǎng)管理的動物。,六、借鑒與法規(guī),充分查閱與課題相關(guān)的實驗動物及動物實驗兩方面的文獻。了解本領(lǐng)域、本項目以往使用實驗動物情況和研究成果。科研的創(chuàng)新并不是不要前人的東西，相反，前人在科研、生產(chǎn)等方面總結(jié)的經(jīng)驗，是科學(xué)工作者實踐和智慧的結(jié)晶。充分利用前人的成果，可以避免重復(fù)研究。 例如C57BL小鼠常用于Lewis肺癌和B16黑色素瘤的移植，DBA/2常用于P388

15、和L1210淋巴細(xì)胞白血病的研究，BALB／c小鼠常用來制備單克隆抗體。,,充分考慮有關(guān)實驗動物政策法規(guī)及倫理道德問題,我國制定了關(guān)于實驗動物和動物實驗方面的政策、法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。國際上要求動物實驗達到良好實驗室操作規(guī)范（GLP）和標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），對實驗動物選擇和應(yīng)用、實驗室條件、工作人員素質(zhì)、技術(shù)水平和操作方法都要求標(biāo)準(zhǔn)化?！?R”原則：目前在國內(nèi)外已被普遍關(guān)注和接受，它不但體現(xiàn)了對于實驗動物的愛惜、保護和倫理道德，同

16、時也體現(xiàn)了科學(xué)地進行動物實驗的觀念。,第十章 動物實驗基本技術(shù) 實驗動物學(xué)部 鄭龍,一、動物實驗前的準(zhǔn)備,（一） 嚴(yán)格遵守“3R”原則（二） 完善實驗設(shè)計（三）動物實驗室的選擇（四）實驗動物的購買（五）飼料、墊料、飲水的準(zhǔn)備,1,24,動物實驗方法是多種多樣的，在生物醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域內(nèi)都有其不同的應(yīng)用，其中一些基本方法都是共性的，如動物的抓取、固定、麻醉、脫毛、給藥、采血、處死等，不管是從事何種課題的生物醫(yī)學(xué)研

17、究都要用這套基本方法。,實驗動物的抓取與固定實驗動物的編號和分組實驗動物的麻醉方法實驗動物的除毛、給藥方法實驗動物的采血法實驗動物的處死動物尸體及廢棄物的無害化處理動物實驗中應(yīng)注意的問題,二、動物實驗基本技術(shù),第一節(jié) 實驗動物的抓取與固定,小鼠大鼠豚鼠兔犬豬蟾蜍猴,一、小鼠抓取固定方法 抓取時先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒炁_向后拉，在其向前爬行時，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚

18、。以無名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。,二、大鼠的抓取固定方法抓取時為避免咬傷，可帶上帆布手套。用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指緊捏鼠背皮膚，置于左掌心中，這樣右手即可進行各種實驗操作。,大鼠的抓取也可伸開左手之虎口，迅速將拇指、食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身體中段，并將其保持仰臥位，調(diào)整左手拇指位置，緊壓在下頜骨上，注意不要過緊造成大鼠窒息。,大小鼠的固定：若做手術(shù)或解剖等，則需事先麻醉或處死，然后用細(xì)棉線繩縛腿

19、，背臥位綁在大鼠固定板上,大、小鼠尾靜脈注射,三、家兔 　 抓?。簩嶒灱彝枚鄶?shù)飼養(yǎng)在籠內(nèi)，所以抓取較為方便，一般以右手抓住兔頸部的毛皮提起，然后左手托其臀部或腹部，讓其體重重量的大部分集中在左手上，這樣就避免了抓取過程中的動物損傷。注意事項：家兔比較馴服，不會咬人，但腳爪較尖，應(yīng)避免家兔在掙扎時抓傷皮膚。,不正確的家兔抓取方法,,家兔的固定方法可根據(jù)需要而采用：①盒式固定，常用作兔耳血管注射、采血或觀察兔耳血管變化，兔腦內(nèi)接種

20、等操作固定；②臺式固定，常用作兔靜脈采血或測量血壓、呼吸等實驗和技術(shù)操作時的固定；,③架式固定，常用于作熱源試驗時固定。,四、豚鼠 　豚鼠膽小易驚，抓取時必須穩(wěn)、準(zhǔn)、迅速。先用手掌扣住鼠背，抓住其肩胛上方，將手張開，用手指環(huán)握頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定。,五、蟾蜍 　抓取蟾蜍時，可先在蟾蜍體部包一層濕布，用左手將其背部貼緊手掌固定，把后肢拉直，并用左手的中指、無名指及小指夾住，前肢可用拇指及食指壓住

21、，右手即可進行實驗操作。抓取蟾蜍時不要擠壓兩側(cè)耳部突起的毒腺，以免蟾蜍將毒液射到使用者眼睛里。需要長時間固定時，可將蟾蜍麻醉或毀腦脊髓后，用大頭針釘在蛙板上。,,,六、狗 　用狗做實驗時，為防止其咬傷操作人員，一般先將狗嘴綁住。對實驗用狗，如畢格狗或馴服的狗，綁嘴時操作人員可從其側(cè)面靠近并輕輕撫摸頸部皮毛，然后迅速用布帶綁住狗嘴；對家養(yǎng)的笨狗或未經(jīng)馴服的狗，先用長柄捕狗狗夾夾住狗的頸部，將狗按倒在地，再綁嘴。,,七、豬,八、猴

22、 飼養(yǎng)人員可以用網(wǎng)罩捕捉籠內(nèi)飼養(yǎng)的獼猴。方法是以右手持短柄網(wǎng)罩，左臂緊靠門側(cè)，以防籠門敞開時獼猴逃出籠外。右手將網(wǎng)罩塞入籠內(nèi)，由上而下罩捕。在獼猴被罩到后，應(yīng)立即將網(wǎng)罩翻轉(zhuǎn)取出籠外，將猴罩在地上，由罩外抓住猴的頸部，輕掀網(wǎng)罩，再提取猴的手臂反背握住，此時，猴不能逃脫 。,第二節(jié) 實驗動物的編號和分組,一、編號 　實驗動物常需要標(biāo)記以示區(qū)別。編號的方法很多，根據(jù)動物的種類數(shù)量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標(biāo)記方法。

23、 　(一)掛牌法：將號碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長期使用不生銹)，將號碼按實驗分組編號烙在栓動物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動物頸部。該法適用于狗等大型動物。,(二)打號法：用刺數(shù)鉗(又稱耳號鉗)將號碼打在動物耳朵上。打號前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵，用耳號鉗刺上號碼，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用于耳朵比較大的兔、狗等動物。 (三)針刺法：用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水

24、，在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標(biāo)記。該法適用于大小鼠、豚鼠等。在實驗動物數(shù)量少的情況下，也可用于兔、狗等動物。,(四)化學(xué)藥品涂染動物被毛法：,這種標(biāo)記方法在實驗室最常使用，也很方便。使用的顏料一般有3-5%苦味酸溶液（黃），2%硝酸銀（棕黃色）溶液和0.5%中性品紅（紅色），龍膽紫溶液（紫色）等。標(biāo)記時用毛筆或棉簽蘸取上述溶液，在動物體的不同部位涂上斑點，以示不同號碼。,,,編號的原則是：先左后右，從上到下

25、。一般把涂在左前腿上的計為1號，左側(cè)腹部計為2號，左后腿為3號，頭頂部計為4號，腰背部為5號，尾基部為6號，右前腿為7號，右側(cè)腰部為8號，右后腿計為9號。,若動物編號超過10或更大數(shù)字時，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)，這種交互使用可編到99號，假使把紅的記為十位數(shù)，黃色記為個位數(shù)，那么右后腿黃斑，頭頂紅斑，則表示是49號鼠，其余類推。,,染色法多用于實驗周期較短，動物數(shù)量不多的情況。這種方法標(biāo)

26、號簡單，動物無疼痛和損傷.。但由于動物之間互相摩擦、舔毛，尿、水浸漬被毛或脫毛，或因日久顏色自行消退等原因，不宜用于長期的實驗。此法主要用于大、小鼠、豚鼠和白色家兔。,(五)打耳孔法 打耳孔法是用專用打孔機直接在動物耳朵上打孔編號,根據(jù)打在耳朵上的部位和孔數(shù)來區(qū)分實驗動物的方法。也可用剪刀在動物耳廓上剪缺口的方法。進行上述操作時，動物要進行局部麻醉，打孔后打孔部位要進行消毒。,,(六)耳標(biāo)法 將帶有號碼

27、的金屬耳標(biāo)于耳根部刺透固定,動物可永久性攜帶。,（七)電子芯片法 目前國際比較流行的永久性標(biāo)記法，在動物的頸背部皮下埋入預(yù)先編好號碼的微型集成電路片，用特種讀取數(shù)據(jù)的裝置進行鑒別，方便讀取?？赏瑫r讀出動物的編號和體溫。,貓、狗、鼠、寵物貂、金龍魚、鮭魚、馬、兔子等,（八）紋身法：使用電動加墨器在動物耳內(nèi)側(cè)無血管的部位、前胸被毛較少的部位或尾上印上墨汁，可終身標(biāo)記。,二、分組 1. 分組的原則：動物分組應(yīng)按隨機分配的原則

28、，使每只動物都有同等機會被分配到各個實驗組與對照組中去，以避免各組之間的差別，影響實驗結(jié)果，特別是進行準(zhǔn)確的統(tǒng)計檢驗，必須在隨機分組的基礎(chǔ)上進行。 每組動物數(shù)量應(yīng)按實驗周期長短、實驗類型及統(tǒng)計學(xué)要求而定。如果是慢性實驗或需要定期處死動物進行檢驗的實驗，就要求選較多的動物，以補足動物自然死亡和認(rèn)為處死所喪失的數(shù)量，確保實驗結(jié)束時有合乎統(tǒng)計學(xué)要求的動物數(shù)量存在。,2. 建立對照組。分組時應(yīng)建立對照組。（1）自身對照組：實驗動

29、物本身在實驗處理前、后兩個階段的各項相關(guān)數(shù)據(jù)就分別是對照組和實驗組的實驗結(jié)果，此法可排除生物間的個體差異。（2）平行對照組：陽性對照組：給實驗組動物使用已知有效的某種處理手段或藥物；陰性對照組：與實驗組采用同樣的方法進行處理，但并不采用實驗所要求的藥物或手段（如假手術(shù)或注射生理鹽水）；空白對照組：不給任何處理。,第三節(jié) 實驗動物的麻醉方法,為了保障實驗動物的安全，消除實驗過程中所致的疼痛和不適感覺，滿足動物福利的要求，確保實驗

30、順利進行就要對動物進行麻醉。 麻醉：表示知覺/感覺喪失。感覺喪失可以是局部性的，即體現(xiàn)在身體的某個部位，也可以是全身性的，即體現(xiàn)為病人全身知覺喪失，無意識。,（一）動物的麻醉方法:全身麻醉和局部麻醉1．全身麻醉 （1）吸入法　氣體吸入麻醉的優(yōu)點是：動物進入麻醉快，蘇醒快，容易控制麻醉深度，安全性好。動物的發(fā)病率和死亡率低，動物手術(shù)的成功率高。乙醚麻醉兔及大鼠、小鼠，將動物放入玻璃麻醉箱內(nèi)，把裝有浸潤乙醚棉球的小燒杯放入麻醉

31、箱，不久動物出現(xiàn)異常興奮，不停地掙扎，隨后排出大小便。漸漸地動物由興奮轉(zhuǎn)為抑制，倒下不動，呼吸變慢。,,在繼續(xù)給藥過程中,時常檢查角膜反射和瞳孔大小。,（2）腹腔和靜脈給藥麻醉法腹腔給藥麻醉多用于大小鼠和豚鼠，較大的動物如兔、狗等則多用靜脈給藥進行麻醉。缺點是劑量不易掌握，劑量過大會造成動物麻醉過度死亡，劑量過小動物不能進入麻醉狀態(tài)或較慢。所以在腹腔和靜脈麻醉時，一定控制藥物的濃度和注射量。麻醉劑注射動物后，必須經(jīng)肝贓代謝完后，動物

32、才蘇醒，所以麻醉時間長，不能調(diào)節(jié)。在注射麻醉藥物時，先用麻醉藥總量的2/3，密切觀察動物生命體征的變化，如已達到所需麻醉的程度，余下的麻醉藥則不用，避免麻醉過深抑制延腦呼吸中樞，導(dǎo)致動物死亡。,2. 動物局部麻醉方法：局部麻醉（local anaesthesia）是應(yīng)用局部麻醉藥暫時阻斷身體某一區(qū)域的神經(jīng)傳導(dǎo)而產(chǎn)生麻醉作用，簡稱局麻。局麻簡便易行，安全性大，能保持動物清醒，對生理功能干擾小，并發(fā)癥少。適用于較表淺局限的中小型手術(shù)。

33、局部麻醉包括表面麻醉，局部侵潤麻醉，區(qū)域麻醉，神經(jīng)阻滯。,（二）、常用的麻醉藥1. 常用局部麻醉劑。普魯卡因，此藥毒性小，見效快，常用于局部浸潤麻醉，用時配成0.5％～1％溶液；利多卡因，此藥見效快，組織穿透性好，常用0.25％～0.5％溶液。2. 常用全身麻醉劑（1）乙醚：乙醚吸入法是最常用的麻醉方法，各種動物都可應(yīng)用。乙醚麻醉的優(yōu)點多，如麻醉深度易于掌握，比較安全，而且麻醉后恢復(fù)比較快。,由于乙醚局部刺激作用大，可刺激上呼吸

34、道黏液分泌增加，通過神經(jīng)反射擾亂呼吸、血壓和心臟的活動，并且容易引起窒息，在麻醉過程中要注意。需在麻醉前給予一定量的嗎啡和阿托品（基礎(chǔ)麻醉），通常在麻醉前20～30min，皮下注射鹽酸或硫酸嗎啡（每公斤體重5～10mg）及阿托品（每公斤體重0.1mg）。 其他：異氟烷、恩氟烷、地氟烷、七氟烷，氧化亞氮等。,（2）戊巴比妥鈉：此藥麻醉時間不很長，一次給藥的有效時間可延續(xù)3～5h，所以十分適合一般實驗要求。給藥后對動物循環(huán)和呼吸系

35、統(tǒng)無顯著抑制作用，藥品價格也很便宜。用時配成1％～３％生理鹽水溶液，必要時可加溫溶解，配好的藥液在常溫下放置1～2月不失藥效。戊巴比妥鈉是最常用的麻醉劑，有獸用、人獸共用的產(chǎn)品，使用時應(yīng)注意藥品質(zhì)量。,（3）硫噴妥鈉： 硫噴妥鈉為超速效巴比妥類藥物，為淡黃色粉末，有硫臭，易吸水，裝在安瓿中保存。其水溶液不穩(wěn)定，故必須臨時配制，常配濃度為1％～5％，在4℃冰箱中保存，在室溫中則只能保存24h。該藥麻醉誘導(dǎo)和蘇醒時間短，一次用

36、藥僅可維持0.5-1h。因此，一般用作為誘導(dǎo)麻醉或基礎(chǔ)麻醉。其副作用：對呼吸系統(tǒng)有明顯的抑制作用，不宜與嗎啡合用。,(4) 氨基甲酸乙酯(烏拉坦)： 氨基甲酸乙酯（urethane）又名烏拉坦、烏來糖?？蓪?dǎo)致較持久的淺麻醉，對呼吸無明顯影響。常用于免、貓、狗、蛙等動物。氨基甲酸乙酯對兔的麻醉作用較強，是家兔急性實驗常用的麻醉藥。對貓和狗則奏效較慢，誘發(fā)大鼠和兔產(chǎn)生腫瘤，需長期存活的慢性實驗動物最好不用它麻醉。 

37、60;  本藥易溶于水，使用時可配成20%～25%的溶液。優(yōu)點：價廉，使用簡便，安全范圍大，一次給藥可維持4-5h，且麻醉過程較平穩(wěn)，動物無明顯掙扎現(xiàn)象。缺點：蘇醒慢，麻醉深度和使用劑量較難掌握。,麻醉成功標(biāo)志,角膜反射遲鈍或消失,,肢體肌肉松弛,疼痛反射消失,呼吸變深變慢,三、使用全身麻醉劑的注意事項1．麻醉劑用量。使用麻醉劑除參照一般標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)考慮個體對藥物的耐受性。一般說，衰弱和過胖的動物，其單位體重所需劑量較小，

38、在使用麻醉劑過程中，隨時檢查動物的反應(yīng)情況。2．動物在麻醉期體溫容易下降，要采取保溫措施。保溫的方法有，電褥、臺燈照射等。3．靜脈注射必須緩慢，配制的藥液濃度要適中不可過高。同時觀察肌肉緊張、角膜反射和對皮膚夾捏的反應(yīng)。4．在寒冷冬季做慢性實驗時，麻醉劑在注射前應(yīng)先加熱至動物體溫水平。,,第四節(jié) 動物除毛和給藥的方法,一、除毛方法1. 剪毛法。將動物固定后，先用蘸有水的紗布把被毛浸濕，再用剪毛剪緊貼皮膚剪去被毛。給犬、羊等

39、動物采血常用此法。2. 拔毛法。用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳緣靜脈注射或尾靜脈注射時常用此法。,3. 剃毛法。剃毛法是用剃毛刀剃去動物被毛的方法。如動物被毛較長，先要用剪刀將其剪短，再用刷子蘸溫肥皂水將剃毛部位浸透，然后再用剃毛刀除毛。本法適用于暴露外科手術(shù)區(qū)。4. 脫毛法。脫毛是指用化學(xué)脫毛劑將實驗動物被毛脫去，適用于無菌手術(shù)的準(zhǔn)備以及觀察動物皮膚血液循環(huán)和病理變化。方法：首先將被毛剪短，然后用棉球蘸取脫毛劑，在所需部位涂一

40、薄層，2～3min后用溫水洗去脫落的被毛，用紗布輕輕擦干備用，小心不要損傷皮膚。,常用的脫毛劑配方：（1）硫化鈉3g、肥皂粉1g、淀粉7g，加水適量調(diào)成糊狀。（2）硫化鈉8g、淀粉7g、糖4g、硼砂1g,加水75ml。（3）硫化鈉8g,溶于100ml水中以上三種配方適合于家兔、大鼠、小鼠等小動物的脫毛。（4）硫化鈉10g、生石灰15g，溶于100ml水中，此配方適用于犬等大動物的脫毛。純硫化鈉為無色結(jié)晶粉末。吸潮性強，易溶于

41、水。水溶液呈強堿性反應(yīng)。觸及皮膚和毛發(fā)時會造成灼傷，對皮膚和眼睛有腐蝕作用，故硫化鈉俗稱硫化堿 。受撞擊或急速加熱可發(fā)生爆炸。遇酸分解，放出劇毒的易燃?xì)怏w。該品在胃腸道中能分解出硫化氫，口服后能引起硫化氫中毒。,二、給藥方法在動物實驗中，需將藥物通過一定的途徑給入到動物體內(nèi)，才能觀察實驗動物對藥物的反應(yīng)。給藥的途徑和方法是多種多樣的，可以根據(jù)實驗?zāi)康?，實驗動物種類、敏感途徑和藥物類型等情況而定。注射給藥: 皮下、 皮內(nèi)、 肌肉、 腹

42、腔、 靜脈 ……經(jīng)口給藥: 口服 、灌胃呼吸給藥：粉塵 、氣霧皮膚給藥：涂抹其他方法：脊髓腔、腦內(nèi)、關(guān)節(jié)腔、直腸……,1. 注射給藥法（1）皮下注射：皮下注射較為簡單，一般選取背部皮下及后肢皮下。注射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入，把針尖輕輕向左右擺動，容易擺動則表明已刺入皮下，然后注射藥物，拔針時，輕按針孔片刻，以防藥液逸出。。,（2）皮內(nèi)注射：此法用于觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內(nèi)反應(yīng)。方

43、法是：將動物注射部位的毛剪去，消毒后，左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器細(xì)針頭，緊貼皮膚皮層刺入皮內(nèi)，然后使針頭向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液。注射后因局部皮膚缺血，在注射部位可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘，為防止藥液外溢，最好使用棉簽輕按片刻。,（3）肌肉注射：當(dāng)給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，常采用肌肉注射。肌肉注射一般選用肌肉發(fā)達、無大血管經(jīng)過的部位。如猴、狗、貓、兔可注入兩側(cè)臀部或

44、股部肌肉。大鼠、小鼠、豚鼠因其肌肉較小，不常作肌肉注射，如需肌注，可注射入大腿外側(cè)肌肉。用5～6號針頭注射，小鼠每腿不超過入0.1ml。為防止藥物進人血管，注藥液之前要回抽針?biāo)?，如無回血則可注藥，注射完畢后用手輕輕按摩注射部位，幫助藥物吸收。,（4）腹腔注射：先將動物固定，腹部用酒精棉球擦拭消毒，然后在左或右側(cè)腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進約0.5cm，再使針頭與皮膚呈45°角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時有落空感，回抽無

45、腸液、尿液后，緩緩?fù)迫胨幰?。此法在大小鼠使用較多。,（5）靜脈注射：是將藥液直接注射于靜脈管內(nèi)，使其隨著血液分布全身，迅速發(fā)揮效用。1. 小鼠、大鼠的靜脈注射：常采用尾靜脈注射。鼠尾靜脈共有3根，左右兩側(cè)和背側(cè)各1根，兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，故常被采用。操作時，先將動物固定在暴露尾部的固定器內(nèi)，用75％酒精棉球反復(fù)擦拭使血管擴張，并可使表皮角質(zhì)軟化。,以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，注射時針頭盡量采取與尾部平行的角度進針。開

46、始注射時宜少量緩注，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，這時用左手指將針和尾一起固定起來，便可進行注射。 如有白色皮丘出現(xiàn)，說明未穿刺入血管，應(yīng)重新向尾部方向移動針頭再次穿刺。如需反復(fù)注射，盡量從尾的末端開始。一次的注射量為0.1～0.2ml/10g體重。,2. 兔的靜脈注射：一般采用外耳緣靜脈。將兔置固定盒內(nèi)或由助手固定好動物，操作者將注射部位的毛拔去并用酒精棉輕輕擦拭耳部外緣，靜脈即明顯可見。先由耳尖部靜脈注射，若失

47、敗，再逐步向耳根移動重新注射。注射完畢抽出針頭時，應(yīng)壓迫針孔，避免出血。,75%酒精消毒，手指輕彈兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近心端，拇指繃緊遠心端。右手從靜脈的遠端刺入血管，移動拇指于針頭上固定，放開食指、中指，將藥液注入。,3. 豚鼠的靜脈注射： 耳緣靜脈注射、跖靜脈注射、舌下靜脈注射。,4. 犬的靜脈注射：前肢外側(cè)皮下頭靜脈：位于前腳爪的上方背側(cè)的正前位。后肢外側(cè)的小隱靜脈：位于后肢脛部下三分之一的外側(cè)淺

48、表皮下，由前側(cè)方向后行走。注射部位除毛后，在靜脈血管的近心端用橡皮帶扎緊，使血管充盈，從靜脈的遠心端將注射針頭平行血管刺入，回抽注射器針?biāo)?，如有回血，即可放開橡皮帶，將藥液緩緩注入。,幾種動物不同給藥途徑的常用注射量（毫升）,2. 經(jīng)口給藥法（1）口服法：把藥物放入飼料或溶于飲水中讓動物自動攝取。此法優(yōu)點在于簡單方便，缺點是不能保證劑量準(zhǔn)確。 一般適用于對動物疾病的防治或某些藥物的毒性實驗，制造某些與食物有關(guān)的人類疾病動物模

49、型。,二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大鼠肝癌 ；黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌：每日飼料中含0.001～0.015ppm，混入飼料中喂6個月后，肝癌誘發(fā)率達80%。,（2）灌胃法：灌胃法是用灌胃器將所應(yīng)投給動物的藥灌到動物胃內(nèi)。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構(gòu)成或直接采用灌胃管。灌胃針的尖端焊有一小圓金屬球，金屬球為中空的。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端彎曲成20°左右的角度，以適應(yīng)口腔、食道的生理彎曲度走向。,

50、鼠類的灌胃法：用左手固定鼠，右手持灌胃器，將灌胃針從鼠的口腔插入，壓迫鼠的頭部，使口腔與食道成一直線，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食道，可感到輕微的阻力，此時可略改變一下灌胃針方向，以刺激引起吞咽動作，順勢將藥液注入。 一般灌胃針插入小鼠食道深度為3～4cm，大鼠或豚鼠為4～6cm。常用灌胃量小鼠為0.2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠1～5ml。注意在插入以后如果針頭不在食管內(nèi)，則動物劇烈掙扎，此時應(yīng)拔出重新操作。,一篇博士生

51、論文，講的是用中藥湯劑，治療裸鼠移植性腫瘤。具體方法為，每次 3ml灌胃，每天 3 次，10天后腫瘤體積減少，得出結(jié)論為治療有效。 成年小鼠一般體重 40g，胃容量0.8-1.5ml，一天的量為9ml。40kg人，每天得喝 9L 湯藥。 小鼠肯定痛苦不堪，迅速消瘦，腫瘤細(xì)胞較正常組織對營養(yǎng)的依賴更大，變小是肯定的，但不是湯藥的作用，是“饑餓療法”的結(jié)果。,,,家兔灌胃用開口器及灌胃器 一次灌胃量：80-10

52、0ml灌胃管：14號導(dǎo)尿管,,,犬灌胃方法一次灌胃量：200-250ml,豬灌胃方法,3. 其他途徑給藥方法（1）呼吸道給藥：粉塵型藥或噴霧使用的藥物或需要通過氣溶膠感染的方式進行微生物感染動物實驗時，需要呼吸道給藥。如實驗時給動物做乙醚吸入麻醉、用鋸末煙霧制作慢性氣管炎動物模型等，特別在毒理學(xué)實驗中應(yīng)用較廣泛。,（2）皮膚給藥：為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如兔和豚鼠

53、常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定的藥液涂在皮膚上，觀察藥液經(jīng)皮膚吸收的反應(yīng)。,三、實驗動物用藥量的確定及計算方法 觀察一種藥物對實驗動物的作用時，一個重要的問題就是給動物用多大的劑量較合適。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動物中毒致死。1、動物給藥量的確定 （1） 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一作為應(yīng)用劑量，一般可取1/10～1/

54、5。,（2）確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn),可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件時，最好同時用幾個劑量作實驗，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度之間毫無規(guī)律時，則更應(yīng)慎重分析。 （3）用大動物進行實驗時,為防止動物中毒死亡,開始的劑量可采用鼠類的1/15～1/2

55、,以后可根據(jù)動物的反應(yīng)調(diào)整劑量。,（4）確定動物給藥劑量時，要考慮動物的年齡和體質(zhì)，一般來說確定的給藥劑量是成年動物的劑量，如是幼齡動物，劑量應(yīng)減少。 犬：＞6月 1份藥量 3～6月 1/2份 45日～89日 1/4份 20日～44日 1/8份 10～19日

56、 1/16份,,（5）確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同。 口服量 100 皮下注射量 30～50 肌肉注射量 20～30 靜脈注射量 25,,2、用藥量換算方法 (1) 人與動物對同一藥物耐受性不同，一般動物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動物比人要高。必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例換算： 人用藥量

57、： 1 小鼠、大鼠： 25～50 兔、豚鼠： 15～20 狗、貓： 5～10 以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、皮下、腹腔注射，換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。,舉例：一個成年人按60kg體重，口服藥物需12ml；200g大鼠灌胃量為多少？

58、 12／60× 200／1000＝0.04ml 0.04 ×（25-50）=1-2ml,按動物體表面積計算的方法: 人的體表面積跟體重有關(guān)系,動物的體表面積也與體重有關(guān)系。動物的用藥量可以通過體表面積進行換算，Meeh-Rubner公式如下： A＝K×（W2／3／10000）　　　　 A＝體表面積， m2

59、 W=體重，ｇ　 　 　K=常數(shù)：　 小鼠、大鼠＝9.1, 豚鼠=9.8, 家兔=10.1, 貓=9.8, 犬 =11.2, 猴＝11.8, 人＝10.6,,,舉例: 試計算體重1.5kg家兔的體表面積？ A=10.1 ×(15002/3/10000） 計算得 A＝0.1324m2,舉例: 某藥物大

60、鼠灌胃的劑量為250mg/kg,試估計狗灌胃計量？ 一般大鼠的體重為200g ,狗體重按10kg： A大鼠 = 9.1 ×(200 2/3 /10000)=0.0311m2 A 狗 ＝11.2 ×(10000 2/3 /10000)=0.5198m2 大鼠250mg/kg的劑量換算成mg/ m2 : 250 ×200/1000/0.0311=1608mg/

61、m2 1608mg/m2 × 0.5198m2 =835.8 mg (10kg狗的灌胃量） 835.8 mg ／10kg＝84mg/kg ( 換算成mg/kg).,第五節(jié) 實驗動物的采血法,實驗研究中，經(jīng)常要采集實驗動物血液進行常規(guī)質(zhì)量檢測、細(xì)胞學(xué)實驗或生物化學(xué)分析，故必須掌握正確的采集血液的技術(shù)。采血方法的選擇，主要由實驗?zāi)康暮退柩考皠游锓N類決定。,采血對機體的影響 血糖水平、皮質(zhì)類固醇

62、激素、催乳激素、腎上腺素、生長激素、胰島素、血管緊張肽酶原和血清酶類。 低于10％的血量喪失，動物通常無明顯臨床癥狀；15-20％的血量喪失動物出現(xiàn)動脈壓和心血輸出量下降；血液進一步喪失，則心輸出量、血壓和組織灌流量均下降，嚴(yán)重時發(fā)展為失血性休克，甚至威脅生命。 介入性采血對動物的影響不僅是血容量的喪失，血液喪失的比率、采血位置和方法、技術(shù)人員的熟練程度、麻醉的種類、動物的年齡和性別、動物的營養(yǎng)和健康狀況均為重要因素。,采血量

63、 10％-10％規(guī)則，實際上，大多數(shù)動物的血容量不到體重的10％； 一般單次采血量不高于全身血容量的10％，短期的反復(fù)采血（間隔24h)，每次采血量不宜超過全血量的1％，每周采血8％，其血紅蛋白需數(shù)周才能恢復(fù)至正常濃度。 200g大鼠，按7.4％，全血容量14.4ml，單次采血1.4ml是安全的，反復(fù)采血每次不宜超過0.14ml。,動物采血量的確定,在一項猴動物實驗中，要求每次采血10ml/次，一周3次，連續(xù)3月。這

64、點血對人來說不算什么，對4kg的猴是不可以的。4kg的猴血量大致350ml，算一算就知道為什么不行了。,,施新遒主編 《醫(yī)用實驗動物學(xué)》,,,一、大鼠、小鼠的采血方法1.尾部采血尾側(cè)靜脈采血：大鼠，0.5-1ml 大鼠置固定器中-----以手指、橡膠繩或曲別針對位根部施壓-----采血部位消毒-----以空針刺入側(cè)面尾靜脈-----放開止血帶、血液流出（去除針頭的空針連接口讓血液自然流出可減少溶血----拔出針頭、紗

65、布止血,腹側(cè)尾動脈采血：1－1.5ml 大鼠置固定器中或乙醚麻醉-----背側(cè)臥----- 用手壓住距尾尖5cm處至動脈清晰可見-----在按壓手指前1-2cm處進針-----采血后紗布按壓止血,尾靜脈切口采血：小鼠、大鼠，0.1-0.2ml 固定器固定，在距尾尖1cm處消毒后，以刀片在尾側(cè)面切口可取少量血液，通常輕壓即可止血。剪尾采血：固定器固定，將尾尖剪去約5mm，從尾根部向尾尖部按摩，血即從斷端流出。用此法每只鼠可

66、采血10余次。小鼠可每次采血約0.1ml，大鼠約0.4ml。需血量很少時常用本法，如做紅、白細(xì)胞計數(shù) 、血紅蛋白測定、制作血涂片等可用此法。注意：以上方法在采血前以溫水加熱幾分鐘，均可促進血液流出。,2. 眼眶后靜脈叢采血：穿刺采用毛細(xì)管。左手拇指及食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定，并輕輕壓迫頸部兩側(cè)，使眼球充分外突。右手持取血管，將其尖端插入內(nèi)眼角與眼球之間，刺入Tenon筋膜，然后由鼻側(cè)眼眶平行地對喉頭方向推進，深約4-5mm，到

67、達后眼眶靜脈叢，血液自然進入吸管內(nèi)。采血結(jié)束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。,用本法在短期內(nèi)可重復(fù)采血。小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1.0ml。,3. 頸(股)靜脈或頸(股)動脈采血：鼠經(jīng)麻醉后，做頸靜脈或頸動脈分離術(shù)，用注射器抽出所需血量；剪開腹股溝處皮膚，即可看到股靜脈，把此靜脈剪斷或用注射器采血即可，股動脈較深需先剝離，再采血。,4. 摘眼球采血：用左手固定動物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用鑷

68、子或止血鉗迅速摘除眼球，眼眶內(nèi)很快流出血液。5.心臟采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。,6.肝門靜脈、腹主動脈采血最好先將動物麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺上，從腹正中線皮膚切開腹腔，使門靜脈或腹主動脈清楚暴露，用注射器吸出血液。或用無齒鑷子剝離結(jié)締組織，夾住動脈近心端，用尖頭手術(shù)剪刀，剪斷動脈，使血液噴入容器。,二、豚鼠采血方法1.耳緣剪口采血將耳消毒后，用銳器（刀或刀片）割破耳緣，在切口邊緣涂抹20%檸檬