心臟病人的護理

1、Folin-Wu法定量測定血糖的含量,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,,1.氧化供能 2.人體的主要組成成分之一 糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；轉(zhuǎn)化成脂肪和某些非必需氨基酸等3.糖代謝紊亂→供能障礙→一系列代謝變化,,糖的重要生理功能：,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,血糖及血糖水平的概念：,血糖：指血液中的單糖：葡萄糖,血糖水平：血漿中葡萄糖濃度,血糖總維持在恒定水平：3.

2、9∽6.7mmol/L,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,,血糖的來源和去路,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,血糖測定的目的和意義,臨床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)?？蒲校涸诖x疾病的研究中，常測定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。,調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。血糖水平異常：⑴高血糖及糖尿??；⑵低血糖,中國海洋大學生物基礎(chǔ)

3、實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,高血糖癥：指空腹血糖濃度超過7.3mmol/L,有生理性和病理性之分，臨床上最常見的病理性高血糖癥是糖尿病?！√悄虿。菏且环N慢性、復(fù)雜的代謝紊亂性疾病,系胰島素絕對不足或相對不足，以高血糖癥為基本生化特點。同時伴有糖、脂類、蛋白質(zhì)、水、電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂，甚至出現(xiàn)一系列并發(fā)癥如眼、腎的微血管病變及神經(jīng)病變等。,,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,癥狀＋隨機血漿葡萄糖≥ 1

4、1.1mmol/L,或空腹血漿葡萄糖≥ 7.0mmol/L。癥狀不典型者需另一天再次證實。隨機血糖是指一天中的任一時間采血測得的血糖濃度。糖尿病典型的癥狀是“三多一少”，即多飲、多尿、多食及消瘦,,糖尿病的診斷標準,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,,血糖的測定方法,測定方法,酶法：（1）己糖激酶法（HK）　　　（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動化分析，為葡萄

5、糖測定的參考方法，但是試劑較貴,,無機化學法： Folin-Wu法，特異性差,有機化學法：鄰甲苯胺法、聯(lián)苯胺法、氨基聯(lián)苯法　　　　　　干擾因素多,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,掌握Folin－Wu法測定血糖含量的原理和方法。學會制備無蛋白血濾液。掌握7200型可見分光光度計的使用方法。,一、目的要求,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,二、實驗原理,葡萄糖是一種多羥基的醛類化合物。其醛

6、基具有還原性，與堿性銅試劑混合加熱，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖還原成Cu+（Cu2O）而沉淀。 Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖 Cu+ （Cu2O）無蛋白血濾液中的葡萄糖和酸性鉬酸鹽溶液共熱反應(yīng), Cu2O又把酸性鉬酸試劑（Mo6+）還原成低價的藍色鉬化合物—鉬藍 。Cu2O+酸性鉬酸試劑 藍色鉬化合物 OD420比色 血濾液中葡萄糖的含量與產(chǎn)生的Cu2O成正比，而Cu

7、2O的量與產(chǎn)生的鉬化合物的量成正比。可用比色法定量的測定。,,,,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,三、實驗儀器,1、25mL血糖管×3支；2、血糖管橡膠塞×3個；3、沸水浴小鍋×1個； 4、100mL錐形瓶×2個；5、電爐×1個；6、濾紙×1盒；7、吸耳球×2個； 8、7200型分光光度計

8、×1臺;,血糖管,7200型分光光度計,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,1、標準葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：稱取1.000g葡萄糖，溶于蒸餾水，稀釋并定容至100ml。(2)葡萄糖標準液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸餾水定容。2、10%鎢酸鈉溶液：稱取鎢酸鈉10g，溶于蒸餾水并定容至100毫升。3、0.33mol/LH2SO4溶液：于53ml蒸餾水中加

9、入1ml的濃硫酸。4、堿性硫酸銅溶液 A液：無水碳酸鈉35g，酒石酸鈉13g及碳酸氫鈉11g溶于蒸餾水，稀釋定容至1000ml. B液：硫酸銅晶體5g，溶于蒸餾水并定容至100ml。 臨用時，A液：B液=9：1混合（體積比），混合液于冰箱中保存（4℃）。,四、實驗試劑,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,5、酸性鉬酸鹽溶液：稱取鉬酸鈉600g,用少量蒸餾水溶解后傾入2000ml 的容量瓶中，加蒸餾水至

10、刻度，搖勻，傾入另一較大的試劑瓶中，加溴水0.5ml，搖勻，靜止數(shù)小時后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，邊加邊搖勻，再加25%硫酸150ml。置暗處次日，用空氣將剩余的溴趕去。然后加99%醋酸75ml，搖勻，用蒸餾水稀釋定容至1000ml,貯于棕色瓶中。,四、實驗試劑,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,1、無蛋白血濾液的制備：用5ml移液管吸取全血（已加抗凝劑）1ml,

11、緩緩放入100ml錐形瓶中，加蒸餾水7ml，搖勻，溶血后（血液變?yōu)榧t色透明）加10%鎢酸鈉1ml，搖勻.。再加0.33mol/L H2SO41ml，邊加邊搖，加畢充分搖勻，放置5～15分鐘，至沉淀變?yōu)榘底厣ㄈ绮蛔兩稍偌?.33mol/L H2SO41-2滴）。用干濾紙過濾。先傾入少許，待濾紙濕潤后在全部倒入，如濾液不清需重新過濾。每毫升無蛋白血濾液相當于1/10ml全血。,五、實驗步驟,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子

12、生物學實驗室,2、血糖的定量測定：取25ml的血糖管3支，編號。第一支血糖管中加入2ml蒸餾水（空白管）；第二支血糖管中加2ml標準葡萄糖液；用吸管吸取無蛋白血濾液2ml，放入第三支血糖管中。然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的堿性硫酸銅溶液，同時置于沸水浴中8分鐘，取出，在流水中迅速冷卻后,勿搖動，各加4ml酸性鉬酸鹽溶液。一分鐘后，用蒸餾水稀釋至25ml，混勻，用7200分光光度計在420nm波長處比色，以空白管調(diào)節(jié)零點。,

13、中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,按下式計算100ml全血中所含血糖的含量m=A1/A0×C0÷0.1×100式中: m=100ml全血中含血糖毫克數(shù) ; C0=標準液葡萄糖含量（0.1mg/ml）；A1=樣品液光吸收值 ; A0=標準液光吸收值 0.1：1ml無蛋白血溶液相對于0.1ml全血,六、結(jié)果計算：,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,七、思考題,

14、實驗過程中那些操作可能影響實驗結(jié)果的準確性？實驗中，血糖管有什么作用？實驗過程中，為什么要用流水冷卻加入堿性硫酸銅液反應(yīng)后的血糖管？,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,注意事項：1.加硫酸、鎢酸鈉時，要邊加邊搖勻2.沉淀由鮮紅變?yōu)榘底厣?，是因鎢酸鈉與硫酸生成鎢酸，在適當酸度時，使血紅蛋白變性沉淀，如果沉淀不變暗棕色或重新過濾后仍混濁，是因為血液中所加抗凝劑過多，可以加入10％硫酸1-2滴，待暗棕色后再過濾

15、。3.用定量濾紙過濾后應(yīng)該得到完全澄清無色之無蛋白血濾液?！∪绻玫饺詭в屑t色的血濾液則說明蛋白質(zhì)未被完全去除。,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,五、實驗步驟,1、無蛋白血濾液的制備：,,蒸餾水7ml,搖勻,10%鎢酸鈉1ml,,搖勻,0.33mol/L H2SO41ml,,邊加邊搖,加畢充分搖勻,放置5—15分(沉淀變?yōu)榘底厣?(如不變色,再加0.33mol/L H2SO41~2滴 ),干濾紙過濾,無蛋白血

16、濾液(每毫升相當于1/10ml全血),20ml錐形瓶,溶血(變?yōu)榧t色透明),,用5ml移液管取全血1ml（已加抗凝劑,,,2、血糖的定量測定：,,,m=OD1/OD2× C× 10× 100,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,分光光度計的工作原理,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,朗伯-比爾定律,朗伯定律：A=k1L 比爾定律：A=k2C朗伯-比爾定律：如同

17、時考慮液層厚度和溶液濃度對吸光度的影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度和溶液的厚度的乘積成正比。 A=KLC,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,朗伯-比爾定律應(yīng)用,A標=KC標LA樣=KC樣L,,標準品法測定未知樣品含量,,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,7200型分光光度計的操作程序,連接儀器電源線，確定儀器供電電源有良好的接地性能。接通電源，使儀器預(yù)

18、熱20分鐘。用鍵設(shè)置測試方式：投射比（T），吸光度（A），已知標準樣品濃度值方式（C）和已知標準樣品斜率（F）方式。用波長選擇旋鈕設(shè)置您所需的分析波長。,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,將參比樣品溶液和被測樣品溶液分別倒入比色皿中，打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋。一般情況下，參比樣品放在第二個槽位中。將0％T校具（黑體）置入光路中，在T方式下按“0％T”鍵，此時顯示器顯示“

19、000.0”,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,按 MODE鍵選擇A模式將參比樣品拉入光路中，按“0A/100％T”鍵調(diào)0A/100％T，此時顯示器顯示的“BLA”直至顯示“0.000”A為止。當儀器顯示器顯示出“0.000”A后，將被測樣品推入光路，這時，您便可從顯示器上得到被測樣品的吸光度。,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,中

20、國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,,,分光光度計的使用注意事項:,比色皿的清潔程度，直接影響實驗結(jié)果。因此，特別要將比色皿清洗干凈。裝樣前處理：自來水反復(fù)沖洗→蒸餾水漂洗2次→待裝溶液漂洗2次。用完后用自來水和蒸餾水洗凈并用檫鏡紙檫干放回比色皿盒中。,中國海洋大學生物基礎(chǔ)實驗教學中心生化與分子生物學實驗室,,,,拿放比色皿時，應(yīng)持其“毛面”，不要接觸“光面”。,,若比色皿外表面有液體，應(yīng)用擦鏡紙朝同一方向拭干，