尿液分析的標(biāo)準(zhǔn)化及其尿沉渣定量檢測(cè)技術(shù)新進(jìn)展

1、1,尿液分析的標(biāo)準(zhǔn)化及其尿沉渣定量檢測(cè)技術(shù)新進(jìn)展,2,尿液分析的發(fā)展回顧,1590年荷蘭人詹森發(fā)明了世界上第一臺(tái)復(fù)合顯微鏡 1673年，F(xiàn)rederick Dekkers用加熱醋酸酸化尿液的方法檢測(cè)蛋白 1896年，Daiber出版了他的尿沉渣圖譜 1911年，Benedict提出了穩(wěn)定方便的尿糖檢測(cè)方法Johns Hopkins Hospital 的Charles Emerson發(fā)表名著《臨床診斷》 1956年Alfred

2、Free發(fā)明的CLINISTIX?，尿液分析史上第一個(gè)“浸入即讀”的測(cè)試方法,3,國(guó)內(nèi)尿液分析方法回顧,50~60手工化學(xué)分析70~80手工化學(xué)分析尿沉渣鏡檢80~90尿液干化學(xué)分析2K~2K1尿液干化學(xué)分析尿沉渣鏡檢2K2完整的尿液分析= 干化學(xué)+尿流式+鏡檢確認(rèn),4,檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展對(duì)尿液分析的要求,更準(zhǔn)為臨床提供更為準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果更快緩解檢驗(yàn)科不斷增加的樣品量的

3、壓力為臨床提供更為及時(shí)的檢驗(yàn)報(bào)告更多為臨床提供更多的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo),“應(yīng)對(duì)醫(yī)療糾紛舉證倒置政策對(duì)臨床和檢驗(yàn)科的要求”,5,目前尿液分析所存在的問(wèn)題,更準(zhǔn)？過(guò)分依賴尿液干化學(xué)分析尿沉渣鏡檢的方法學(xué)不精密性樣品處理過(guò)程所帶來(lái)的干擾人工鏡檢主觀因素的影響更快？單個(gè)樣品：9.75分鐘*批量處理：5.25分鐘*更多？*尿液分析最佳方法,Frank Bailey，ASCP,6,尿液干化學(xué)檢測(cè)方法的局限性,例如：白細(xì)胞：腎

4、移植病人淋巴尿不表現(xiàn)脂酶尿糖：受其它還原物質(zhì)的影響造成假陰性細(xì)菌：只能檢測(cè)革蘭氏陰性桿菌……定性結(jié)果，不能用于療效的監(jiān)測(cè) 結(jié)論：不能代替鏡檢,7,尿沉渣分析的重要性,紅細(xì)胞：泌尿系出血、泌尿系惡變、出血性疾病白細(xì)胞：泌尿系感染、急性腎小球腎炎、腎移植排異上皮細(xì)胞：腎小管病變管型紅細(xì)胞管型：急性腎小球腎炎、腎梗塞白細(xì)胞管型：急性腎小球腎炎、腎綜合癥、腎盂腎炎上皮細(xì)胞管型：腎小管病變，如腎臟疾病、多種中毒透明管型：

5、腎小球毛細(xì)管損害顆粒管型：腎盂腎炎、慢性腎疾病細(xì)菌：泌尿道感染,8,顯微鏡檢查的不精密度,UF-100、CD-3500、計(jì)數(shù)板三種方法對(duì)比 檢測(cè)104份腦脊液在低白細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)中， UF-100的CV為4.9% CD-3500的CV為28%鏡檢法的CV為40%,9,不同檢驗(yàn)員間鏡檢結(jié)果的差異,10,顯微鏡檢查的影響因素,標(biāo)本在分析前形態(tài)改變標(biāo)本混合不當(dāng)離心的尿量不同離心速度和時(shí)間不同尿沉渣重懸的液量不同尿

6、沉渣重懸的方法不同鏡檢一滴沉渣的液量不同蓋片或計(jì)數(shù)板的差異視野數(shù)目和位置的差異成份識(shí)別上的人員差異顯微鏡視野大小的差異,,11,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,0,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,RBC count (/,m,L),,,,Sam

7、ple 1,,,Sample 2,,,Sample 3,,,,,,,Sample 4,,,,,,,,,Sample 5,原液,400G, 5min,500G, 5min,500G, 15min,不同離心條件上清液中RBC的殘留量,12,尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化的建議,標(biāo)本的收集及運(yùn)送2.2 標(biāo)本的運(yùn)送 按上述要求留取尿液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成檢驗(yàn)。尿沉渣檢驗(yàn)的操作步驟3.2 鏡檢 計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)或管型，按××/µl報(bào)

8、告。材料與器械1.5 自動(dòng)化設(shè)備 有條件的實(shí)驗(yàn)室也可使用各類(lèi)自動(dòng)、半自動(dòng)的尿沉渣分析儀作為尿沉渣分析，或用作過(guò)篩，但此類(lèi)儀器必須經(jīng)權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)可。,13,各種改良的鏡檢系統(tǒng),14,DiaSys R/S2000系統(tǒng),15,國(guó)聯(lián)在線UD-S自動(dòng)染色工作站,,16,普利生AMP2000自動(dòng)掃描式尿沉渣工作站,,,17,DiaSys R/S2000系統(tǒng),主要部件為一個(gè)玻璃的光學(xué)計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)板固定在顯微鏡上并連接一個(gè)加樣泵尿液標(biāo)本首先按照常

9、規(guī)步驟進(jìn)行處理將加樣管插入離心管的底部，啟動(dòng)加樣泵吸取180微升的沉渣并利用渦流混合重懸在加樣泵作用下尿沉渣流入檢測(cè)區(qū)，分布在光學(xué)計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)后，系統(tǒng)自動(dòng)用700微升的鹽水沖洗管路和計(jì)數(shù)板以防止交叉污染,18,為什么要使用全自動(dòng)尿沉渣分析儀？,19,目前尿液分析所存在的問(wèn)題,更準(zhǔn)？過(guò)分依賴尿液干化學(xué)分析尿沉渣鏡檢的方法學(xué)不精密性樣品處理過(guò)程所帶來(lái)的干擾人工鏡檢主觀因素的影響更快？單個(gè)樣品：9.75分鐘*批量處理：5.

10、25分鐘*更多？*尿液分析最佳方法,Frank Bailey，ASCP,20,為什么要使用全自動(dòng)尿沉渣分析儀？,徹底排除樣品處理過(guò)程的干擾因素以及人工鏡檢主觀因素的影響，提高分析中質(zhì)量控制提高篩選效率，保證樣品的質(zhì)量，強(qiáng)化分析前質(zhì)量控制,21,全自動(dòng)尿沉渣分析儀UF-100/UF-50,22,全自動(dòng)尿沉渣分析儀,,23,結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好,UF-100 和人工鏡檢法精密度比較（n=10）,24,9-氮雜菲（Phenanthrid

11、ine）染色DNA和RNA發(fā)射熒光為: 橙色對(duì)死細(xì)胞胞膜穿透性強(qiáng)羰花青（Carbocyanine）細(xì)胞膜、核膜以及線粒體等膜性物質(zhì)被染色發(fā)射熒光為：綠色,特異的熒光染色技術(shù),25,彩色打印報(bào)告-臨床報(bào)告,26,彩色打印報(bào)告-科研報(bào)告,27,質(zhì)量控制,28,臨床應(yīng)用血尿來(lái)源的鑒別診斷,,29,紅細(xì)胞信息,,,,,80 100 ch,80 100

12、 ch,30,UF-100對(duì)血尿來(lái)源的判斷,Toru Hyodo, Kazuo Kumano et al. Detection of glomerular and non-glomerular red blood cell by automated urinary sediment analyzer. Jpn J Nephrol 37:35-43,1995. UF-100：敏感性 1

13、00％， 特異性 92.54%* 鏡檢法： 敏感性 95.83%，特異性 93.33%馬駿龍，叢玉隆等。全自動(dòng)尿沉渣分析儀檢測(cè)尿紅細(xì)胞鑒別血尿來(lái)源的探討。中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志 V20 (5), 1997。 UF-100：敏感性 100％， 特異性 78.2% *Hyodo所選非腎小球病變對(duì)象排除了血尿同時(shí)伴菌尿病人,31,臨床應(yīng)用藥物治療療效的觀察,,32,臨床應(yīng)用－急性腎盂腎炎,33,臨床應(yīng)用－輸尿管結(jié)

14、石，腎盂腎炎,34,臨床應(yīng)用－腎病綜合癥,35,臨床應(yīng)用用于檢測(cè)腦脊液中的白細(xì)胞,36,尿流式細(xì)胞儀檢查腦脊液中白細(xì)胞,UF-100、CD-3500、計(jì)數(shù)板三種方法對(duì)比 檢測(cè)104份腦脊液在低白細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)中， UF-100的CV為4.9% CD-3500的CV為28%鏡檢法的CV為40%,Reinhard Ziebig, Andreas Lun, Pranav SinHA. Leukocyte Counts in

15、Cerebrospinal Fluid with the Automated Hematology Analyzer CellDyn 3500 and the Urine Flow Cytometer UF-100. Clinical Chemistry 46:2 242~247 (2000),37,流式細(xì)胞儀分析腦脊液標(biāo)本,UF-100及顯微鏡檢測(cè)紅細(xì)胞有好的相關(guān)性，r=0.919UF-100與白細(xì)胞的相關(guān)性為r=0.886UF

16、-100與細(xì)菌的相關(guān)性為r=0.605，CSF出血標(biāo)本細(xì)菌計(jì)數(shù)不可信顱咽管瘤病人的CSF中新形隱球菌、酵母菌及膽固醇結(jié)晶可檢測(cè)出,JosT.Van Acker, Joris R. Delanghe et al. Automated Flow Cytometric Analysis of Cerebrospinal Fluid. Clinical Chemistry 47:3 556-560 (2001),38,UF在常規(guī)工作中的作用,

17、UF的快速篩選功能大大降低人工鏡檢的工作量解決陽(yáng)性樣品的漏檢問(wèn)題，避免了醫(yī)療糾紛定量的標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告方式大大提高結(jié)果的準(zhǔn)確性適用于臨床治療監(jiān)測(cè) 提供新的臨床信息RBC形態(tài)信息，用于血尿來(lái)源的鑒別診斷,39,簡(jiǎn)化工作流程,沒(méi)有UF,有了UF,報(bào)告,報(bào)告,報(bào)告,40,試紙條篩選、沉渣分析、化學(xué)定量、微生物檢查等是尿液分析不可缺少的內(nèi)容。采用自動(dòng)化儀器對(duì)這些顆粒進(jìn)行分析是減少手工操作，滿足臨床尿也分析所需要的檢驗(yàn)方法。Kouri