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文檔簡介
1、鎘是生物毒性最強(qiáng)的重金屬之一,它在環(huán)境中廣泛分布,近年來,由于工業(yè)活動的擴(kuò)張以及污染物的排放,環(huán)境中的鎘污染問題日益嚴(yán)重,鎘可以通過食物鏈在人體內(nèi)富集,對人體健康造成嚴(yán)重影響。國內(nèi)的研究者對鎘的毒性進(jìn)行了廣泛的研究,但鎘的毒性機(jī)理仍然不清楚。因此,本研究以小鼠和人Huh-7細(xì)胞為實驗材料,研究鎘的生物毒性,并且利用二維電泳技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)整體的考察小鼠血漿中與鎘中毒相關(guān)的蛋白,并用實時熒光定量PCR技術(shù)分析了其他組織中與差異蛋白相對應(yīng)基因
2、的表達(dá)情況以及鎘脅迫下的人Huh-7細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)情況。從而發(fā)現(xiàn)鎘中毒后潛在的生物標(biāo)志物,進(jìn)一步闡明鎘的生物毒性的分子機(jī)理。其結(jié)果如下:
1.選用小鼠作為實驗材料,添食含有不同濃度鎘的飼料,結(jié)果暴露在104ppm鎘濃度下雄性小鼠6天后全部死亡,而暴露在相同濃度鎘的雌性小鼠全部存活,然后選用暴露在100ppm鎘濃度的雄性小鼠,和對照組即暴露在0ppm鎘濃度的雄性小鼠的血漿進(jìn)行二維電泳分析,獲得了6個蛋白差異點,并利用MA
3、LDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)鑒定到了5個差異蛋白點,與對照組相比鎘誘導(dǎo)上調(diào)的是3個差異點分別是組織相容性抗原Ⅰ類H2,Q10蛋白(H2-Q10,3倍)、主要尿蛋白11(MUP11.38倍)、未鑒定蛋白(3倍);鎘誘導(dǎo)下調(diào)的3個蛋白點是核黃素脫氫酶(Flavinreductase,0.5倍)、過氧化物酶-2(Peroxiredoxin-2,0.52倍)、血紅蛋白-β1(Hemoglobinbeta1,0.47倍),實時熒光定量PCR分析相關(guān)差異
4、蛋白基因在其他組織中的表達(dá)情況表明:鎘對差異蛋白基因在不同組織的表達(dá)影響是不一樣的,差異蛋白基因在其他組織表達(dá)變化與血漿中的蛋白變化不具有一致性。但是,在肝臟中主要尿蛋白11(MUP11)基因的表達(dá)與鎘暴露存在劑量關(guān)系。
2.以人Huh-7細(xì)胞為實驗材料,使其暴露在不同濃度鎘的環(huán)境中,結(jié)果表明鎘濃度大于10μM,會抑制細(xì)胞生長,大于100μM,細(xì)胞死亡。我們檢測了暴露在0、2、5、8μM鎘的人Huh-7細(xì)胞內(nèi)與主要尿蛋白1
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