2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、豬致病性大腸桿菌病是對規(guī)?;B(yǎng)豬生產(chǎn)危害較嚴重的傳染性疾病之一,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。一方面,大腸桿菌的血清型復(fù)雜,致病性大腸桿菌血清型不斷發(fā)生變化,導(dǎo)致免疫失敗,給豬大腸桿菌病的控制增加了困難。另一方面,由于近年來抗生素的廣泛持續(xù)利不當使用,導(dǎo)致大腸桿菌耐藥株的不斷增多,耐藥機制的不斷變遷,使人們對大腸桿菌病的治療變得十分困難。因此,本研究擬利用體內(nèi)誘導(dǎo)抗原技術(shù),希望找到一些大腸桿菌的體內(nèi)誘導(dǎo)基因,并分析它們的功能,從而能進一步了

2、解大腸桿菌病的具體致病機制,為將來發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標,研發(fā)新的疫苗和診斷試劑提供一些新的線索。 體內(nèi)誘導(dǎo)抗原技術(shù)(in vivo—induced antigen technology,IVIAT)是快速鑒定體內(nèi)特異性表達抗原基因的高通量篩檢技術(shù)。其原理是利用體外培養(yǎng)的病原微生物去除感染動物血清中針對體外表達抗原的抗體,再用此吸附血清作為探針來篩選病原微生物基因組表達文庫中體內(nèi)特異性表達抗原的基因,旨在為新藥、新疫苗利新型診斷方法研

3、發(fā)提供新靶標,為進一步闡明病原體致病與免疫機理提供理論依據(jù)。 病原菌感染機體后體內(nèi)誘導(dǎo)表達的抗原通常與病原菌的致病性機制密切相關(guān)。為了研究致病性大腸桿菌感染機體過程中存在的致病因子,本研究采用了體內(nèi)誘導(dǎo)抗原技術(shù),以致病性大腸桿菌O139為研究對象,對其在體內(nèi)的表達基因進行了篩選。 首先構(gòu)建了豬源大腸桿菌O139的基因組表達文庫:提取了豬源大腸桿菌O139的基因組,用限制性內(nèi)切酶Sau3AI不完全酶切并回收1~4Kb的基因

4、組DNA片段。限制性內(nèi)切酶BamHI酶切原核表達載體pET-32a(+),回收線性載體,用CIAP去磷酸化。將上述兩種酶切回收DNA片段進行連接反應(yīng),轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a,堿裂解法提取重組質(zhì)粒,用 XhoI和 NcoI雙酶切的方法對提取的重組質(zhì)粒進行鑒定,鑒定結(jié)果達到符合要求。把大量提取的重組質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)入新鮮制備的感受態(tài)細胞BL21中,計算表達文庫的庫容量,經(jīng)過計算文庫容量為1.2×104,滿足了我們研究工作的需要,之后隨機挑取10個克

5、隆用上述雙酶切方法鑒定文庫.結(jié)果顯示隨機挑選的10個克隆都為陽性克隆,酶切后載體片段約為5.9Kb,插入片段基本位于2~4Kb之間。說明大腸桿菌基因組O139的表達文庫構(gòu)建的比較成功,為進一步篩選大腸桿曲體內(nèi)誘導(dǎo)基因奠定了良好的基礎(chǔ)。 然后對大腸桿菌基因組表達文庫進行了篩選:收集感染致病性大腸桿菌仔豬的血清,用玻板凝集法檢測仔豬血清抗體,比較符合率,符合率為30%(3/10),與菌株血清型鑒定一致。用經(jīng)體外培養(yǎng)的大腸桿菌菌株O1

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