慢性乙型肝炎患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶 2及其組織抑制因子的變化及臨床意義

1、<p>　　慢性乙型肝炎患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶 2及其組織抑制因子的變化及臨床意義</p><p>　　【摘要】 　　目的： 觀察血清基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）及其組織抑制因子（TIMP2）與慢性乙型肝炎患者肝纖維化程度的相關(guān)性. 方法： 用ELISA方法檢測60例慢性乙型肝炎患者的血清MMP2和TIMP2的含量，并與20例健康人員作對比，分析二者與患者肝纖維化程度之間的關(guān)系. 結(jié)果： 慢

2、性乙型肝炎重度患者血清MMP2和TIMP2的水平分別較對照組、慢性乙型肝炎輕、中度升高（P&lt;0.05）；而慢性乙型肝炎輕、中度患者的MMP2和TIMP2水平與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P&gt;0.05）. 慢性乙型肝炎輕、中度患者的MMP2, TIMP2比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P&gt;0.05）. 血清MMP2, TIMP2水平分別與肝纖維化程度有相關(guān)，二者的相關(guān)系數(shù)r值分別為0.851, 0.

3、623，P值均&lt;0.01. 結(jié)論： 患者血清中MMP2, TIMP2水平隨慢性乙型肝炎病情的加重而升高，并與肝纖維化程度有相關(guān). </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 明膠酶A；金屬蛋白酶2組織抑制劑；肝炎，乙型，慢性 </p><p>　　【Abstract】 AIM: To investigate the relationship of the levels o

4、f serum matrix metalloproteinase2 (MMP2) and tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2) with hepatic fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B. METHODS: Serum levels of MMP2 and TIMP2 were measured b

5、y ELISA in 60 patients with chronic hepatitis C and 20 healthy controls. RESULTS: The serum MMP2 and TIMP2 levels were significantly increased in severe chronic hepatitis B, but not in mild and moderate chroni</

6、p><p>　　【Keywords】 gelatinase A; tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2); hepatitis B, chronic </p><p><b>　　0引言 </b></p><p>　　慢性乙型肝炎后，易發(fā)生肝纖維化，進而發(fā)展為肝硬化、肝癌. 目前的研究表明

7、，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其組織抑制劑（TIMPs）可調(diào)節(jié)肝細胞外基質(zhì)（ECM）的代謝，肝纖維化的發(fā)生就是由于ECM合成增多，降解減少而在肝內(nèi)過度沉積所致［1-4］. 其中，MMPs促進ECM降解，而TIMPs通過抑制MMPs阻止ECM的降解從而促進肝纖維化. 肝臟MMPs的活性受抑，同時TIMPs的功能活性增強，導(dǎo)致了細胞外基質(zhì)的降解減少. 肝纖維化時，在ECM降解過程中起主要作用的MMPs是MMP1, MMP2, MMP3

8、, MMP9［5］，其中MMP2與肝纖維化的關(guān)系較為密切. 因此，本實驗我們觀察了60例慢性乙型肝炎患者及20例健康人員MMP2和TIMP2血清水平的變化，探討其與肝纖維化程度的相關(guān)性. </p><p><b>　　1對象和方法 </b></p><p><b>　　1.1對象 </b></p><p>　　慢性

9、乙型肝炎組 60（男30，女30）例，年齡(35.6±13.7)歲，均為我院200201/200701住院及門診患者，所有病例均被我院臨床明確診斷為慢性乙型肝炎患者，符合1995年北京全國病毒性肝炎會議制定的診斷標準（包括體征、超聲、生化系列檢測、血清抗HBsAg為陽性）. 正常對照組20例，均系健康體檢者，無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，肝、腎功能試驗正常，HBsAg為陰性. </p><p>&

10、lt;b>　　1.2方法 </b></p><p>　　1.2.1 血樣標本 </p><p>　　采集所有實驗對象均采取空腹靜脈血后，立即分離血清，-20℃保存待測. </p><p>　　1.2.2肝活檢方法及病理診斷標準 </p><p>　　每例患者在穿刺前，均行B超定位檢查. 采用1s肝穿刺活檢法，使用16G活檢針

11、，由配套活檢槍行經(jīng)皮肝穿術(shù)，取肝組織標本送病檢，連續(xù)切片，分別做HE及網(wǎng)狀纖維染色，病理炎癥分級按照1995年國家衛(wèi)生部制訂的《病毒性肝炎防治方案》的病理診斷標準判斷. 60例均有不同程度的炎癥反應(yīng)及不同程度的纖維化或肝硬變. </p><p>　　1.2.3血清MMP2和TIMP2測定 </p><p>　　均采用ELISA方法檢測（試劑購自USA R＆D Systems Inc）.

12、按試劑盒說明書操作. </p><p>　　統(tǒng)計學(xué)處理：各指標以x±s表,示用統(tǒng)計軟件SPSS12.0進行統(tǒng)計學(xué)處理，各組均數(shù)比較用方差分析及LSDt檢驗. MMP2, TIMP2分別與肝纖維化分期作相關(guān)性分析. </p><p><b>　　2結(jié)果 </b></p><p>　　在不同炎癥活動度下，慢性乙型肝炎組與正常對照組的

13、血清MMP2, TIMP2水平比較見表1. 可見慢性乙型肝炎重度患者的血清MMP2, TIMP2含量與正常對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P&lt;0.05）. 慢性乙肝輕、中度患者的血清MMP2, TIMP2含量與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異（P&gt;0.05）. 慢性乙肝輕、中度患者的血清MMP2, TIMP2含量的比較亦無統(tǒng)計學(xué)差異（P&gt;0.05）. 表1正常組與患者肝組織炎癥活動度與血清M

14、MP2, TIMP2水平的關(guān)系 （略） </p><p>　　在不同肝纖維化程度下，慢性乙型肝炎組與正常對照組的血清MMP2, TIMP2水平比較見表2. 慢性乙型肝炎患者隨肝纖維化程度的加重，其MMP2, TIMP2的血清水平逐漸升高，且升高幅度不斷加大，與正常對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P&lt;0.01）. 通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，MMP2, TIMP2的血清水平與肝纖維化程度的相關(guān)系數(shù)r

15、分別為0.851, 0.623，P值均&lt;0.01，具有一定的正相關(guān)性. </p><p><b>　　3討論 </b></p><p>　　各種慢性肝病患者均會逐漸出現(xiàn)不同程度的肝纖維化，進而向肝硬化發(fā)展. 肝纖維化的實質(zhì)［6-9］是以Ⅰ, Ⅲ型膠原為主的細胞外基質(zhì)(ECM)合成與降解失衡，導(dǎo)致ECM在肝內(nèi)過度沉積. 基質(zhì)金屬蛋白酶類(MMPs) 和金屬

16、蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)的平衡在ECM的合成與降解中發(fā)揮著重要的作用.表2正常組與患者在不同肝臟纖維化程度下血清MMP2, TIMP2的含量（略） </p><p>　　MMPs［10］是一類含有Zn2+的肽鏈內(nèi)切酶，幾乎能水解所有的細胞外基質(zhì). 迄今為止，MMPs 家族中已發(fā)現(xiàn)有26 個成員，但它們的降解底物及功能各不相同. TIMPs則是近年被發(fā)現(xiàn)的一組能夠特異性抑制MMPs活性的蛋白質(zhì)，其家族成

17、員有4個，分別命名為TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4，均為小分子多肽. TIMPs分為N端和C端兩個功能區(qū)，前者的半胱氨酸殘基與MMPs的Zn2+活性中心結(jié)合，后者與MMPs的其他部位結(jié)合，以1∶1 非共價結(jié)合的形式構(gòu)成MMPs TIMPs復(fù)合體，從而阻斷MMPs與其底物結(jié)合，是一種轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機制. 在正常肝臟中MMPs 和TIMPs 處于平衡的狀態(tài)，兩者共同維護肝臟的微環(huán)境穩(wěn)態(tài),一旦有致病因子打破這種平衡

18、,便會促進肝纖維化的發(fā)生. MMP2, MMP9 和MMP3對正常肝臟基質(zhì)有降解活性［11］. 其中MMP2的特異性底物為Ⅳ型膠原，TIMP2調(diào)節(jié)MMP2的活性，故MMP2, TIMP2在肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用. 所以，對MMP2及其抑制物TIMP2在肝纖維化病理損害中的變化過程進行分析是很</p><p>　　為此，我們在本實驗中對60例慢性乙型肝炎患者血清MMP2, TIM

19、P2水平與炎癥活動度及肝纖維化程度的關(guān)系進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎重度患者的MMP2,TIMP2血清水平高于正常對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義（P&lt;0.05）. 并且隨著患者肝纖維化程度的加重，MMP2，TIMP2的血清含量逐漸升高，幅度不斷加大，相關(guān)性分析說明二者與肝纖維化程度呈明顯的正相關(guān). 可見，MMP2，TIMP2血清水平不僅可以作為肝纖維化的診斷指標之一，還可用于判斷慢性乙型肝炎病情輕重，在此領(lǐng)域具有

20、一定的臨床意義. </p><p><b>　　【參考文獻】 </b></p><p>　?。?］Pazienza V, Clement S, Pugnale P, et al. The hepatitis C virus core protein of genotypes 3a and 1b downregulates insulin receptor substr

21、ate 1 through genotypespecific mechanisms［J］. Hepatology, 2007, 45(5):1164-1171. </p><p>　?。?］韓志啟,秦守杰,朱增紅.干擾素a2a對慢性乙型肝炎肝纖維化的療效觀察［J］. 醫(yī)藥論壇雜志,2003,24(17):17-18. </p><p>　?。?］韓捷，陳海燕，李揚，等. 秦巴山區(qū)HCM

22、V感染母嬰垂直傳播與HcmvgB基因分型的關(guān)系［J］. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2006，27（15）：1425-1427. </p><p>　?。?］Vizzutti F, Arena U, Romanelli RG, et al. Liver stiffness measurement predicts severe portal hypertension in patients with HCVrelate

23、d cirrhosis ［J］. Hepatology, 2007, 45(5):1290-1297. </p><p>　?。?］Ozdemir A, Yalinbas B, Selamet U, et al. The effect of hepatitis C virus infection on insulin resistance in chronic haemodialysis patients ［J］

24、. Yonsei Med J, 2007,48(2):274-80. </p><p>　?。?］王曉波.乙型肝炎的實驗室診斷［J］. 中國保健, 2006,14（24）：80-81. </p><p>　　［7］郭西萍，鐘基大，馮紅平，等. 血清HA, LN, PC含量與慢性肝炎病理變化的關(guān)系［J］. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志, 2000, 10(6)：19-20. </p>

25、<p>　?。?］徐慶杰. 苦參素聯(lián)合拉米夫定治療慢性乙型肝炎對肝纖維化指標的影響［J］. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2005，26（8）：732-733. </p><p>　?。?］CollierI E, Wilhelm SM, Eisen AZ, et al. Haras oncogene transformed human bronchial epithelial cells(TBEl)secrete

26、a single metalloproteinase capable of degrading basement membrane collagen［J］. J Biol Chem, 1988, 263(14);6579-6587. </p><p>　?。?0］岳蘭萍,馬紅,賈繼東. 基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子與肝纖維化［J］. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2006, 15(6):627-629. </p&g