草莓NBS-LRR家族基因的克隆和表達(dá)分析與白粉病抗性相關(guān)分子標(biāo)記的研究.pdf

1、草莓白粉病是由Sphaerotheca macularis病原體引起的真菌性病害，是世界各地草莓生產(chǎn)上的主要病害，嚴(yán)重影響草莓的品質(zhì)和產(chǎn)量。充分挖掘抗病基因資源，選育出優(yōu)質(zhì)抗病新品種是防治白粉病發(fā)生的根本途徑，這是當(dāng)今草莓育種的一個(gè)重要課題。通過跟蹤觀察雜交后代群體的田間表型，評價(jià)篩選出高抗和高感草莓單株，構(gòu)建了F2分析作圖群體。利用微衛(wèi)星分子標(biāo)記（SSR）對親本Darselect與Sweet Charlie的雜種F1代和F2代雜交群體

2、進(jìn)行了初步研究。運(yùn)用同源克隆結(jié)合RACE技術(shù)從久香草莓的莖尖cDNA中分離得到一個(gè)抗病相關(guān)TIR-NBS-LRR類基因FaNBS1（GenBank登錄號：HQ845018），解析了該基因及其編碼蛋白的組織結(jié)構(gòu)和同源特征，并采用半定量RT-PCR技術(shù)分析了該基因在不同組織中的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果如下：
　　 1）利用改良的CTAB法優(yōu)化了草莓基因組DNA的提取方法。
　　 2）建立和優(yōu)化了聚丙烯酰胺凝膠電泳的快速

3、銀染方法。
　　 3）利用146對SSR引物，在親本和F1間篩選出19對在親本中存在差異且在F1中共顯的引物，對150個(gè)F2 群體及雙親樣本進(jìn)行了SSR-PCR擴(kuò)增，共獲得7個(gè)與草莓白粉病抗性相關(guān)的SSR標(biāo)記，分別為： FSS6、FSS40、FSS50、FSS60、FSS65、FSS121、FSS128。對這7對標(biāo)記進(jìn)行遺傳分析，應(yīng)用生物軟件Mapmaker3.0和WinQTLCart2.5進(jìn)行連鎖分析并作圖。初步構(gòu)建了包含7個(gè)

4、SSR標(biāo)記位點(diǎn)，兩個(gè)連鎖群的遺傳連鎖圖譜，平均遺傳圖距8.85cM。
　　 4）FaNBS1基因在基因組上長為2434 bp, 由3個(gè)外顯子組成的轉(zhuǎn)錄本包含長1893bp的讀碼框。所編碼蛋白含630個(gè)氨基酸殘基，在15-146是保守的TIR結(jié)構(gòu)域，191-492是NB-ARC結(jié)構(gòu)域。FaNBS1與大豆TIR-NBS-LRR抗性蛋白ADF78118的全序列一致性為50.20%，在NB-ARC保守結(jié)構(gòu)域的一致性為52.06%。半定量