藍(lán)狐僵化病病因的遺傳分析.pdf

1、藍(lán)狐（Alopex lagopus）是國(guó)內(nèi)家養(yǎng)數(shù)量最多狐貍品種，由于其毛皮顏色變異較多，毛皮質(zhì)量上乘，是具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的毛皮動(dòng)物。然而藍(lán)狐僵化病的出現(xiàn)給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了極大的損失，進(jìn)而影響了整個(gè)藍(lán)狐養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。近年來(lái)，我國(guó)許多研究所及高校對(duì)該病進(jìn)行了多方面的研究，然而該病一直沒(méi)有找到特異性防治及治療的措施。
　　本論文(1)以大興安嶺地區(qū)圖強(qiáng)林業(yè)局藍(lán)狐養(yǎng)殖基地的40只健康藍(lán)狐和60只患僵化病藍(lán)狐為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用隨機(jī)擴(kuò)增微衛(wèi)星

2、多態(tài)性(random amplified microsatellitepolymorphism，RAMP)進(jìn)行遺傳多樣性檢測(cè)。(2)以哈爾濱巴彥華強(qiáng)皮草有限公司飼養(yǎng)場(chǎng)的30只健康藍(lán)狐和30只患有僵化病藍(lán)狐為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，運(yùn)用尾分析法尋找與僵化病有關(guān)的差異標(biāo)記，進(jìn)而分析發(fā)病的遺傳原因，為今后的實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。本論文主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)在RAMP標(biāo)記檢測(cè)中，22個(gè)引物組合能夠擴(kuò)增出清晰并具有多態(tài)性的條帶。在對(duì)照組的40只

3、健康藍(lán)狐個(gè)體中，總共產(chǎn)生194條帶，其中多態(tài)性條帶有134條，占總條帶數(shù)的69.07％，每個(gè)引物擴(kuò)增出4～8條多態(tài)性帶，平均為6.09條。在實(shí)驗(yàn)組的60只患僵化病藍(lán)狐個(gè)體中，共產(chǎn)生154條帶，其中多態(tài)性條帶有53條，占總條帶數(shù)的34.42％，每個(gè)引物擴(kuò)增出1～4條多態(tài)性帶，平均為2.41條。對(duì)比兩組的多態(tài)性比率、遺傳距離指數(shù)及聚類分析的結(jié)果表明健康藍(lán)狐種群內(nèi)遺傳多樣性較高，遺傳變異豐富，而患僵化病藍(lán)狐種群內(nèi)遺傳多樣性相對(duì)較低，遺傳分化程

4、度不高，遺傳變異較低，即藍(lán)狐人工授精導(dǎo)致的近親繁殖所致。
　　(2)尾分析法對(duì)藍(lán)狐僵化病相關(guān)的特異片段進(jìn)行遺傳分析。用120條隨機(jī)引物分別對(duì)兩組DNA池進(jìn)行RAPD擴(kuò)增檢測(cè)，初步篩選出12條產(chǎn)生清晰、穩(wěn)定擴(kuò)增產(chǎn)物的引物，在兩組以相同條件又進(jìn)行3次重復(fù)擴(kuò)增。結(jié)果顯示，有4條引物穩(wěn)定擴(kuò)增出能將健康藍(lán)狐和患僵化病藍(lán)狐區(qū)分開(kāi)的差異條帶，分別是引物A7、A11、A19及E10。
　　(3)對(duì)引物A7的1號(hào)條帶（特異片段）進(jìn)行克隆測(cè)序，

5、所測(cè)得的序列長(zhǎng)度為1851bp，通過(guò)NCBI中的Blast序列比較分析，該序列與家犬XX-7d6全序列同源性達(dá)96％。
　　(4)對(duì)引物A11的1號(hào)、3號(hào)條帶進(jìn)行克隆測(cè)序，1號(hào)條帶的基因序列長(zhǎng)度為1847bp，通過(guò)NCBI中的Blast序列比較分析，該序列與豬DNA序列ch242-423 m21X號(hào)染色體的同源性達(dá)82％;而3號(hào)條帶所測(cè)得的基因序列的長(zhǎng)度為956 bp，通過(guò)NCBI中的Blast序列比較分析，沒(méi)有找到同源性，推測(cè)序

6、列可能是僵化病藍(lán)狐基因組中的變異序列。
　　(5)對(duì)引物A19的1號(hào)、5號(hào)條帶進(jìn)行克隆測(cè)序，1號(hào)條帶和5條號(hào)帶的基因序列的長(zhǎng)度分別為2442bp和467bp，通過(guò)NCBI中的Blast序列比較分析，都沒(méi)有找到同源性，推測(cè)序列可能是僵化病藍(lán)狐基因組中的變異序列。
　　(6)對(duì)引物E10的1號(hào)、4號(hào)條帶進(jìn)行克隆測(cè)序，1號(hào)條帶的基因序列的長(zhǎng)度為2854bp，通過(guò)NCBI中的Blast序列比較分析，該序列與家犬DNA序列XX-266

7、c17的同源性達(dá)97％;與家犬34號(hào)染色體上的XX-67L19完整序列同源性達(dá)97％;與家犬X染色體上的XX-272C1同源性達(dá)95％;與狗的DNA序列rp81-70i6同源性達(dá)95％;而4號(hào)條帶的基因序列的長(zhǎng)度為954bp，通過(guò)NCBI中的Blast序列比較分析，沒(méi)有找到同源性，推測(cè)序列可能是僵化病藍(lán)狐基因組中的變異序列。
　　(7)找到的差異標(biāo)記對(duì)大興安嶺地區(qū)的健康藍(lán)狐和患病藍(lán)狐進(jìn)行的檢測(cè)及驗(yàn)證，計(jì)算出差異標(biāo)記在群體的檢出率分