安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠重要器官損傷及死亡率的影響

1、<p>　　安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠重要器官損傷及死亡率的影響</p><p>　　作者：張丹，黃萍，李俊，胡質(zhì)毅，王艷麗</p><p>　　【摘要】 【目的】觀察安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠重要器官損傷及死亡率的影響?！痉椒ā窟x用SD大鼠，隨機(jī)分為正常對照組，模型組，安宮牛黃丸低、中、高劑量組(中藥低、中、高劑量組，劑量分別為10、20、30 g·kg-1·

2、;d-1)。除正常對照組外，其他組均采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法復(fù)制腹腔感染型膿毒癥模型，中藥低、中、高劑量組分別于造模前05 h和造模后6 h灌胃給藥，觀察24 h大鼠死亡率，檢測造模24 h后各組大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TB)和肌酐(Cr)含量及肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性?！窘Y(jié)果】模型組血清ALT、TB水平，肺組織MPO活性及24 h死亡率均顯著升高(P&lt;005或P&lt;00

3、1)。中藥低、中、高劑量組可顯著降低肺組織MPO活性(P&lt;005或P&lt;001)，其中低劑量組可顯著降低血清TB水平(P&lt;005)，低、中劑量組還可顯著降低24 h死亡率(P&lt;005)?！窘Y(jié)論】安宮牛黃丸可降低膿毒癥大鼠的死亡率，并對肺、肝等重要器官有一定的保護(hù)作用。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 安宮牛黃丸/藥理學(xué);膿毒癥/中藥療法;疾病模型，

4、動(dòng)物;大鼠</p><p>　　膿毒癥(sepsis)是嚴(yán)重創(chuàng)(燒)傷、休克、外科大手術(shù)后常見的并發(fā)癥，其本質(zhì)上是一個(gè)失控的全身自我破壞性炎癥反應(yīng)過程[1-2]。膿毒癥屬于中醫(yī)溫?zé)岵》懂?，是由于火毒熾盛、正氣虧虛，正不勝邪、邪毒?nèi)陷，客入營血所致[3]。安宮牛黃丸是中醫(yī)治療溫?zé)岵〉摹叭龑殹敝唬彩侵嗅t(yī)危重病癥急救要藥。本文觀察了安宮牛黃丸對盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法復(fù)制膿毒癥模型大鼠重要器官功能及死亡率的影響，現(xiàn)

5、報(bào)道如下。</p><p><b>　　1材料與方法</b></p><p>　　11主要藥物、試劑與儀器安宮牛黃丸由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn)(批號：5010279)，水合氯醛由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)(批號：20071210)，髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性檢測試劑盒由南京建成科技有限公司提供(批號：071103)，A

6、U5421全自動(dòng)生化檢測儀由日本Olympus公司生產(chǎn)。</p><p>　　12動(dòng)物模型制備清潔級SD大鼠90只，雌雄各半，體質(zhì)量180~220 g，購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號：0031637。在Wichterman[4-5]方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，復(fù)制腹腔感染型膿毒血癥。術(shù)前禁食12 h，用100 mg/L水合氯醛按15 mL/kg的劑量腹腔注射麻醉大鼠，常規(guī)消毒腹部，在下腹部正中央切口，長約2 c

7、m，打開腹腔尋找盲腸與小腸及大腸交界處，用滅菌4號絲線環(huán)形結(jié)扎，結(jié)扎完畢后仔細(xì)檢查，保持腸道通路正常。在與腸系膜相對的盲端腸壁漿膜面用9號針頭穿刺2次，2個(gè)針孔相距約3 mm，第1針孔距盲端約3 mm，同時(shí)在第2針孔處放置1條寬2 mm的橡膠引流片，防止傷口愈合，輕輕將腸管放回原處，關(guān)閉腹腔，逐層縫合。術(shù)后即刻皮下注射生理鹽水，補(bǔ)充手術(shù)過程中體液的丟失，劑量10 mL/kg。</p><p>　　13動(dòng)物分組及

8、給藥將90只大鼠隨機(jī)分為正常對照組(10只)、模型組(20只)和中藥低、中、高劑量組(各20只)。取中藥臨床劑量的10、20、30倍分別作為低、中、高劑量。中藥低、中、高劑量組分別于術(shù)前05 h和術(shù)后6 h按10、20、30 g·kg-1·d-1劑量灌胃安宮牛黃丸。正常對照組和模型組動(dòng)物灌胃飲用水。觀察記錄24 h動(dòng)物死亡率，24 h后各組動(dòng)物活殺，檢測血清及肺組織有關(guān)指標(biāo)的變化。</p>&l

9、t;p>　　14標(biāo)本的采集和處理無菌狀態(tài)下腹主動(dòng)脈采血，用肝素鈉抗凝，3 000 r/min離心15 min，取血漿于-20℃保存。無菌狀態(tài)下取肺組織200 mg，加入18 mL生理鹽水在冰浴下勻漿，3 000 r/min離心15 min，取上清液。</p><p>　　15指標(biāo)檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TB)、肌酐(Cr)含量采用全自動(dòng)生化分析儀測定，肺組織MPO活性檢測采用酶學(xué)

10、分光光度法。</p><p>　　16統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 130統(tǒng)計(jì)軟件包，對計(jì)量資料進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。</p><p><b>　　2結(jié)果</b></p><p>　　21安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠死亡率的影響 與正常對照組比較，模型組死亡率顯著增高(P&lt;001)。中藥低、中劑量組死亡率與模型組

11、比較顯著降低(P&lt;005)，中藥高劑量組死亡率雖然低于模型組，但差異無顯著性意義(P&gt;005)。結(jié)果見表1。</p><p>　　22安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠重要器官損傷的影響大鼠經(jīng)CLP手術(shù)造模后，出現(xiàn)活動(dòng)減少、反應(yīng)遲鈍、嗜睡、豎毛、進(jìn)食減少、不飲水、腹瀉及部分出現(xiàn)呼吸急促等現(xiàn)象，與臨床所見的膿毒癥表現(xiàn)比較相似。</p><p>　　CLP術(shù)后24 h模型

12、組大鼠血清ALT、TB水平顯著高于正常對照組(P&lt;005)，表明膿毒癥大鼠肝臟有一定的損傷。中藥干預(yù)后24 h各劑量組大鼠的ALT水平無顯著改善(P&gt;005)。中藥低量劑組能顯著降低膿毒癥大鼠的血清TB水平(P&lt;005)，而中、高劑量組對膿毒癥大鼠血清TB有降低的趨勢，但與模型組比較差異無顯著性意義(P&gt;005)。</p><p>　　模型組大鼠血清

13、Cr水平無顯著變化(P&gt;005)，說明CLP大鼠造模24 h腎臟功能尚無顯著的損害。中藥各劑量組干預(yù)后大鼠血清Cr水平也未出現(xiàn)顯著改變(P&gt;005)。</p><p>　　模型組大鼠肺組織中MPO活性顯著升高(P&lt;005)，表明CLP膿毒癥大鼠肺組織炎癥損傷明顯。中藥低、中、高劑量組干預(yù)可以顯著降低肺組織MPO活性(P&lt;005或P&lt;0

14、01)，減輕膿毒癥對肺組織的炎癥損傷。結(jié)果見表2。表1各組膿毒癥大鼠24 h死亡率比較表2各組膿毒癥大鼠重要器官損傷比較</p><p><b>　　3討論</b></p><p>　　膿毒癥是多種疾病在發(fā)生發(fā)展過程中所表現(xiàn)出來的一種共同的病理生理過程。主要由感染性因素引起，如革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、真菌、病毒等致病微生物入侵所致。這些感染因素迅速激活機(jī)體非特異免疫系

15、統(tǒng)釋放大量早期和晚期炎癥介質(zhì)，誘發(fā)失控性炎癥反應(yīng)(SIRS)，進(jìn)一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征(MODS)甚至死亡[6]。近20年來，盡管人們采取了許多抗炎方法干預(yù)膿毒癥的病理過程，但是臨床療效并不理想[7]。</p><p>　　安宮牛黃丸出自我國清代著名溫病學(xué)家吳鞠通著作《溫病條辨》，該方由牛黃、犀角、黃連、黃芩、梔子、郁金、麝香、珍珠、朱砂、雄黃、冰片等11味中藥組成，具有清熱解毒、芳香辟穢

16、、開竅通閉之功效，對溫?zé)岵∮歇?dú)特的療效。臨床應(yīng)用安宮牛黃丸及其類方治療膿毒癥取得較好療效[8-9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠表現(xiàn)出與臨床膿毒癥者相似的癥狀，大鼠肝、肺等器官損傷明顯，死亡率高達(dá)55%。安宮牛黃丸低、中劑量組能顯著降低膿毒癥大鼠的死亡率，驗(yàn)證了安宮牛黃丸對膿毒癥的治療作用。</p><p>　　膽紅素代謝和肝臟關(guān)系密切，肝細(xì)胞對膽紅素的攝取、結(jié)合、排泄過程發(fā)生障礙可致血清總膽紅素升高。膿毒癥大鼠血

17、清總膽紅素升高，在一定程度上反映了膿毒癥對大鼠肝臟的損傷，安宮牛黃丸低劑量組能顯著降低膿毒癥大鼠的血清總膽紅素水平(P&lt;005)，提示安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠的肝臟功能具有一定的保護(hù)作用。</p><p>　　MPO是中性粒細(xì)胞(PMN)特有的還原酶，主要存在于PMN的嗜天青顆粒中，且每個(gè)細(xì)胞所含酶的量是恒定的，約占細(xì)胞干質(zhì)量5%，故可以通過組織MPO活性定量測定PMN的數(shù)目，肺組織中MPO活性高低

18、可定量反映PMN扣押與聚集的程度[10-11]。實(shí)驗(yàn)性膿毒癥大鼠肺組織中的PMN浸潤，應(yīng)與肺臟特殊的解剖學(xué)和生理學(xué)特點(diǎn)有關(guān)。因?yàn)榉闻K不僅是一個(gè)重要的代謝器官，同時(shí)又是全身靜脈血液的過濾器官，各組織臟器所產(chǎn)生并釋放到血液中的代謝產(chǎn)物、活性物質(zhì)都要從肺臟經(jīng)過，且肺臟毛細(xì)血管分支較少，血管長，灌注壓低，血流緩慢，流經(jīng)肺毛細(xì)血管活化的PMN易與內(nèi)皮細(xì)胞接觸并粘附，且粘附后不易被緩慢的血流沖走，因此PMN易聚集于肺臟。而肺組織活化的中性粒細(xì)胞經(jīng)脫

19、顆粒作用，釋放彈性蛋白酶、MPO和金屬酶等多種蛋白酶，分解胞外纖維與基質(zhì)，可導(dǎo)致肺組織損傷[12]。因此MPO活性的高低在一定程度上可以反映肺組織的損傷程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CLP術(shù)后24 h大鼠肺組織中MPO活性顯著升高，安宮牛黃丸低、中、高劑量組可以顯著降低肺組織MPO的活性，減輕膿毒癥對肺組織的損傷，提示安宮牛黃丸對膿毒癥大鼠的肺臟具有一定的保護(hù)作用。</p><p>　　綜上所述，安宮牛黃丸可不同程度地降

20、低膿毒癥大鼠的死亡率，并對肺、肝等重要器官功能具有一定的保護(hù)作用。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1]Bone R C,Sprung C L,Sibbald W JDefinitions for sepsis and organ failure [J].Crit Care Med,1992,20:724.</p>

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