野生稻候選抗病基因的克隆及白葉枯抗性鑒定.pdf

1、野生稻中含有豐富的有利基因，尤其是抗病蟲(chóng)基因，但由于生殖隔離及遺傳背景知識(shí)匱乏等限制，使傳統(tǒng)雜交轉(zhuǎn)育及常用的抗性基因克隆方法都難以在野生稻中利用。本實(shí)驗(yàn)將RGAs（抗病基因同源序列）技術(shù)與基于RecA蛋白的文庫(kù)富集技術(shù)相結(jié)合，篩選含有豐富抗病蟲(chóng)基因的小粒野生稻pCAMBIA1301液體基因組文庫(kù)，獲得STK（絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶）類陽(yáng)性克隆11個(gè)，對(duì)末端測(cè)序結(jié)果分析表明，4個(gè)克隆可定位于抗性基因附近或抗性基因內(nèi)，有可能為新的候選抗病基

2、因。有3個(gè)無(wú)法在粳稻和秈稻中定位，可能為小粒野生稻特有的序列。獲得NBS（核苷酸結(jié)合位點(diǎn)）類陽(yáng)性克隆55個(gè)，對(duì)其中27個(gè)陽(yáng)性克隆末端測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析，其中1個(gè)陽(yáng)性克隆定位于抗性基因內(nèi)，另外一些陽(yáng)性克隆雖然可定位于粳稻相關(guān)區(qū)段，但對(duì)這些區(qū)段研究不是很清楚。而大多數(shù)與粳稻或秈稻匹配很低，與小粒、澳洲等野生稻有高匹配。采用LA-PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得東鄉(xiāng)野生稻RPS2候選抗病基因，分析表明其在LRR（富含亮氨酸重復(fù)序列）出現(xiàn)缺失，田間白葉枯鑒定結(jié)